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利用引物退火控制技术克隆日本囊对虾性腺差异表达基因 被引量:2
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作者 贾锡伟 沈冰玲 +2 位作者 张子平 王艺磊 谢芳靖 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期349-356,共8页
为了解日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)性腺发育及分化的分子机制,本研究采用改良的引物退火控制技术克隆到了共8个精巢、卵巢的差异表达基因.其中4个为已知基因,分别为凝血酶敏感蛋白基因、皮质棒蛋白基因、增殖细胞核抗原基因和... 为了解日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)性腺发育及分化的分子机制,本研究采用改良的引物退火控制技术克隆到了共8个精巢、卵巢的差异表达基因.其中4个为已知基因,分别为凝血酶敏感蛋白基因、皮质棒蛋白基因、增殖细胞核抗原基因和泛素缀合酶基因;4个为未知基因,分别命名为MjACP3-T、MjACP4-T、MjACP15-T和MjACP4-O基因.采用实时定量PCR方法分析了4个未知基因在性腺发育过程的表达谱,结果表明:MjACP3-T、MjACP4-T和MjACP15-T基因在日本囊对虾精巢和卵巢中的表达量有显著差异,且在各个时期精巢的表达量均高于卵巢,说明这3个基因可能在精巢的发育中起到某些重要作用.卵巢MjACP4-O基因的表达量变化较大,第5期卵巢的相对表达量达到最高(为1.38),而其他各个阶段的变化较大,在第4期卵巢的相对表达量最低(为0.03).在精巢中,MjACP4-O基因的表达量随着精巢逐渐发育成熟呈下降趋势.定量PCR结果与引物退火控制技术的结果有着很好的一致性.研究结果表明,引物退火控制技术是一种简单高效的克隆差异表达基因的技术.采用该技术所克隆到的8个精巢、卵巢的差异表达基因,为进一步了解日本囊对虾性腺发育分化的分子机制提供了基础材料. 展开更多
关键词 海洋生物学 日本囊对虾 性腺 差异表达基因 引物退火控制技术
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大黄鱼性腺线性化cDNA文库的构建及生殖免疫相关基因的筛选 被引量:2
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作者 陈芸 周鹏 +1 位作者 张子平 王艺磊 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期180-185,共6页
以大黄鱼(Larimichthys crocea)性腺为材料,采用SMART(switching mechanism at 5′end of RNA transcript)技术和DSN(duplex-specific nuclease)处理构建了大黄鱼性腺线性化cDNA文库,文库的库容为4.3×106PFU/mL,重组率为95.8%,插... 以大黄鱼(Larimichthys crocea)性腺为材料,采用SMART(switching mechanism at 5′end of RNA transcript)技术和DSN(duplex-specific nuclease)处理构建了大黄鱼性腺线性化cDNA文库,文库的库容为4.3×106PFU/mL,重组率为95.8%,插入片段大小为0.5-3 kb,说明该文库质量良好。从文库中随机挑取了3 961个克隆进行测序,共获得3 535条高质量的表达序列标签(ESTs)。包含与生殖免疫相关的基因33条,其中非特异性免疫相关基因17条,特异性免疫相关基因16条。 展开更多
关键词 性腺发育 CDNA文库 大黄鱼 ESTS 生殖免疫
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杂色鲍β-1,3-葡聚糖识别蛋白基因的克隆和表达 被引量:4
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作者 王宝珍 张子平 +4 位作者 王艺磊 王国栋 邹志华 王淑红 贾锡伟 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期67-75,共9页
从杂色鲍(Haliotis disversicolor)的表达序列标签(EST)中首先鉴定出β-1,3-葡聚糖识别蛋白基因片段(beta-1,3-glucan recognition protein,saβgrp)。通过5′RACE获得5′端序列,并用由头至趾(head to toe)PCR方法检测全长cDNA序列的正... 从杂色鲍(Haliotis disversicolor)的表达序列标签(EST)中首先鉴定出β-1,3-葡聚糖识别蛋白基因片段(beta-1,3-glucan recognition protein,saβgrp)。通过5′RACE获得5′端序列,并用由头至趾(head to toe)PCR方法检测全长cDNA序列的正确性。saβgrp的cDNA全长为1 459 bp,包括387 bp的5′非编码区,987 bp的开放阅读框,85 bp的3′非编码区。saβgrp开放阅读框编码328个氨基酸。与现有报道的β-1,3-葡聚糖识别蛋白均含信号肽不同,本研究所获得的杂色鲍saβGRP不含信号肽,为非分泌型蛋白。实时定量PCR分析表明:经副溶血弧菌诱导后,24 h的实验组saβgrp的表达水平极显著高于对照组(P<0.01),48 h的实验组saβgrp基因显著高于对照组(P<0.05)。 展开更多
关键词 saβgrp 副溶血弧菌 杂色鲍(Haliotis disversicolor)
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