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兔抗人唾液酸转运蛋白抗体的制备及特性鉴定
1
作者
孙其飞
高媛
+2 位作者
刘细保
孙启鸿
王松灵
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期521-523,538,共4页
目的：制备兔抗人唾液酸转运蛋白（sialin）的抗体，并进行特性鉴定。方法：应用RT—PCR从培养的人颌下腺细胞系HSG中扩增编码sialin N端1～38氨基酸的DNA序列，构建重组表达质粒pGEX-5X-1-sialin，测序鉴定后，转化大肠杆菌JM109，在0...
目的：制备兔抗人唾液酸转运蛋白（sialin）的抗体，并进行特性鉴定。方法：应用RT—PCR从培养的人颌下腺细胞系HSG中扩增编码sialin N端1～38氨基酸的DNA序列，构建重组表达质粒pGEX-5X-1-sialin，测序鉴定后，转化大肠杆菌JM109，在0．1 mmol／L IPTG的诱导下表达GST—sialin融合蛋白。经SDS-PAGE鉴定后，利用GSTrap FF^TM柱纯化融合蛋白，并以其免疫家兔制备抗人sialin抗体。用ELISA法测定兔抗sialin血清的效价；用Western blot及免疫细胞化学等方法鉴定抗血清的特异性。结果：构建了重组表达质粒pGEX-5X-1-sialin；以其转化大肠杆菌在IPTG诱导下，获得以可溶性形式表达的GST-sialin融合蛋白；表达的GST—sialin经GSTrap FF^TM柱纯化后，免疫家兔制备出抗sialin抗血清，ELISA法测定抗血清的效价为1：32000。Western blot鉴定表明，制备的抗sialin抗体可特异地识别HSG细胞中相对分子质量（Mr）约55000的sialin蛋白。免疫细胞化学检测表明，sialin抗血清识别的抗原定位于HSG细胞的细胞质和胞核。结论：成功地制备出兔抗人sialin抗血清，为进一步研究sialin在涎腺组织的功能奠定了基础。
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关键词
唾液酸转运蛋白
融合蛋白
原核表达
抗体制备
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职称材料
题名
兔抗人唾液酸转运蛋白抗体的制备及特性鉴定
1
作者
孙其飞
高媛
刘细保
孙启鸿
王松灵
机构
首都医科大学口腔医学院基因治疗分子生物学实验室
军事医学科学院放射与辐射医学
研究所
免疫学
研究
室
美国国立卫生院国立牙颅颌研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期521-523,538,共4页
基金
国家自然科学基金重点项目资助(30430690)
文摘
目的：制备兔抗人唾液酸转运蛋白（sialin）的抗体，并进行特性鉴定。方法：应用RT—PCR从培养的人颌下腺细胞系HSG中扩增编码sialin N端1～38氨基酸的DNA序列，构建重组表达质粒pGEX-5X-1-sialin，测序鉴定后，转化大肠杆菌JM109，在0．1 mmol／L IPTG的诱导下表达GST—sialin融合蛋白。经SDS-PAGE鉴定后，利用GSTrap FF^TM柱纯化融合蛋白，并以其免疫家兔制备抗人sialin抗体。用ELISA法测定兔抗sialin血清的效价；用Western blot及免疫细胞化学等方法鉴定抗血清的特异性。结果：构建了重组表达质粒pGEX-5X-1-sialin；以其转化大肠杆菌在IPTG诱导下，获得以可溶性形式表达的GST-sialin融合蛋白；表达的GST—sialin经GSTrap FF^TM柱纯化后，免疫家兔制备出抗sialin抗血清，ELISA法测定抗血清的效价为1：32000。Western blot鉴定表明，制备的抗sialin抗体可特异地识别HSG细胞中相对分子质量（Mr）约55000的sialin蛋白。免疫细胞化学检测表明，sialin抗血清识别的抗原定位于HSG细胞的细胞质和胞核。结论：成功地制备出兔抗人sialin抗血清，为进一步研究sialin在涎腺组织的功能奠定了基础。
关键词
唾液酸转运蛋白
融合蛋白
原核表达
抗体制备
Keywords
sialin
fusion protein
prokaryotic expression
antibody preparation
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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被引量
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1
兔抗人唾液酸转运蛋白抗体的制备及特性鉴定
孙其飞
高媛
刘细保
孙启鸿
王松灵
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
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