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弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞中TALEN介导的microRNA-21基因敲除
被引量：
1
1
作者
陈步远
胡建达
+1 位作者
林仁章
陈鑫基
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期422-426,共5页
目的:在转染效率极低的血液肿瘤细胞株中探索敲除microRNA基因的有效方法,以方便microRNA基因在血液肿瘤疾病中功能的研究。方法:应用转录激活因子样效应蛋白核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)介导的基因...
目的:在转染效率极低的血液肿瘤细胞株中探索敲除microRNA基因的有效方法,以方便microRNA基因在血液肿瘤疾病中功能的研究。方法:应用转录激活因子样效应蛋白核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)介导的基因工程技术敲除人类弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞中的microRNA-21(miR-21)基因,然后通过流式细胞仪富集e GFP+表达细胞、PCR筛选和microRNA定量检测,筛选并建立不表达miR-21的OCI-Ly3单细胞克隆。最后,对不表达miR-21的OCI-Ly3单细胞克隆进行miR-21基因测序。结果:通过两轮的电转染和筛选实验,获得了4个几乎不表达miR-21的OCI-Ly3单细胞克隆,突变率约为实验起始细胞数的十万分之一。对突变克隆的测序结果显示,多种miR-21序列缺失或插入均可能导致该基因表达显著下调。结论:本方法可以推广、应用于在转染效率极低的血液肿瘤细胞株中敲除任何感兴趣的microRNA基因。
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关键词
转录激活因子样效应蛋白核酸酶
弥漫大B细胞淋巴瘤
OCI-Ly3
MICRORNA-21
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职称材料
RNA测序联合CRISPR/Cas9基因编辑技术鉴定调控维甲酸诱导分化功能的miRNA
被引量：
2
2
作者
王凌燕
林仁章
+4 位作者
江佩芳
张雲
李佳蒸
陈钰雯
胡建达
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期339-347,共9页
目的:研究miRNA的敲除对全反式维甲酸(ATRA)介导的急性早幼粒细胞白血病髓系分化的影响,并鉴定下调的miRNA若干,设计合成针对miRNA前体基因序列的sgRNA,通过CRISPR/Cas9技术实现miRNA在编码基因水平上的敲除。实时荧光定量PCR验证miRNA...
目的:研究miRNA的敲除对全反式维甲酸(ATRA)介导的急性早幼粒细胞白血病髓系分化的影响,并鉴定下调的miRNA若干,设计合成针对miRNA前体基因序列的sgRNA,通过CRISPR/Cas9技术实现miRNA在编码基因水平上的敲除。实时荧光定量PCR验证miRNA水平的变化和流式细胞术检测miRNA敲除后对细胞分化水平的影55种成熟miRNA下调。应用CRISPR/Cas9进行基因敲除后,PCR及Surveyor assay检测可见明显的DNA剪切条带,后,细胞的髓系分化受到明显抑制,而敲除miR-155后髓系分化水平则有所上调。结论:应用CRISPR/Cas9可进行针对平的影响,其具体机制是通过对分化相关靶基因的综合调控。
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关键词
CRISPR/Cas9
MICRORNA
急性早幼粒细胞白血病
全反式维甲酸
髓系分化
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职称材料
题名
弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞中TALEN介导的microRNA-21基因敲除
被引量：
1
1
作者
陈步远
胡建达
林仁章
陈鑫基
机构
福建医科大学附属协和医院福建省血液病
研究所
福建省血液病重点实验室
美国city of hope贝克曼研究所分子与细胞生物学系
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第2期422-426,共5页
基金
福建省自然基金(2014J01328)
美国NIH(P30-CA033572)
血液科国家及省临床重点专科建设项目(201130301)
文摘
目的:在转染效率极低的血液肿瘤细胞株中探索敲除microRNA基因的有效方法,以方便microRNA基因在血液肿瘤疾病中功能的研究。方法:应用转录激活因子样效应蛋白核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)介导的基因工程技术敲除人类弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞中的microRNA-21(miR-21)基因,然后通过流式细胞仪富集e GFP+表达细胞、PCR筛选和microRNA定量检测,筛选并建立不表达miR-21的OCI-Ly3单细胞克隆。最后,对不表达miR-21的OCI-Ly3单细胞克隆进行miR-21基因测序。结果:通过两轮的电转染和筛选实验,获得了4个几乎不表达miR-21的OCI-Ly3单细胞克隆,突变率约为实验起始细胞数的十万分之一。对突变克隆的测序结果显示,多种miR-21序列缺失或插入均可能导致该基因表达显著下调。结论:本方法可以推广、应用于在转染效率极低的血液肿瘤细胞株中敲除任何感兴趣的microRNA基因。
关键词
转录激活因子样效应蛋白核酸酶
弥漫大B细胞淋巴瘤
OCI-Ly3
MICRORNA-21
Keywords
transcription activator-like effector nuclease
diffuse large B cell lymphoma
OCI-Ly3
microRNA-21
分类号
R733.1 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
RNA测序联合CRISPR/Cas9基因编辑技术鉴定调控维甲酸诱导分化功能的miRNA
被引量：
2
2
作者
王凌燕
林仁章
江佩芳
张雲
李佳蒸
陈钰雯
胡建达
机构
福建医科大学附属协和医院血液科
美国city of hope贝克曼研究所分子与细胞生物学系
出处
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第2期339-347,共9页
基金
国家自然科学基金(81870135)
血液科国家及省临床重点专科建设项目(201130301)
+2 种基金
福建省自然科学基金项目(2020J05050)
福建省卫健委青年基金项目(2015-1-39)
福建医科大学启航基金项目(2018QH1036)。
文摘
目的:研究miRNA的敲除对全反式维甲酸(ATRA)介导的急性早幼粒细胞白血病髓系分化的影响,并鉴定下调的miRNA若干,设计合成针对miRNA前体基因序列的sgRNA,通过CRISPR/Cas9技术实现miRNA在编码基因水平上的敲除。实时荧光定量PCR验证miRNA水平的变化和流式细胞术检测miRNA敲除后对细胞分化水平的影55种成熟miRNA下调。应用CRISPR/Cas9进行基因敲除后,PCR及Surveyor assay检测可见明显的DNA剪切条带,后,细胞的髓系分化受到明显抑制,而敲除miR-155后髓系分化水平则有所上调。结论:应用CRISPR/Cas9可进行针对平的影响,其具体机制是通过对分化相关靶基因的综合调控。
关键词
CRISPR/Cas9
MICRORNA
急性早幼粒细胞白血病
全反式维甲酸
髓系分化
Keywords
CRISPR/Cas9
microRNA
acute promyelocytic leukemia
all-trans retinoic acid
myeloid differentiation
分类号
R733 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞中TALEN介导的microRNA-21基因敲除
陈步远
胡建达
林仁章
陈鑫基
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
1
在线阅读
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职称材料
2
RNA测序联合CRISPR/Cas9基因编辑技术鉴定调控维甲酸诱导分化功能的miRNA
王凌燕
林仁章
江佩芳
张雲
李佳蒸
陈钰雯
胡建达
《中国实验血液学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
2
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