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人重组白细胞介素11在毕氏酵母系统中的表达及纯化 被引量:8
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作者 朱剑昆 许志祥 +4 位作者 黄伟达 闵太善 谢炜 徐颖 张学光 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期127-131,共5页
目的 在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达人白细胞介素-11( rhIL-11),便于进一步开发。方法 以人工设计合成的 rhIL-11基因,构建表达载体 pPICZα A-IL-11,经线性化后电转化导入毕氏酵母菌株 KM71,甲醇诱导表达,用 EL... 目的 在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达人白细胞介素-11( rhIL-11),便于进一步开发。方法 以人工设计合成的 rhIL-11基因,构建表达载体 pPICZα A-IL-11,经线性化后电转化导入毕氏酵母菌株 KM71,甲醇诱导表达,用 ELISA和 SDS-PAGE检测发酵上清中 IL-11的抗原性和表达量,用 IL-11依赖的 B9-11细胞株分析其生物学活性,采用疏水层析、离子交换和凝胶过滤纯化发酵上清中的 IL-11。 结果 序列分析表明,克隆载体中 IL-11人工基因序列与设计相符;基因工程菌株 KM71-2424在摇瓶培养上清中 IL-11的表达量超过 60 mg/L,生物学活性测定显示其比活性为 5.5× 107 U/mg,而标准品的生物学活性为 2.2× 107 U/mg。经过三步层析纯化得到电泳纯的 rhIL-11蛋白质。结论 成功获得 IL-11人工基因和稳定分泌重组蛋白的基因工程菌株 KM71-2424,该重组蛋白的生物学活性显著高于大肠杆菌表达的标准品,并获得较高纯度的重组蛋白。 展开更多
关键词 重组人白细胞介素-11 毕氏酵母 表达 分离 纯化
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Graves病患者外周血IL-6、TNF-α水平表达的变化及意义 被引量:14
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作者 董吉祥 谢莹 +6 位作者 汪寅 石永兵 沈华英 刘志达 韩惠琴 谢炜 张学光 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期378-380,共3页
目的:探讨IL-6、TNF-α与Graves病(GD)发病之间的联系及其意义。方法:采用ELISA法测定83例GD患者治疗前后外周血IL6、TNFα水平变化,并与T3、T4、FT3、FT4、TSH作多元相关性分析。结果:(1)GD患者IL6、TNFα水平显著高于正常人(P<0.00... 目的:探讨IL-6、TNF-α与Graves病(GD)发病之间的联系及其意义。方法:采用ELISA法测定83例GD患者治疗前后外周血IL6、TNFα水平变化,并与T3、T4、FT3、FT4、TSH作多元相关性分析。结果:(1)GD患者IL6、TNFα水平显著高于正常人(P<0.0001),且两者间呈正相关(P<0.001)。(2)IL6、TNFα与T3、T4、FT3、FT4均呈正相关(P<0.001),而与TSH呈负相关(P<0.001)。(3)经治疗后IL6、TNFα水平明显下降(P<0.001),但仍高于对照组(P<0.01)。结论:推测IL6、TNF异常升高可能与GD免疫学发病机制有关,经治疗后IL6、TNFα水平明显下降,提示抗甲状腺药物可能具有一定的免疫调节作用。 展开更多
关键词 白介素-6 肿瘤坏死因子-Α GRAVES病
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CD137单抗联合IL-15体外扩增NK细胞及其对肺癌细胞的杀伤活性 被引量:2
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作者 陶家龙 邱玉华 +1 位作者 庄志祥 沈丽琴 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期594-598,共5页
目的:建立CD137单抗联合IL-15体外扩增NK细胞的方案,研究扩增后NK细胞对肺癌细胞的杀伤活性。方法:分离健康人外周血单个核细胞,经免疫磁珠阴性分选获取CD3-CD56+NK细胞,将NK细胞分成对照组、IL-2组、IL-2+CD137单抗组、IL-2+IL-15组、I... 目的:建立CD137单抗联合IL-15体外扩增NK细胞的方案,研究扩增后NK细胞对肺癌细胞的杀伤活性。方法:分离健康人外周血单个核细胞,经免疫磁珠阴性分选获取CD3-CD56+NK细胞,将NK细胞分成对照组、IL-2组、IL-2+CD137单抗组、IL-2+IL-15组、IL-2+CD137单抗+IL-15组进行培养,经锥虫蓝染色法计算NK细胞的扩增倍数,流式细胞术检测NK细胞的表型,LDH酶释放法检测NK细胞对肺癌细胞株A549的杀伤活性,ELISA法检测扩增后NK细胞培养液上清中IFN-γ的分泌量。结果:经磁珠分选后NK细胞纯度为(93.28±3.21)%。IL-2+CD137单抗+IL-15组NK细胞扩增倍数明显高于IL-2+CD137单抗组、IL-2+IL-15组、IL-2组及对照组[(86.20±5.00)vs(60.01±5.00)、(49.06±4.39)、(17.04±1.49)、(3.95+0.23)倍,P<0.01]。IL-2+CD137单抗+IL-15组NK细胞对A549细胞的杀伤效率明显高于其他各组[(93.14±3.27)%vs(83.15±4.03)%、(71.25±3.24)%、(62.27±3.01)%、(49.38±2.35)%,P<0.01]。IL-2+CD137单抗+IL-15组培养液上清中的IFN-γ的分泌水平明显高于IL-2+CD137单抗组、IL-2+IL-15组、IL-2组及对照组[(296.25±9.79)vs(260.47±11.55)、(201.13±6.36)、(138.36±6.09)、(38.42±3.56)pg/ml,P<0.01]。结论:CD137单抗联合IL-15能高效扩增NK细胞,扩增的NK细胞高效杀伤A549肺癌细胞。 展开更多
关键词 NK细胞 CD137单抗 IL-15 IFN-γ肺癌细胞
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Gp130分子的活化在树突状细胞分化和成熟中的意义
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作者 顾宗江 王月丹 +3 位作者 朱一蓓 席泓 古涛 张学光 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期667-670,共4页
目的 :研究激发型抗gp130分子单抗B S12对树突状细胞 (DC)分化成熟和功能的影响。方法 :人外周血单核细胞在GM CSF和IL 4作用下分化为未成熟DC后 ,加入B S12单抗 ,观察它对DC表型、摄取抗原的能力以及DC分泌IL 12、进行混合淋巴细胞反... 目的 :研究激发型抗gp130分子单抗B S12对树突状细胞 (DC)分化成熟和功能的影响。方法 :人外周血单核细胞在GM CSF和IL 4作用下分化为未成熟DC后 ,加入B S12单抗 ,观察它对DC表型、摄取抗原的能力以及DC分泌IL 12、进行混合淋巴细胞反应及趋化T细胞能力的影响 ;同时比较B S12和激发型抗CD4 0单抗 5C11对DC的作用。结果 :激发型抗gp130分子单抗B S12作用于未成熟DC ,可以上调DC上CD1a和共刺激分子CD80、CD86以及成熟DC的标志CD83分子的表达 ,下调CD14的表达 ,降低DC摄取抗原的能力 ,增强DC分泌IL 12、进行混合淋巴细胞反应及趋化T细胞的能力 ,但这些作用都稍弱于 5C11对DC的作用。结论 :未成熟DC上gp130分子的直接活化可以诱导DC的分化和功能成熟。 展开更多
关键词 分化 成熟 树突状细胞 gp130分子 单克隆抗体 DC
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