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Smad4/DPC4基因小发夹RNA质粒表达载体的构建和鉴定
被引量：
2
1
作者
季国忠
张发明
+4 位作者
黄曙
缪林
刘政
喻容彬
王学浩
《医学研究生学报》
CAS
2006年第11期973-975,979,I0011,共5页
目的:构建Smad4基因小发夹RNA(shRNA)表达载体。方法:设计、合成3对编码Smad4基因shRNA的寡核苷酸序列,并分别将其克隆入pGCsi-H1/Neo/GFP质粒,酶切、测序鉴定,脂质体法转染293细胞。实时荧光定量PCR检测RNA干扰(RNA i)的抑制效果。结果...
目的:构建Smad4基因小发夹RNA(shRNA)表达载体。方法:设计、合成3对编码Smad4基因shRNA的寡核苷酸序列,并分别将其克隆入pGCsi-H1/Neo/GFP质粒,酶切、测序鉴定,脂质体法转染293细胞。实时荧光定量PCR检测RNA干扰(RNA i)的抑制效果。结果:在经HindⅢ和BamHⅠ双酶切分别鉴定三种重组载体后,DNA测序证实小干扰RNA(siRNA)序列正确,并被准确克隆入载体。实时荧光定量PCR检测结果表明三种重组载体psiSm ad4-1、psiSm ad4-2和psiSm ad4-3载体,分别对293细胞中Smad4基因mRNA表达的特异性抑制率为39.00%、8.80%和73.80%。结论:成功构建Sm ad 4 pGCsi-H1/Neo/GFP/shRNA质粒,为后期研究Smad4基因在肿瘤细胞中的作用机制和基因治疗打下基础。
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关键词
RNA干扰
SMAD4
小发夹RNA
293细胞
肿瘤
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职称材料
题名
Smad4/DPC4基因小发夹RNA质粒表达载体的构建和鉴定
被引量：
2
1
作者
季国忠
张发明
黄曙
缪林
刘政
喻容彬
王学浩
机构
南京医科
大学
第二附属
医院
消化
科
第四军医大学西京医院解放军消化研究所
南京医科
大学
公共卫生学院
南京医科
大学
第一附属
医院
肝胆外科
出处
《医学研究生学报》
CAS
2006年第11期973-975,979,I0011,共5页
基金
江苏省自然科学基金资助项目(批准号:BK2001168)
南京医科大学科技创新基金资助项目(批准号:CX2004004)
文摘
目的:构建Smad4基因小发夹RNA(shRNA)表达载体。方法:设计、合成3对编码Smad4基因shRNA的寡核苷酸序列,并分别将其克隆入pGCsi-H1/Neo/GFP质粒,酶切、测序鉴定,脂质体法转染293细胞。实时荧光定量PCR检测RNA干扰(RNA i)的抑制效果。结果:在经HindⅢ和BamHⅠ双酶切分别鉴定三种重组载体后,DNA测序证实小干扰RNA(siRNA)序列正确,并被准确克隆入载体。实时荧光定量PCR检测结果表明三种重组载体psiSm ad4-1、psiSm ad4-2和psiSm ad4-3载体,分别对293细胞中Smad4基因mRNA表达的特异性抑制率为39.00%、8.80%和73.80%。结论:成功构建Sm ad 4 pGCsi-H1/Neo/GFP/shRNA质粒,为后期研究Smad4基因在肿瘤细胞中的作用机制和基因治疗打下基础。
关键词
RNA干扰
SMAD4
小发夹RNA
293细胞
肿瘤
Keywords
RNA interference
Smad 4
shRNA
293 cell line
Neoplasms
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Smad4/DPC4基因小发夹RNA质粒表达载体的构建和鉴定
季国忠
张发明
黄曙
缪林
刘政
喻容彬
王学浩
《医学研究生学报》
CAS
2006
2
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