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外源性SHIP基因表达抑制生长因子介导的K562细胞增殖及Akt磷酸化
1
作者
杨琳
罗建民
+4 位作者
温树鹏
刘小军
姚丽
杨敬慈
杜行严
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期269-274,共6页
【目的】探讨SHIP基因对IL-3诱导K562细胞系增殖的抑制作用,阐明SHIP对K562细胞作用的机制。【方法】将慢病毒质粒pReceiver-Lv31-FIV和pReceiver-Lv31-SHIP转染K562细胞;转染细胞与IL-3共培养,Western blot法检测K562细胞Akt磷酸化;观...
【目的】探讨SHIP基因对IL-3诱导K562细胞系增殖的抑制作用,阐明SHIP对K562细胞作用的机制。【方法】将慢病毒质粒pReceiver-Lv31-FIV和pReceiver-Lv31-SHIP转染K562细胞;转染细胞与IL-3共培养,Western blot法检测K562细胞Akt磷酸化;观察转染野生型SHIP基因对K562细胞增殖的影响;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺失末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡。【结果】重组慢病毒载体pReceiver-Lv31-FIV和pReceiver-Lv31-SHIP转染K562细胞,GFP阳性率为74.6%。野生型SHIP基因阻断了IL-3对K562细胞的增殖作用,对照组(K562/FIV)细胞增殖抑制率(3.26%)明显低于转染SHIP基因组细胞增殖抑制率(26.42%,P<0.05);集落形成实验显示SHIP能显著抑制K562细胞集落形成能力[IL-3作用组K562/SHIP细胞形成集落为60.3±6.6,明显低于IL-3诱导的K562/FIV组(91.7±4.2)](P<0.01)。细胞形态观察发现凋亡增加,Western blot检测发现转染SHIP基因组前凋亡酶pro-caspase-3降解增加,TUNEL法证实SHIP蛋白促进细胞凋亡。IL-3作用不同时间段(3h,6h,12h),转染野生型SHIP组细胞增殖明显减弱,且Akt磷酸化水平均低于对照组(P<0.05)。【结论】SHIP基因负调控生长因子(IL-3)介导的K562细胞增殖及其蛋白激酶活化。
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关键词
基因
肌醇5’磷酸酶
慢病毒载体
细胞增殖
磷酸化蛋白激酶B
生长因子
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职称材料
题名
外源性SHIP基因表达抑制生长因子介导的K562细胞增殖及Akt磷酸化
1
作者
杨琳
罗建民
温树鹏
刘小军
姚丽
杨敬慈
杜行严
机构
河北医科
大学
第二医院血液科
美国印第安纳大学肿瘤研究所
出处
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期269-274,共6页
基金
国家自然科学基金(30240011)
河北省自然科学基金(2007000858)
文摘
【目的】探讨SHIP基因对IL-3诱导K562细胞系增殖的抑制作用,阐明SHIP对K562细胞作用的机制。【方法】将慢病毒质粒pReceiver-Lv31-FIV和pReceiver-Lv31-SHIP转染K562细胞;转染细胞与IL-3共培养,Western blot法检测K562细胞Akt磷酸化;观察转染野生型SHIP基因对K562细胞增殖的影响;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺失末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡。【结果】重组慢病毒载体pReceiver-Lv31-FIV和pReceiver-Lv31-SHIP转染K562细胞,GFP阳性率为74.6%。野生型SHIP基因阻断了IL-3对K562细胞的增殖作用,对照组(K562/FIV)细胞增殖抑制率(3.26%)明显低于转染SHIP基因组细胞增殖抑制率(26.42%,P<0.05);集落形成实验显示SHIP能显著抑制K562细胞集落形成能力[IL-3作用组K562/SHIP细胞形成集落为60.3±6.6,明显低于IL-3诱导的K562/FIV组(91.7±4.2)](P<0.01)。细胞形态观察发现凋亡增加,Western blot检测发现转染SHIP基因组前凋亡酶pro-caspase-3降解增加,TUNEL法证实SHIP蛋白促进细胞凋亡。IL-3作用不同时间段(3h,6h,12h),转染野生型SHIP组细胞增殖明显减弱,且Akt磷酸化水平均低于对照组(P<0.05)。【结论】SHIP基因负调控生长因子(IL-3)介导的K562细胞增殖及其蛋白激酶活化。
关键词
基因
肌醇5’磷酸酶
慢病毒载体
细胞增殖
磷酸化蛋白激酶B
生长因子
Keywords
gene, SIHP
lentiviral vector
cell proliferation
p-Akt
IL-3
分类号
R329.28 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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题名
作者
出处
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1
外源性SHIP基因表达抑制生长因子介导的K562细胞增殖及Akt磷酸化
杨琳
罗建民
温树鹏
刘小军
姚丽
杨敬慈
杜行严
《中山大学学报(医学科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
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