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葡萄球菌肠毒素A和黑色素瘤抗原A3基因重组真核共表达载体的构建及其在293T细胞的表达
被引量：
2
1
作者
吉晓滨
吕景礼
+2 位作者
陈敬贤
刘启才
谢景华
《中国耳鼻咽喉头颈外科》
2012年第7期349-353,共5页
目的构建葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal endotoxinA,SEA)和喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(melanoma-associated antigenA3,MAGE-A3)基因共表达的真核表达载体,检测、鉴定其在293T细胞中的表达情况。方法分别用RT-PCR方法 及人工化学合...
目的构建葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal endotoxinA,SEA)和喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(melanoma-associated antigenA3,MAGE-A3)基因共表达的真核表达载体,检测、鉴定其在293T细胞中的表达情况。方法分别用RT-PCR方法 及人工化学合成法获得MAGE-A3和SEA基因片段,然后依次将MAGE-A3和SEA基因克隆至含内部核糖体进入位点的真核表达载体IRES序列的上、下游,构建成重组质粒pMGEA3-IRES-SEA。经脂质体转染至293T细胞以后,用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分别鉴定SEA和MAGE-A3基因的表达。结果限制性内切酶酶切分析证实MAGE-A3和SEA基因均正确地克隆在pMAGEA3-IRES-SEA中,基因测序结果与GenBank公布的MAGE-A3、SEA序列完全一致,实现了双基因的正确重组。重组质粒转染293T细胞后能检测到MAGE-A3、SEA基因的高水平的有效表达。稳定表达双基因的293T细胞上清对外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)增殖有促进作用,与细胞中SEA的表达和分泌有关。结论成功地构建了pMAGEA3-IRES-SEA真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE-A3和SEA蛋白,由此奠定了其作为抗喉癌DNA疫苗应用的基础。
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关键词
葡萄球菌属
超抗原
真核细胞
基因
喉肿瘤
克隆
分子
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职称材料
喉癌来源的MAGE-A3基因真核表达载体及其稳定表达模型的构建和鉴定
2
作者
吉晓滨
吕景礼
+2 位作者
陈敬贤
刘启才
谢景华
《广州医学院学报》
2012年第2期6-10,共5页
目的:克隆人黑色素瘤相关抗原MAGE-A3基因,构建真核表达载体,检测、鉴定其在细胞中的表达。方法:MAGE-A3基因进行PCR扩增,凝胶回收PCR产物片段并连接至pMD18-T载体。测序后将MAGE-A3基因片段亚克隆至真核表达载体,构建成pIRES2-EGFP/MAG...
目的:克隆人黑色素瘤相关抗原MAGE-A3基因,构建真核表达载体,检测、鉴定其在细胞中的表达。方法:MAGE-A3基因进行PCR扩增,凝胶回收PCR产物片段并连接至pMD18-T载体。测序后将MAGE-A3基因片段亚克隆至真核表达载体,构建成pIRES2-EGFP/MAGE-A3重组质粒经脂质体转染至293T细胞株后,荧光定量PCR、Western-blotting法鉴定MAGE-A3基因的表达。结果:MAGE-A3基因正确克隆在pIRES2-EGFP/MAGE-A3,测序结果与GenBank公布的MAGE-A3序列一致。转染293T细胞后能检测到MAGE-A3基因和蛋白的表达。结论:成功构建pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE-A3蛋白,奠定了其作为DNA疫苗应用的基础。
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关键词
黑色素瘤抗原编码基因
真核表达
基因克隆
喉肿瘤
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职称材料
题名
葡萄球菌肠毒素A和黑色素瘤抗原A3基因重组真核共表达载体的构建及其在293T细胞的表达
被引量：
2
1
作者
吉晓滨
吕景礼
陈敬贤
刘启才
