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人胎盘底蜕膜间充质干细胞的分离及其生物学特性研究 被引量:8
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作者 韩之波 王有为 +6 位作者 王涛 池颖 杨舟鑫 及月茹 孟磊 杨萍 韩忠朝 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期754-759,共6页
胎盘来源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,,MSC)与骨髓间充质干细胞相比,具有来源充足、免疫原性低、病毒污染率较低,且无社会伦理争议等方面的优点,使其具有更好的临床应用前景。胎盘组织不但包括来自母体的绒毛膜组织、羊膜组织... 胎盘来源间充质干细胞(mesenchymal stem cells,,MSC)与骨髓间充质干细胞相比,具有来源充足、免疫原性低、病毒污染率较低,且无社会伦理争议等方面的优点,使其具有更好的临床应用前景。胎盘组织不但包括来自母体的绒毛膜组织、羊膜组织,还包括来自母体的底蜕膜组织,但底蜕膜来源间充质干细胞生物学特性还需要进一步研究探讨。我们使用酶消化法分离底蜕膜来源间充质干细胞,通过短串联重复序列分析(STR)检测细胞是否均来源于母体组织,用MTT法检测细胞生长方式,流式细胞仪分析细胞周期和细胞表型,使用不同的诱导分化培养基检测其多向分化的能力。然后将底蜕膜间充质干细胞细胞与植物血凝素刺激的外周血单个核细胞共培养,用酶联免疫吸附试验检测上清γ-干扰素的水平。结果表明:短串联重复序列分析证明所得到的细胞均来源于母体组织,底蜕膜细胞生长呈典型的成纤维细胞形态。细胞表达常见的间充质干细胞表面标记CD90、CD73、CD105、CD44,不表达CD45,CD11b和CD34。在不同的条件培养基培养状态下,细胞均可向成骨、成脂和成软骨方向分化。结论:从胎盘底蜕膜获得的细胞,具有间充质干细胞的基本特征,是底蜕膜间充质干细胞。底蜕膜间充质干细胞能抑制植物血凝素刺激的人外周血单个核细胞分泌γ-干扰素,这使得底蜕膜间充质干细胞作为一个母亲自体间充质干细胞的重要来源,能安全的用于治疗母亲的免疫系统疾病。 展开更多
关键词 胎盘底蜕膜 间充质干细胞 生物学特性 免疫抑制
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人脐带、胎盘绒毛膜来源间充质干细胞的生物学特性比较研究 被引量:10
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作者 韩之波 杨舟鑫 +6 位作者 池颖 王有为 王涛 及月茹 杨萍 孟磊 韩忠朝 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期692-696,共5页
由于组织来源和增殖能力的优势,与骨髓间充质干细胞(MSC)相比,脐带和胎盘来源的MSC更具有临床应用前景,但脐带和胎盘来源MSC的生物学特性是否有差异值得进一步研究。本研究比较人脐带、胎盘绒毛膜来源MSC的生物学特性。将胎盘、脐带冲... 由于组织来源和增殖能力的优势,与骨髓间充质干细胞(MSC)相比,脐带和胎盘来源的MSC更具有临床应用前景,但脐带和胎盘来源MSC的生物学特性是否有差异值得进一步研究。本研究比较人脐带、胎盘绒毛膜来源MSC的生物学特性。将胎盘、脐带冲洗干净后,通过酶消化法分离脐带、胎盘来源的MSC。通过短串联重复序列分析(STR)检测细胞是否均来源于胎儿组织,用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术分析细胞表型,使用不同的诱导分化培养液检测其多向分化的能力。将MSC与植物血凝素刺激的外周血单个核细胞共培养,用酶联免疫吸附试验检测上清γ-干扰素的水平。结果表明,STR分析证实所得到的细胞均来源于胎儿组织,这两种细胞生长呈典型的成纤维细胞形态;细胞表达常见的MSC表面标记CD90、CD73、CD105、CD44,不表达CD45,CD11b和CD34;在不同的条件培养液培养下,细胞均可向成骨、成脂方向分化,但在成脂分化方面,绒毛膜来源MSC能形成更大的脂滴。结论:所得到的细胞均为MSC,均能抑制植物血凝素刺激的人外周血单个核细胞分泌γ-干扰素,且绒毛膜来源的MSC具有更强的抑制能力。这使得绒毛膜来源的MSC在治疗自身免疫系统疾病方面可能具有更大的优势。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 绒毛膜间充质干细胞 生物学特性 免疫调节
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葡萄几丁质酶基因在毕赤酵母中的表达及其生物活性研究 被引量:3
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作者 仲健 朱沙 张琦 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第5期90-93,共4页
采用一步法逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR),以葡萄幼叶为材料克隆几丁质酶基因的cDNA序列,序列分析表明,其包含基因完整的编码序列,编码由314个氨基酸组成的几丁质酶,通过抑菌试验证明,... 采用一步法逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR),以葡萄幼叶为材料克隆几丁质酶基因的cDNA序列,序列分析表明,其包含基因完整的编码序列,编码由314个氨基酸组成的几丁质酶,通过抑菌试验证明,所纯化的几丁质酶对尖孢镰刀菌菌丝生长有抑制作用,同时用水解CM-chitin-RBV的方法测定纯化的几丁质酶活性,在37℃,pH 5时分解几丁质的比活力为0.78△A 550/(μg.h),而该酶的粗提物的比活力为0.21△A 550/(μg.h)。 展开更多
