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分枝结构特异性内切酶-1(FEN1)突变体N266D表达纯化及功能分析
被引量：
1
1
作者
邱秀芹
史崔颖
+4 位作者
孙洪芳
王晓晓
杜佳慧
郭志刚
刘松柏
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期34-37,48,共5页
人源分枝结构特异性内切酶-1(Flap endonuclease 1,FEN1)作为DNA复制及DNA修复过程中重要的参与者,在维护基因组稳定和完整性方面具有不可替代的作用。尽管FEN1在很多肿瘤细胞中的表达都发生异常,但FEN1基因体细胞突变或遗传突变事件在...
人源分枝结构特异性内切酶-1(Flap endonuclease 1,FEN1)作为DNA复制及DNA修复过程中重要的参与者,在维护基因组稳定和完整性方面具有不可替代的作用。尽管FEN1在很多肿瘤细胞中的表达都发生异常,但FEN1基因体细胞突变或遗传突变事件在人体细胞中却很少发生,发表的文献报道较少。前期在白血病患者骨髓细胞中发现了FEN1基因的一种N266D杂合突变体,基于此,成功构建了FEN1-N266D在原核及真核中的表达重组质粒,纯化了原核FEN1-WT、FEN1-N266D蛋白;通过TAMRA标记的DNA底物,检测了FEN、GEN和EXO的3种酶活性,结果发现N266D突变体的FEN、GEN及EXO活性基本不变;RTCA方法检测发现N266D蛋白过表达使细胞增殖能力受到抑制。通过以上对FEN1突变体N266D蛋白的核酸酶活性及对细胞增殖能力影响的分析,为进一步探讨FEN1突变体N266D在肿瘤发生进展中的潜在功能奠定了基础。
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关键词
FEN1
基因突变体
核酸酶活性
细胞增殖
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职称材料
FLT3-ITD插入长度对32D细胞增殖、凋亡及靶向抑制剂敏感性的影响
2
作者
刘松柏
董豪杰
+3 位作者
王隽
邱桥成
薛胜利
李凌
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期1034-1038,共5页
目的:研究FLT3-ITD突变体ITD插入长度对细胞增殖能力、凋亡及靶向抑制剂敏感性的影响,为临床分级治疗FLT3-ITD突变型急性髓系白血病提供数据参考。方法:从先前解析出的ITD序列中挑选3个位置相同或相邻的不同大小的ITD序列,构建FLT3-ITD...
目的:研究FLT3-ITD突变体ITD插入长度对细胞增殖能力、凋亡及靶向抑制剂敏感性的影响,为临床分级治疗FLT3-ITD突变型急性髓系白血病提供数据参考。方法:从先前解析出的ITD序列中挑选3个位置相同或相邻的不同大小的ITD序列,构建FLT3-ITD真核表达质粒;利用慢病毒包被系统建立FLT3-ITD稳定表达32D细胞株;检测FLT3-ITD细胞株细胞增殖情况,经靶向抑制剂AC220处理后的其增殖抑制及凋亡情况。结果:成功构建了ITD1、ITD2和ITD3三株FLT3-ITD稳定表达32D细胞株;ITD1、ITD2和ITD3细胞株在无IL3因子培养基生长条件下48 h后的增殖倍数分别是2.3、3.7和4.3倍;在FLT3小分子抑制剂AC220加药条件下,ITD1、ITD2和ITD3细胞株增殖抑制IC50值分别是0.183、0.446和0.836 nmol/L,凋亡率分别是88.6%、34.2%和16.1%。结论:插入ITD长度长的FLT3-ITD突变体表达细胞在增殖能力和耐受靶向抑制剂AC220的能力方面均增强。
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关键词
FLT3-ITD
急性髓系白血病
插入长度
细胞增殖
凋亡
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职称材料
题名
分枝结构特异性内切酶-1(FEN1)突变体N266D表达纯化及功能分析
被引量：
1
1
作者
邱秀芹
史崔颖
孙洪芳
王晓晓
杜佳慧
郭志刚
刘松柏
机构
苏州卫生职业技术学院苏州市检验医学生物技术重点实验室
南京师范大学生命科学
学院
江苏省分子与
医学
生物技术
重点
实验室
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期34-37,48,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31701198)
江苏省自然科学基金项目(BK20170386)
+2 种基金
江苏省“科教强卫工程”青年医学人才项目(QNRC2016771)
