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新型异亮氨酸双加氧酶及其重组大肠杆菌合成羟基异亮氨酸
被引量：
4
1
作者
付敏杰
聂尧
+2 位作者
穆晓清
徐岩
肖荣
《化工进展》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014年第11期3037-3044,共8页
异亮氨酸双加氧酶(IDO)可特异性的转化底物L-异亮氨酸(L-Ile)生成4-羟基-L-异亮氨酸(4-HIL),该产物具有促进胰岛素分泌的功能,可用于抗糖尿病、降胆固醇等。本研究结合了酶标显色和薄层层析(TLC)的方法从自然界中筛到了具有IDO活性的菌...
异亮氨酸双加氧酶(IDO)可特异性的转化底物L-异亮氨酸(L-Ile)生成4-羟基-L-异亮氨酸(4-HIL),该产物具有促进胰岛素分泌的功能,可用于抗糖尿病、降胆固醇等。本研究结合了酶标显色和薄层层析(TLC)的方法从自然界中筛到了具有IDO活性的菌株,并将该菌株中的目的基因ido克隆到大肠杆菌中,获得重组表达菌株,并且验证该菌具有IDO的转化功能。本研究优化了转化反应体系和条件,同时通过30℃过夜温育菌体细胞的方法,使该菌株全细胞转化合成4-HIL的产率达到85%以上。
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关键词
异亮氨酸双加氧酶
异亮氨酸
羟基异亮氨酸
生物转化
重组表达
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职称材料
新型醛酮还原酶不对称转化制备(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺
被引量：
2
2
作者
郭荣云
聂尧
+2 位作者
穆晓清
徐岩
肖荣
《化工进展》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期2344-2349,共6页
生物催化具有反应条件温和、绿色环保、高立体选择性等优点,已成为制备光学活性度洛西汀的重要方式和途径,但仍存在有效的生物催化剂数量有限和反应效率低等问题,基因组数据库的发展为新型立体选择性生物催化剂的开发提供了有效的途径...
生物催化具有反应条件温和、绿色环保、高立体选择性等优点,已成为制备光学活性度洛西汀的重要方式和途径,但仍存在有效的生物催化剂数量有限和反应效率低等问题,基因组数据库的发展为新型立体选择性生物催化剂的开发提供了有效的途径和平台。本研究通过基因组信息挖掘,从Candida parapsilosis CCTCCM203011中发现了8个新型的醛酮还原酶,分析研究不同的醛酮还原酶对N,N-二甲基-3-酮-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DKTP)的催化还原能力,发现CPAR4能够高立体选择性地催化还原DKTP生成度洛西汀中间体(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DHTP)。通过粗酶体系反应参数的优化,CPAR4催化还原底物浓度在3g/L时,产率达到94.5%,光学纯度大于99.9%ee;当底物浓度为5g/L时,产率仍达到70%以上。该重组菌粗酶液能够高立体选择性地生物还原DKTP生成度洛西汀中间体(S)-DHTP,具有一定的应用潜力。
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关键词
醛酮还原酶
生物催化
选择催化还原
(S)-N
N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺
粗酶体系
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职称材料
定点突变提高克雷伯氏菌普鲁兰酶的耐酸性
被引量：
2
3
作者
牟国翠
聂尧
+2 位作者
穆晓清
徐岩
肖荣
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第12期1247-1252,共6页
通过分析Klebsiella variicola SHN-1普鲁兰酶的活性中心,并将K.variicola SHN-1普鲁兰酶与来自K.pneumoniae,Bacillus acidopullulyticus,B.naganoensis的普鲁兰酶氨基酸序列进行同源性比较,确定了H626D、R756E、H852D、R908E、I619N、...
通过分析Klebsiella variicola SHN-1普鲁兰酶的活性中心,并将K.variicola SHN-1普鲁兰酶与来自K.pneumoniae,Bacillus acidopullulyticus,B.naganoensis的普鲁兰酶氨基酸序列进行同源性比较,确定了H626D、R756E、H852D、R908E、I619N、F723Y、S850T、K851S八个突变位点,采用定点突变的方法获得了8个突变酶,经过酶学性质分析,发现H852D的最适反应pH由原来的pH 5.0降低为pH 4.7,且在pH 4.5下的稳定性得到提高。通过同源建模及结构分析发现,852位点突变为天冬氨酸后与周围的氨基酸多形成了2个氢键,因此提高了结构的稳定性,且由于活性中心p Ka值的改变,造成了普鲁兰酶最适pH发生了迁移。
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关键词
普鲁兰酶
定点突变
耐酸性
最适PH值
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职称材料
题名
新型异亮氨酸双加氧酶及其重组大肠杆菌合成羟基异亮氨酸
被引量：
4
1
作者
付敏杰
聂尧
穆晓清
徐岩
肖荣
机构
江南
大学
生物
工程学院工业
生物技术
教育部重点实验室
江南
大学
食品
生物技术
国家重点实验室
罗格斯大学高级生物技术与医学中心
出处
《化工进展》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014年第11期3037-3044,共8页
基金
国家重点基础研究发展计划(2011CB710800)
国家高技术研究发展计划(2011AA02A209
+5 种基金
2011AA02A210)
国家自然科学基金(21376107
21336009)
高等学校学科创新引智计划(111计划)(111-2-06)
高端外国专家项目(GDW20133200113)
江苏高校优势学科建设工程项目
文摘
