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题名猪塞内卡病毒荧光素酶免疫吸附试验方法的建立
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作者
王宇欣
王永富
青易
王宗洪
漆启文
朱玲
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机构
四川农业大学动物医学院
融通农发牧原(崇州)有限责任公司
山东宝来利来生物工程股份有限公司
成都市畜禽遗传资源保护中心
南充市高坪区农业农村局
自贡市荣县观山镇农业农村发展服务中心
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出处
《西南农业学报》
北大核心
2025年第8期1749-1756,共8页
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基金
国家“十四五”重点研发计划项目(2024YFD1800102)
国家现代农业产业技术体系四川生猪创新团队项目(sccxtd-2024-08-15)。
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文摘
【目的】为提升猪塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)抗体检测效率,满足规模化养殖场血清学监测需求,建立一种灵敏、快速、特异且适于大规模应用的荧光素酶免疫吸附试验(LISA)方法。【方法】基于哺乳动物表达系统,构建并表达SVA VP1与海肾荧光素酶(Rluc)融合蛋白VP1-Rluc,获得可溶性抗原。以该融合蛋白为核心抗原,建立LISA检测体系,并系统优化包被浓度、血清稀释度、封闭条件及孵育时间等参数。进一步评估其特异性、灵敏度、重复性及与商品化ELISA方法的一致性。【结果】Western blot和IFA结果证实VP1-Rluc蛋白成功表达,具有良好抗原性。建立的LISA方法检测限达1∶6400,变异系数均小于10%,无交叉反应。ROC曲线分析确定阳性判定临界值为P/N=1.908,相对特异性和灵敏度分别为96.2%和95.7%。在554份临床样本检测中,与商品化ELISA一致性良好(Kappa=0.958)。该方法操作简便、成本低,且在早期感染样本中亦显示出良好性能。【结论】本研究建立的基于VP1-Rluc融合蛋白的LISA方法具有灵敏、特异、稳定及经济等优势,适用于SVA大规模血清监测,具备良好的推广应用前景。
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关键词
A型塞内卡病毒
VP1蛋白
原核表达
LISA
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Keywords
Senecavirus A
VP1 protein
Eukaryotic expression
LISA
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分类号
S852.659.6
[农业科学—基础兽医学]
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