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利用CRISPRi技术构建乙醛酸生物合成Corynebacterium glutamicum工程菌
被引量：
1
1
作者
梁咏思
沈凯佳
+2 位作者
范许云
韩武洋
李天明
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期170-176,共7页
以谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)为出发菌株,敲除其支流代谢关键酶乳酸脱氢酶合成基因lldh,建立规律间隔成簇短回文重复序列干扰(clustered regularly interspaced short palindromic repeats interference,CR...
以谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)为出发菌株,敲除其支流代谢关键酶乳酸脱氢酶合成基因lldh,建立规律间隔成簇短回文重复序列干扰(clustered regularly interspaced short palindromic repeats interference,CRISPRi)调控体系,并利用该体系下调支流代谢中的关键酶异柠檬酸脱氢酶合成基因icd和苹果酸合成酶合成基因ms的表达强度,同时过表达异柠檬酸裂合酶合成基因icl,强化乙醛酸合成的通路。通过48 h连续监测工程菌和野生菌生长状况,并检测发酵终产物。结果显示:工程菌生长几乎不受影响,发酵液中乙醛酸质量浓度达到5 mg/mL,实现了乙醛酸的积累,为谷氨酸棒状杆菌工业生产乙醛研究提供一定的参考。
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关键词
谷氨酸棒状杆菌
乙醛酸
规律间隔成簇短回文重复序列干扰
工程菌
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职称材料
重组人汗腺抗菌素蛋白的异源可溶表达、发酵优化及分离纯化研究
被引量：
1
2
作者
马文君
郭校燕
+3 位作者
滕琳
王培培
卫宏远
郑春阳
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2021年第9期114-121,共8页
目的:实现人汗腺抗菌素(Dermcidins,DCD-1L)的原核异源可溶表达,并进行纯化及活性分析。方法:首先检索NCBI确定人DCD-1L的序列,构建载体并转化E.coli ER2566,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达后,进行SDS-PAGE电泳进行鉴定。其次,通...
目的:实现人汗腺抗菌素(Dermcidins,DCD-1L)的原核异源可溶表达,并进行纯化及活性分析。方法:首先检索NCBI确定人DCD-1L的序列,构建载体并转化E.coli ER2566,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达后,进行SDS-PAGE电泳进行鉴定。其次,通过单因素实验,对不同温度、转速和补料速度等发酵条件进行研究与优化,根据DCD-1L蛋白特性优化蛋白纯化工艺。最后采用质谱和牛津杯法对纯化的蛋白进行分子量和抗菌活性鉴定。结果:经SDS-PAGE凝胶检测,在上清中分子量处检测到条带,证明采用原核表达系统可实现人DCD-1L的可溶表达;通过单因素实验获得最佳DCD-1L的发酵条件为:37℃培养,转速400 r/min,开启蠕动泵以50 mL/30 min补料速度自动加入发酵罐中;研究还建立了包括超滤、Q柱洗脱和分子筛在内的一整套优化的蛋白纯化工艺,获得的产品纯度大于96%,总回收率18.4%;最后,通过牛津杯法检测,纯化的重组人DCD-1L在浓度为50μg/mL时,对表皮葡萄球菌这类革兰氏阳性菌较大肠杆菌具有更明显的抑菌活性。结论:本研究对重组人DCD-1L蛋白实现了原核可溶表达,并建立了稳定可靠的发酵、纯化工艺,并进行了初步的抗菌活性鉴定,为后续重组人DCD-1L蛋白的应用研究奠定了基础。
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关键词
人汗腺抗菌素
载体构建
异源可溶表达
发酵条件优化
蛋白纯化
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职称材料
题名
利用CRISPRi技术构建乙醛酸生物合成Corynebacterium glutamicum工程菌
被引量：
1
1
作者
梁咏思
沈凯佳
范许云
韩武洋
李天明
机构
河北科技大学
生物
科学与工程学院
舒泰
神
(
北京
)
生物制药
股份有限公司
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期170-176,共7页
文摘
以谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum ATCC 13032)为出发菌株,敲除其支流代谢关键酶乳酸脱氢酶合成基因lldh,建立规律间隔成簇短回文重复序列干扰(clustered regularly interspaced short palindromic repeats interference,CRISPRi)调控体系,并利用该体系下调支流代谢中的关键酶异柠檬酸脱氢酶合成基因icd和苹果酸合成酶合成基因ms的表达强度,同时过表达异柠檬酸裂合酶合成基因icl,强化乙醛酸合成的通路。通过48 h连续监测工程菌和野生菌生长状况,并检测发酵终产物。结果显示:工程菌生长几乎不受影响,发酵液中乙醛酸质量浓度达到5 mg/mL,实现了乙醛酸的积累,为谷氨酸棒状杆菌工业生产乙醛研究提供一定的参考。
关键词
谷氨酸棒状杆菌
乙醛酸
规律间隔成簇短回文重复序列干扰
工程菌
Keywords
Corynebacterium glutamicum ATCC 13032
glyoxylic acid
clustered regularly interspaced short palindromic repeats interference
engineered bacteria
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
重组人汗腺抗菌素蛋白的异源可溶表达、发酵优化及分离纯化研究
被引量：
1
2
作者
马文君
郭校燕
滕琳
王培培
卫宏远
郑春阳
机构
天津大学
天津强微特
生物
科技
有限公司
舒泰
神
(
北京
)
生物制药
股份有限公司
守正创新
生物
科技(天津)
有限公司
出处
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2021年第9期114-121,共8页
文摘
目的:实现人汗腺抗菌素(Dermcidins,DCD-1L)的原核异源可溶表达,并进行纯化及活性分析。方法:首先检索NCBI确定人DCD-1L的序列,构建载体并转化E.coli ER2566,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达后,进行SDS-PAGE电泳进行鉴定。其次,通过单因素实验,对不同温度、转速和补料速度等发酵条件进行研究与优化,根据DCD-1L蛋白特性优化蛋白纯化工艺。最后采用质谱和牛津杯法对纯化的蛋白进行分子量和抗菌活性鉴定。结果:经SDS-PAGE凝胶检测,在上清中分子量处检测到条带,证明采用原核表达系统可实现人DCD-1L的可溶表达;通过单因素实验获得最佳DCD-1L的发酵条件为:37℃培养,转速400 r/min,开启蠕动泵以50 mL/30 min补料速度自动加入发酵罐中;研究还建立了包括超滤、Q柱洗脱和分子筛在内的一整套优化的蛋白纯化工艺,获得的产品纯度大于96%,总回收率18.4%;最后,通过牛津杯法检测,纯化的重组人DCD-1L在浓度为50μg/mL时,对表皮葡萄球菌这类革兰氏阳性菌较大肠杆菌具有更明显的抑菌活性。结论:本研究对重组人DCD-1L蛋白实现了原核可溶表达,并建立了稳定可靠的发酵、纯化工艺,并进行了初步的抗菌活性鉴定,为后续重组人DCD-1L蛋白的应用研究奠定了基础。
关键词
人汗腺抗菌素
载体构建
异源可溶表达
发酵条件优化
蛋白纯化
Keywords
human sweat gland antibiotic
vector construction
soluble prokaryotic expression
optimization of fermentation conditions
protein purification
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用CRISPRi技术构建乙醛酸生物合成Corynebacterium glutamicum工程菌
梁咏思
沈凯佳
范许云
韩武洋
李天明
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
重组人汗腺抗菌素蛋白的异源可溶表达、发酵优化及分离纯化研究
马文君
郭校燕
滕琳
王培培
卫宏远
郑春阳
《食品工业科技》
CAS
北大核心
2021
1
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职称材料
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