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EV71病毒反向遗传学系统的建立及拯救病毒的鉴定
被引量：
1
1
作者
庄稀尧
卢楠
+7 位作者
唐弘
李智颖
陈俊伊
熊雨涵
徐蕾
王瑜伟
康月茜
杨春
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第11期1479-1484,共6页
目的:建立高效的EV71病毒反向遗传学系统,快速获得拯救病毒并鉴定其活性。方法:首先构建含有人RNA聚合酶Ⅰ启动子(PpolⅠ)、ccdB自杀基因和鼠终止子(mTer)的接收质粒pHM-ccdB,并在ccdB两侧引入AarⅠ酶切位点;为了回避EV71病毒基因组中...
目的:建立高效的EV71病毒反向遗传学系统,快速获得拯救病毒并鉴定其活性。方法:首先构建含有人RNA聚合酶Ⅰ启动子(PpolⅠ)、ccdB自杀基因和鼠终止子(mTer)的接收质粒pHM-ccdB,并在ccdB两侧引入AarⅠ酶切位点;为了回避EV71病毒基因组中自身的AarⅠ酶切位点,分两段PCR扩增基因组,在引物中引入必需的AarⅠ酶切位点,通过Golden Gate Clone技术连接到目的载体中获得病毒拯救质粒pHT-EV71,转染至RD细胞后,获得拯救的EV71病毒,并以RT-PCR、病毒滴度、Western blot以及电镜检测等方法鉴定拯救子代病毒。结果:通过引入ccdB致死基因和Golden Gate Clone成功构建了EV71病毒的拯救质粒(pHT-EV71),并将其转染至RD细胞后,观察到明显的致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),将得到的拯救子代病毒,经EV71 VP1的特异性引物进行RT-PCR扩增,观察到长约1900 bp的特异性条带;Western blot结果显示,该病毒可与EV71 VP1特异抗体结合;透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)检测可见20~30 nm球形病毒颗粒;在RD细胞中将子代病毒连续增殖8代后,检测其毒力高于母本株(6.35 lgTCID50/mL)。结论:通过引入ccdB和Golden Gate Clone技术,建立了快速、高效构建EV71病毒的拯救质粒的方法,效率达到100%,为正链RNA病毒反向遗传学系统的构建提供了一种新的策略,为进一步研究EV71病毒的致病机制及疫苗制备等提供了技术平台。
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关键词
肠道病毒71
Golden
Gate
Clone
病毒拯救
病毒滴度
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职称材料
败酱草对对乙酰氨基酚诱导的大鼠药物性肝损伤的保护作用
被引量：
4
2
作者
唐文诚
何清
+2 位作者
宋大萍
沈政洪
王继生
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2021年第9期78-83,共6页
目的败酱草是败酱科多年生草本植物黄花败酱、白花败酱的带根全草,具有多种药理活性。本文旨在探究败酱草对对乙酰氨基酚诱导的大鼠药物性肝损伤的保护作用。方法采用尾静脉注射对乙酰氨基酚将大鼠随机分为6组:对照组、模型组、败酱草...
目的败酱草是败酱科多年生草本植物黄花败酱、白花败酱的带根全草,具有多种药理活性。本文旨在探究败酱草对对乙酰氨基酚诱导的大鼠药物性肝损伤的保护作用。方法采用尾静脉注射对乙酰氨基酚将大鼠随机分为6组:对照组、模型组、败酱草低剂量组、败酱草中剂量组、败酱草高剂量组、联苯双脂组。造模同时败酱草低、中、高剂量组每日灌胃败酱草4、8、16 g/kg,联苯双脂组每日灌胃联苯双脂0.3 g/kg,对照组和模型组灌胃等量生理盐水,连续30 d。计算肝脏指数;HE染色检测肝组织病理损伤程度;试剂盒检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平;酶联免疫吸附实验检测白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)水平;通过试剂盒检测肝组织匀浆中总超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果与对照组相比较,模型组肝脏指数显著升高(P<0.05),AST、ALT、ALP水平显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著升高(P<0.05),SOD、GSH-Px含量显著降低(P<0.05)、MDA含量显著升高(P<0.05)。与模型组相比较,败酱草中、高剂量组和联苯双酯组肝脏指数显著降低(P<0.05),病理损伤程度明显改善,AST、ALT、ALP水平显著降低(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低(P<0.05),SOD、GSH-Px含量显著升高(P<0.05)、MDA含量显著降低(P<0.05)。结论败酱草通过改善肝组织病理损伤、抑制炎症因子的释放、改善氧化应激对对乙酰氨基酚诱导的大鼠药物性肝损伤的具有保护作用。
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关键词
药物性肝损伤
败酱草
对乙酰氨基酚
氧化应激
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职称材料
题名
EV71病毒反向遗传学系统的建立及拯救病毒的鉴定
被引量：
1
1
作者
庄稀尧
卢楠
唐弘
李智颖
陈俊伊
熊雨涵
徐蕾
王瑜伟
康月茜
杨春
机构
重庆医科大学分子医学与肿瘤研究
中心
、病原生物学实验室
重庆市中
医院
检验科
绵阳市第三人民医院•四川省精神卫生中心
出处
