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大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭基因ibeB的编码产物为外膜蛋白前体
被引量：
4
1
作者
赵伟东
陈誉华
黄胜和
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期497-501,共5页
为进一步探讨大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭基因ibeB的生物学特性 ,将ibeB基因克隆到pET2 8a(+)载体 ,以E .coliBL2 1 (DE3)为宿主菌 ,经IPTG诱导后 ,通过Ni2 + NTA树脂提纯IbeB蛋白 .SDS PAGE确定纯化蛋白的分子量 ;应用无蛋白酶的体...
为进一步探讨大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭基因ibeB的生物学特性 ,将ibeB基因克隆到pET2 8a(+)载体 ,以E .coliBL2 1 (DE3)为宿主菌 ,经IPTG诱导后 ,通过Ni2 + NTA树脂提纯IbeB蛋白 .SDS PAGE确定纯化蛋白的分子量 ;应用无蛋白酶的体外转录和翻译系统进一步鉴定ibeB基因表达蛋白的分子量 ;通过 [3 5S]Met标记的体内T7表达体系并结合膜蛋白分离技术定位IbeB蛋白在细菌中的亚细胞分布 ;利用细菌侵袭实验分析IbeB蛋白抗体对E .coliK1侵袭人脑微血管内皮细胞的封闭作用 .结果发现 ,ibeB基因的重组蛋白表达纯化产物呈现出 5 0kD和 34kD两种分子量大小 ,5 0kD存在于表达细菌的可溶性部分 ,而 34kD则存在于包涵体中 ;体外翻译实验也显示出较弱的 5 0kD和较浓的 34kD两个蛋白带 ;体内T7表达体系实验显示 34kD的IbeB成熟蛋白定位于E .coli的外膜 ;抗 34kDIbeB蛋白抗体能封闭E .coli对人脑微血管内皮细胞的侵袭 .这些结果提示 ,大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭基因ibeB的编码产物为 5 0kD的外膜蛋白前体 ,该前体可通过分子内剪接形成成熟的
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关键词
大肠杆菌
ibeB基因
脑膜炎
血脑屏障
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职称材料
质粒pU3R-ⅢhGH的构建及在体外转录激活研究中的应用
2
作者
孙桂香
H Wu
J S Holcenberg
《北京医科大学学报》
CSCD
1993年第5期362-362,365,共2页
TPA诱导HTLV-1、HIV-1等病毒基因在体外转录激活研究的基本模式是用TPA激活pU 3 R-ⅢCAT等转染的靶细胞,并检测报告基因CAT的表达水平,以了解目的基因的转录激活情况。CAT(氯霉素乙酰转移酶)是个好的报告基因,但hGH(人类生长激素)更具优...
TPA诱导HTLV-1、HIV-1等病毒基因在体外转录激活研究的基本模式是用TPA激活pU 3 R-ⅢCAT等转染的靶细胞,并检测报告基因CAT的表达水平,以了解目的基因的转录激活情况。CAT(氯霉素乙酰转移酶)是个好的报告基因,但hGH(人类生长激素)更具优点,为此,本文报告新质粒pU 3 R-ⅢhGH的构建及应用。
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关键词
质粒
构建
转录激活
转染
靶细胞
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职称材料
题名
大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭基因ibeB的编码产物为外膜蛋白前体
被引量：
4
1
作者
赵伟东
陈誉华
黄胜和
机构
中国医科
大学
发育生物学研究室
美国南加州大学医学院洛杉矶儿童医院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第4期497-501,共5页
基金
国家自然科学基金 (No.3 0 170 0 5 3
No.3 0 170 470
No.3 0 3 70 70 2 )资助项目~~
文摘
为进一步探讨大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭基因ibeB的生物学特性 ,将ibeB基因克隆到pET2 8a(+)载体 ,以E .coliBL2 1 (DE3)为宿主菌 ,经IPTG诱导后 ,通过Ni2 + NTA树脂提纯IbeB蛋白 .SDS PAGE确定纯化蛋白的分子量 ;应用无蛋白酶的体外转录和翻译系统进一步鉴定ibeB基因表达蛋白的分子量 ;通过 [3 5S]Met标记的体内T7表达体系并结合膜蛋白分离技术定位IbeB蛋白在细菌中的亚细胞分布 ;利用细菌侵袭实验分析IbeB蛋白抗体对E .coliK1侵袭人脑微血管内皮细胞的封闭作用 .结果发现 ,ibeB基因的重组蛋白表达纯化产物呈现出 5 0kD和 34kD两种分子量大小 ,5 0kD存在于表达细菌的可溶性部分 ,而 34kD则存在于包涵体中 ;体外翻译实验也显示出较弱的 5 0kD和较浓的 34kD两个蛋白带 ;体内T7表达体系实验显示 34kD的IbeB成熟蛋白定位于E .coli的外膜 ;抗 34kDIbeB蛋白抗体能封闭E .coli对人脑微血管内皮细胞的侵袭 .这些结果提示 ,大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭基因ibeB的编码产物为 5 0kD的外膜蛋白前体 ,该前体可通过分子内剪接形成成熟的
关键词
大肠杆菌
ibeB基因
脑膜炎
血脑屏障
Keywords
E.coli,ibe B gene locus,meningitis,blood brain barrier
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
质粒pU3R-ⅢhGH的构建及在体外转录激活研究中的应用
2
作者
孙桂香
H Wu
J S Holcenberg
机构
北京医科
大学
第一
医院
儿科血液组
美国南加州大学医学院洛杉矶儿童医院
出处
《北京医科大学学报》
CSCD
1993年第5期362-362,365,共2页
文摘
TPA诱导HTLV-1、HIV-1等病毒基因在体外转录激活研究的基本模式是用TPA激活pU 3 R-ⅢCAT等转染的靶细胞,并检测报告基因CAT的表达水平,以了解目的基因的转录激活情况。CAT(氯霉素乙酰转移酶)是个好的报告基因,但hGH(人类生长激素)更具优点,为此,本文报告新质粒pU 3 R-ⅢhGH的构建及应用。
关键词
质粒
构建
转录激活
转染
靶细胞
分类号
R394.8 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大肠杆菌脑微血管内皮细胞侵袭基因ibeB的编码产物为外膜蛋白前体
赵伟东
陈誉华
黄胜和
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
质粒pU3R-ⅢhGH的构建及在体外转录激活研究中的应用
孙桂香
H Wu
J S Holcenberg
《北京医科大学学报》
CSCD
1993
0
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已选择
0
条
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参考文献
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