江苏省高层次卫生人才“六个一工程”拔尖人才科研项目(LGY2018087)
苏州卫生职业技术学院研究项目(szwzytd201804,szwzy201804)。
文摘
人源分枝结构特异性内切酶-1(Flap endonuclease 1,FEN1)作为DNA复制及DNA修复过程中重要的参与者,在维护基因组稳定和完整性方面具有不可替代的作用。尽管FEN1在很多肿瘤细胞中的表达都发生异常,但FEN1基因体细胞突变或遗传突变事件在人体细胞中却很少发生,发表的文献报道较少。前期在白血病患者骨髓细胞中发现了FEN1基因的一种N266D杂合突变体,基于此,成功构建了FEN1-N266D在原核及真核中的表达重组质粒,纯化了原核FEN1-WT、FEN1-N266D蛋白;通过TAMRA标记的DNA底物,检测了FEN、GEN和EXO的3种酶活性,结果发现N266D突变体的FEN、GEN及EXO活性基本不变;RTCA方法检测发现N266D蛋白过表达使细胞增殖能力受到抑制。通过以上对FEN1突变体N266D蛋白的核酸酶活性及对细胞增殖能力影响的分析,为进一步探讨FEN1突变体N266D在肿瘤发生进展中的潜在功能奠定了基础。
关键词
FEN1
基因突变体
核酸酶活性
细胞增殖
Keywords
FEN1
mutant
nuclease activity
cell proliferation
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
FLT3-ITD插入长度对32D细胞增殖、凋亡及靶向抑制剂敏感性的影响
2
作者
刘松柏
董豪杰
王隽
邱桥成
薛胜利
李凌
机构
苏州卫生职业技术学院苏州市检验医学生物技术重点实验室
希望之城国家
医学
中心血液肿瘤转化科学系
苏州
大学附属第一医院血液科、江苏省血液学研究所
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期1034-1038,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31701198,81970138)
江苏省自然科学基金(BK20170386)
+2 种基金
江苏省高层次卫生人才“六个一工程”拔尖人才科研项目(LGY2018087)
江苏高校“青蓝工程”优秀青年骨干教师培养项目(2017)
苏州卫生职业技术学院科技创新团队(SZWZYTD201804)。
文摘
目的:研究FLT3-ITD突变体ITD插入长度对细胞增殖能力、凋亡及靶向抑制剂敏感性的影响,为临床分级治疗FLT3-ITD突变型急性髓系白血病提供数据参考。方法:从先前解析出的ITD序列中挑选3个位置相同或相邻的不同大小的ITD序列,构建FLT3-ITD真核表达质粒;利用慢病毒包被系统建立FLT3-ITD稳定表达32D细胞株;检测FLT3-ITD细胞株细胞增殖情况,经靶向抑制剂AC220处理后的其增殖抑制及凋亡情况。结果:成功构建了ITD1、ITD2和ITD3三株FLT3-ITD稳定表达32D细胞株;ITD1、ITD2和ITD3细胞株在无IL3因子培养基生长条件下48 h后的增殖倍数分别是2.3、3.7和4.3倍;在FLT3小分子抑制剂AC220加药条件下,ITD1、ITD2和ITD3细胞株增殖抑制IC50值分别是0.183、0.446和0.836 nmol/L,凋亡率分别是88.6%、34.2%和16.1%。结论:插入ITD长度长的FLT3-ITD突变体表达细胞在增殖能力和耐受靶向抑制剂AC220的能力方面均增强。
关键词
FLT3-ITD
急性髓系白血病
插入长度
细胞增殖
凋亡
Keywords
FLT3-ITD
acute myeloid leukemia
insert length
cell proliferation
apoptosis
分类号
R733.71 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
分枝结构特异性内切酶-1(FEN1)突变体N266D表达纯化及功能分析
邱秀芹
史崔颖
孙洪芳
王晓晓
杜佳慧
郭志刚
刘松柏
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
在线阅读
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职称材料
2
FLT3-ITD插入长度对32D细胞增殖、凋亡及靶向抑制剂敏感性的影响
刘松柏
董豪杰
王隽
邱桥成
薛胜利
李凌
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
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职称材料
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