关键词 葡萄 几丁质酶 MC-Chitin-RBV
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间充质干细胞用于类风湿关节炎治疗的理论及应用前景
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作者 刘广洋 韩忠朝 朱德琳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期860-861,F0004,共3页
关键词 类风湿关节炎 间充质干细胞 组织修复 免疫调节
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胡萝卜抗冻蛋白的快速与高效纯化 被引量:5
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作者 张党权 谭晓风 +1 位作者 仲健 王金发 《中南林学院学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期27-30,共4页
将胡萝卜抗冻蛋白在大肠杆菌中进行表达后,对获得的包涵体进行了初步的洗涤纯化.分别采用HPLC和N ativePAGE法对其进行最终的纯化.结果表明,两种方法都能获得高度纯化的目的蛋白,而且耗时都很少.但N ative PAGE法更为经济,且可以同时进... 将胡萝卜抗冻蛋白在大肠杆菌中进行表达后,对获得的包涵体进行了初步的洗涤纯化.分别采用HPLC和N ativePAGE法对其进行最终的纯化.结果表明,两种方法都能获得高度纯化的目的蛋白,而且耗时都很少.但N ative PAGE法更为经济,且可以同时进行多个样品的纯化,更适用于一般实验室. 展开更多
关键词 胡萝卜 抗冻蛋白 纯化 NATIVE PAGE
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《章次公医案》治痹证用药特色探析 被引量:3
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作者 倪世秋 李振彬 王继明 《中华中医药学刊》 CAS 2008年第7期1441-1442,共2页
深入分析了《章次公医案》治痹证用药特色,总结出其辨证首分虚实,善用虫药,法随证变的治疗特色,并对重用西河柳、附子的经验进行了总结,从药理学角度分析虫类药、西河柳、附子的镇痛作用机理,为现代临床医家治疗本病辨证用药提供借鉴依据。
关键词 章次公 医案 痹证 西河柳 附子
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胡萝卜抗冻蛋白的快速大量突变及原核表达 被引量:2
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作者 张党权 谭晓风 +1 位作者 仲健 王金发 《中南林学院学报》 CSCD 北大核心 2006年第5期15-19,共5页
胡萝卜抗冻(DcAFP)具有典型的LRR特征,由约24个氨基酸残基组成重复单元,其中的保守基序是:P×××××L××L××L×LS×N×L×G×I,其中的保守天冬酰胺在与冰晶表面结合中起... 胡萝卜抗冻(DcAFP)具有典型的LRR特征,由约24个氨基酸残基组成重复单元,其中的保守基序是:P×××××L××L××L×LS×N×L×G×I,其中的保守天冬酰胺在与冰晶表面结合中起着关键的作用.为了探明该关键氨基酸对DcAFP重要性,需要对其进行一系列突变,以检测这些突变体的热滞可能发生的变化,而这需要构建大量的突变体.基于此,采用定点突变技术对该基序中保守的天冬酰胺进行了一系列的疏水性缬氨酸突变和亲水性的谷氨酰胺突变,并将这一系列突变体克隆至原核表达载体pET-11a中,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行了高效表达与初步纯化,为后续测定其热滞活性的变化和验证天冬酰胺的重要性打下了基础. 展开更多
关键词 生物技术 胡萝卜 抗冻蛋白 定点突变 交错延伸PCR 原核表达
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互格链格孢多聚半乳糖醛酸酶的cDNA克隆 被引量:1
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作者 张党权 谭晓风 仲健 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期84-86,113,共4页
在提取真菌互格链格孢(Alternaria alternata)总RNA的基础上,通过一步法RT-PCR技术,获得了多聚半乳糖醛酸酶(PGase)的cDNA,并将其克隆至载体pBluescript SK(-),经双酶切和测序分析后,通过Gen-Bank对其进行序列比对分析。结果表明该cDNA... 在提取真菌互格链格孢(Alternaria alternata)总RNA的基础上,通过一步法RT-PCR技术,获得了多聚半乳糖醛酸酶(PGase)的cDNA,并将其克隆至载体pBluescript SK(-),经双酶切和测序分析后,通过Gen-Bank对其进行序列比对分析。结果表明该cDNA序列与已公布的序列存在14个碱基的差异,密码子简并性只导致3个氨基酸的不同,但不影响PGase与多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)的结合能力。研究结果为利用酵母双杂交技术来获得高活性的植物PGIP打下了基础。 展开更多
关键词 多聚半乳糖醛酸酶 RT—PCR 互格链格孢 CDNA克隆
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