异亮氨酸双加氧酶(IDO)可特异性的转化底物L-异亮氨酸(L-Ile)生成4-羟基-L-异亮氨酸(4-HIL),该产物具有促进胰岛素分泌的功能,可用于抗糖尿病、降胆固醇等。本研究结合了酶标显色和薄层层析(TLC)的方法从自然界中筛到了具有IDO活性的菌株,并将该菌株中的目的基因ido克隆到大肠杆菌中,获得重组表达菌株,并且验证该菌具有IDO的转化功能。本研究优化了转化反应体系和条件,同时通过30℃过夜温育菌体细胞的方法,使该菌株全细胞转化合成4-HIL的产率达到85%以上。
关键词
异亮氨酸双加氧酶
异亮氨酸
羟基异亮氨酸
生物转化
重组表达
Keywords
isoleucine dioxygenase
isoleucine
hydroxyl isoleucine
biotransformation
recombinant expression
分类号
Q815 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
新型醛酮还原酶不对称转化制备(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺
被引量：
2
2
作者
郭荣云
聂尧
穆晓清
徐岩
肖荣
机构
江南
大学
生物
工程学院工业
生物技术
教育部重点实验室
江南
大学
食品
生物技术
国家重点实验室
罗格斯大学高级生物技术与医学中心
出处
《化工进展》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期2344-2349,共6页
基金
国家重点基础研究发展计划(2011CB710800)
国家高技术研究发展计划(2011AA02A209
+5 种基金
2011AA02A210)
国家自然科学基金(21376107
21336009)
高等学校学科创新引智计划(111计划)(111-2-06)
高端外国专家项目(GDW20133200113)
江苏高校优势学科建设工程项目
文摘
生物催化具有反应条件温和、绿色环保、高立体选择性等优点,已成为制备光学活性度洛西汀的重要方式和途径,但仍存在有效的生物催化剂数量有限和反应效率低等问题,基因组数据库的发展为新型立体选择性生物催化剂的开发提供了有效的途径和平台。本研究通过基因组信息挖掘,从Candida parapsilosis CCTCCM203011中发现了8个新型的醛酮还原酶,分析研究不同的醛酮还原酶对N,N-二甲基-3-酮-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DKTP)的催化还原能力,发现CPAR4能够高立体选择性地催化还原DKTP生成度洛西汀中间体(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺(DHTP)。通过粗酶体系反应参数的优化,CPAR4催化还原底物浓度在3g/L时,产率达到94.5%,光学纯度大于99.9%ee;当底物浓度为5g/L时,产率仍达到70%以上。该重组菌粗酶液能够高立体选择性地生物还原DKTP生成度洛西汀中间体(S)-DHTP,具有一定的应用潜力。
关键词
醛酮还原酶
生物催化
选择催化还原
(S)-N
N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺
粗酶体系
Keywords
aldo-keto reductase
biocatalysis
SCR
（S）-N,N-dimethyl-3-hydroxy-3-（2-thienyl）-1-propanamine
cell-free system
分类号
Q815 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
定点突变提高克雷伯氏菌普鲁兰酶的耐酸性
被引量：
2
3
作者
牟国翠
聂尧
穆晓清
徐岩
肖荣
机构
江南
大学
工业
技术
教育部重点实验室
食品科学与
技术
国家重点实验室
罗格斯大学高级生物技术与医学中心
出处
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第12期1247-1252,共6页
基金
国家自然科学基金项目(21376107、21336009)
国家863计划项目(2011CB710800)
+3 种基金
国家973计划项目(2012AA022207)
高等学校学科创新引智计划(111计划)(111-2-06)
高端外国专家项目(GDW20133200113)
江苏高校优势学科建设工程项目
文摘
通过分析Klebsiella variicola SHN-1普鲁兰酶的活性中心,并将K.variicola SHN-1普鲁兰酶与来自K.pneumoniae,Bacillus acidopullulyticus,B.naganoensis的普鲁兰酶氨基酸序列进行同源性比较,确定了H626D、R756E、H852D、R908E、I619N、F723Y、S850T、K851S八个突变位点,采用定点突变的方法获得了8个突变酶,经过酶学性质分析,发现H852D的最适反应pH由原来的pH 5.0降低为pH 4.7,且在pH 4.5下的稳定性得到提高。通过同源建模及结构分析发现,852位点突变为天冬氨酸后与周围的氨基酸多形成了2个氢键,因此提高了结构的稳定性,且由于活性中心p Ka值的改变,造成了普鲁兰酶最适pH发生了迁移。
关键词
普鲁兰酶
定点突变
耐酸性
最适PH值
Keywords
pullulanase, site-directed mutagenesis, acid resistance, optimum pH value
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
新型异亮氨酸双加氧酶及其重组大肠杆菌合成羟基异亮氨酸
付敏杰
聂尧
穆晓清
徐岩
肖荣
《化工进展》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014
4
在线阅读
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职称材料
2
新型醛酮还原酶不对称转化制备(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺
郭荣云
聂尧
穆晓清
徐岩
肖荣
《化工进展》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
定点突变提高克雷伯氏菌普鲁兰酶的耐酸性
牟国翠
聂尧
穆晓清
徐岩
肖荣
《食品与生物技术学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
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职称材料
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