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第11期1479-1484,共6页
基金
重庆市自然科学基金资助项目（编号：cstc2016jcyjA0212）
重庆市科委基础科学与前沿技术（一般）资助项目（编号：cstc2016jcyjA0277）
四川省卫计委资助项目（编号：18PJ016）
文摘
目的:建立高效的EV71病毒反向遗传学系统,快速获得拯救病毒并鉴定其活性。方法:首先构建含有人RNA聚合酶Ⅰ启动子(PpolⅠ)、ccdB自杀基因和鼠终止子(mTer)的接收质粒pHM-ccdB,并在ccdB两侧引入AarⅠ酶切位点;为了回避EV71病毒基因组中自身的AarⅠ酶切位点,分两段PCR扩增基因组,在引物中引入必需的AarⅠ酶切位点,通过Golden Gate Clone技术连接到目的载体中获得病毒拯救质粒pHT-EV71,转染至RD细胞后,获得拯救的EV71病毒,并以RT-PCR、病毒滴度、Western blot以及电镜检测等方法鉴定拯救子代病毒。结果:通过引入ccdB致死基因和Golden Gate Clone成功构建了EV71病毒的拯救质粒(pHT-EV71),并将其转染至RD细胞后,观察到明显的致细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),将得到的拯救子代病毒,经EV71 VP1的特异性引物进行RT-PCR扩增,观察到长约1900 bp的特异性条带;Western blot结果显示,该病毒可与EV71 VP1特异抗体结合;透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)检测可见20~30 nm球形病毒颗粒;在RD细胞中将子代病毒连续增殖8代后,检测其毒力高于母本株(6.35 lgTCID50/mL)。结论:通过引入ccdB和Golden Gate Clone技术,建立了快速、高效构建EV71病毒的拯救质粒的方法,效率达到100%,为正链RNA病毒反向遗传学系统的构建提供了一种新的策略,为进一步研究EV71病毒的致病机制及疫苗制备等提供了技术平台。
关键词
肠道病毒71
Golden
Gate
Clone
病毒拯救
病毒滴度
Keywords
EV71 virus
Golden Gate Clone
rescued virus
virus titer
分类号
R373.2 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
败酱草对对乙酰氨基酚诱导的大鼠药物性肝损伤的保护作用
被引量：
4
2
作者
唐文诚
何清
宋大萍
沈政洪
王继生
机构
西南医科大学药学院
绵阳市第三人民医院•四川省精神卫生中心
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2021年第9期78-83,共6页
基金
绵阳市科技局课题(2019YFZJ018)。
文摘
目的败酱草是败酱科多年生草本植物黄花败酱、白花败酱的带根全草,具有多种药理活性。本文旨在探究败酱草对对乙酰氨基酚诱导的大鼠药物性肝损伤的保护作用。方法采用尾静脉注射对乙酰氨基酚将大鼠随机分为6组:对照组、模型组、败酱草低剂量组、败酱草中剂量组、败酱草高剂量组、联苯双脂组。造模同时败酱草低、中、高剂量组每日灌胃败酱草4、8、16 g/kg,联苯双脂组每日灌胃联苯双脂0.3 g/kg,对照组和模型组灌胃等量生理盐水,连续30 d。计算肝脏指数;HE染色检测肝组织病理损伤程度;试剂盒检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平;酶联免疫吸附实验检测白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)水平;通过试剂盒检测肝组织匀浆中总超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果与对照组相比较,模型组肝脏指数显著升高(P<0.05),AST、ALT、ALP水平显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著升高(P<0.05),SOD、GSH-Px含量显著降低(P<0.05)、MDA含量显著升高(P<0.05)。与模型组相比较,败酱草中、高剂量组和联苯双酯组肝脏指数显著降低(P<0.05),病理损伤程度明显改善,AST、ALT、ALP水平显著降低(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低(P<0.05),SOD、GSH-Px含量显著升高(P<0.05)、MDA含量显著降低(P<0.05)。结论败酱草通过改善肝组织病理损伤、抑制炎症因子的释放、改善氧化应激对对乙酰氨基酚诱导的大鼠药物性肝损伤的具有保护作用。
关键词
药物性肝损伤
败酱草
对乙酰氨基酚
氧化应激
Keywords
drug-induced liver injury
Herba Patriniae
paracetamol
oxidative stress
分类号
R-33 [医药卫生]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
EV71病毒反向遗传学系统的建立及拯救病毒的鉴定
庄稀尧
卢楠
唐弘
李智颖
陈俊伊
熊雨涵
徐蕾
王瑜伟
康月茜
杨春
《重庆医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
败酱草对对乙酰氨基酚诱导的大鼠药物性肝损伤的保护作用
唐文诚
何清
宋大萍
沈政洪
王继生
《中国比较医学杂志》
CAS
北大核心
2021
4
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职称材料
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参考文献
引证文献
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