谢景华
机构
广州市第一人民医院耳鼻咽喉科
广州
医学院
实验
医学
研究中心
美国哥伦比亚大学医学院病理与细胞生物系
出处
《中国耳鼻咽喉头颈外科》
2012年第7期349-353,共5页
基金
广州市科技局资助项目(2009JI-C501-2)
文摘
目的构建葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal endotoxinA,SEA)和喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(melanoma-associated antigenA3,MAGE-A3)基因共表达的真核表达载体,检测、鉴定其在293T细胞中的表达情况。方法分别用RT-PCR方法 及人工化学合成法获得MAGE-A3和SEA基因片段,然后依次将MAGE-A3和SEA基因克隆至含内部核糖体进入位点的真核表达载体IRES序列的上、下游,构建成重组质粒pMGEA3-IRES-SEA。经脂质体转染至293T细胞以后,用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分别鉴定SEA和MAGE-A3基因的表达。结果限制性内切酶酶切分析证实MAGE-A3和SEA基因均正确地克隆在pMAGEA3-IRES-SEA中,基因测序结果与GenBank公布的MAGE-A3、SEA序列完全一致,实现了双基因的正确重组。重组质粒转染293T细胞后能检测到MAGE-A3、SEA基因的高水平的有效表达。稳定表达双基因的293T细胞上清对外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)增殖有促进作用,与细胞中SEA的表达和分泌有关。结论成功地构建了pMAGEA3-IRES-SEA真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE-A3和SEA蛋白,由此奠定了其作为抗喉癌DNA疫苗应用的基础。
关键词
葡萄球菌属
超抗原
真核细胞
基因
喉肿瘤
克隆
分子
Keywords
Staphylococcus
Superantigens
Eukaryotic Cells
Genes
Laryngeal Neoplasms
Cloning Molecular
分类号
R739.65 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
喉癌来源的MAGE-A3基因真核表达载体及其稳定表达模型的构建和鉴定
2
作者
吉晓滨
吕景礼
陈敬贤
刘启才
谢景华
机构
广州市第一人民医院耳鼻咽喉科
广州
医学院
实验
医学
研究中心
美国哥伦比亚大学医学院病理与细胞生物系
出处
《广州医学院学报》
2012年第2期6-10,共5页
基金
广州市科技局科技计划应用基础研究项目(2009J1-C501-2)
文摘
目的:克隆人黑色素瘤相关抗原MAGE-A3基因,构建真核表达载体,检测、鉴定其在细胞中的表达。方法:MAGE-A3基因进行PCR扩增,凝胶回收PCR产物片段并连接至pMD18-T载体。测序后将MAGE-A3基因片段亚克隆至真核表达载体,构建成pIRES2-EGFP/MAGE-A3重组质粒经脂质体转染至293T细胞株后,荧光定量PCR、Western-blotting法鉴定MAGE-A3基因的表达。结果:MAGE-A3基因正确克隆在pIRES2-EGFP/MAGE-A3,测序结果与GenBank公布的MAGE-A3序列一致。转染293T细胞后能检测到MAGE-A3基因和蛋白的表达。结论:成功构建pIRES2-EGFP/MAGE-A3真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE-A3蛋白,奠定了其作为DNA疫苗应用的基础。
关键词
黑色素瘤抗原编码基因
真核表达
基因克隆
喉肿瘤
Keywords
melanoma antigen-encoding gene
eukaryotic expression
gene cloning
laryngocarcinoma
分类号
R730 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
葡萄球菌肠毒素A和黑色素瘤抗原A3基因重组真核共表达载体的构建及其在293T细胞的表达
吉晓滨
吕景礼
陈敬贤
刘启才
谢景华
《中国耳鼻咽喉头颈外科》
2012
2
在线阅读
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职称材料
2
喉癌来源的MAGE-A3基因真核表达载体及其稳定表达模型的构建和鉴定
吉晓滨
吕景礼
陈敬贤
刘启才
谢景华
《广州医学院学报》
2012
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