表达胃癌MG7-Ag模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗的研制和初步鉴定 被引量：3

1

作者 孟繁平 丁杰 +3 位作者 喻召才 韩全利 郭长存 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期138-140,143,共4页

目的　　研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗。　方法将ＮｃｏⅠ位点和ＭＧ７－Ａｇ模拟表位编码序列的互补序列设计到上游引物的５′端。以含有ＨＢｃＡｇ全序列的质粒ｐ１．２Ⅱ为模板，通过ＰＣＲ扩增，获得Ｍ... 目的　　研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位的减毒鼠伤寒杆菌疫苗。　方法将ＮｃｏⅠ位点和ＭＧ７－Ａｇ模拟表位编码序列的互补序列设计到上游引物的５′端。以含有ＨＢｃＡｇ全序列的质粒ｐ１．２Ⅱ为模板，通过ＰＣＲ扩增，获得ＭＧ７－Ａｇ模拟表位与ＨＢｃＡｇ的融合基因。将目的基因插入载体ｐＵＣｍ－Ｔ，经酶切鉴定和序列测定证实后，再亚克隆至与减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４５５０互补的质粒ｐＹＡ３３４１中，再以此重组质粒转化减毒鼠伤寒杆菌Ｘ４５５０。结果序列测定证实，ＰＣＲ产物为胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位与ＨＢｃＡｇ的融合基因片段；最终得到含有目的基因片段的重组表达载体ｐＹＡ３３４１。重组质粒在Ｘ４５５０中的表达产物，经Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔ表明，在相对分子质量（Ｍｒ）约在２２　０００处有１条可与抗ＭＧ７　ｍＡｂ特异性结合的多肽表位。结论成功地研制可表达胃癌ＭＧ７－Ａｇ模拟表位减毒鼠伤寒杆菌疫苗，为进一步研究其在胃癌免疫治疗中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 胃肿瘤 模拟表位 减毒鼠伤寒杆菌 MG7-AG 胃癌 疫苗 研制 鉴定

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CXC趋化因子CRG-2真核表达载体的构建及表达 被引量：1

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作者 刘志国 杨静华 +4 位作者 安华章 吴汉平 王海燕 韩者艺 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期510-511,共2页

关键词 crg-2 肺癌细胞 转染 趋化因子 CXC T细胞 真核表达载体

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MGr1-Ag表达上调及下调的胃癌细胞株的建立及鉴定 被引量：1

3

作者 孙力 时永全 +4 位作者 郭长存 韩全利 杜静平 韩英 樊代明 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期613-615,共3页

为研究胃癌细胞耐药相关新基因MGr1 Ag对胃癌耐药细胞多药耐药性的调节作用及其机制。克隆MGr1 Ag的全长cDNA并构建其正反义真核表达载体 ,以脂质体介导法将正、反义真核表达载体分别转染入人胃癌细胞系MGC80 3与人胃癌多药耐药细胞系SG... 为研究胃癌细胞耐药相关新基因MGr1 Ag对胃癌耐药细胞多药耐药性的调节作用及其机制。克隆MGr1 Ag的全长cDNA并构建其正反义真核表达载体 ,以脂质体介导法将正、反义真核表达载体分别转染入人胃癌细胞系MGC80 3与人胃癌多药耐药细胞系SGC790 1/VCR中。结果显示 ,经RT PCR扩增出大小约为 1.0kb的基因片段 ,成功克隆入pUCm T载体 ,经DNA测序证实为MGr1 Ag基因。将其克隆入pCDNA3 .1/V5 His后 ,经限制性核酸内切酶酶切鉴定 ,获得携有MGr1 Ag基因真核表达载体pCD NA3 1/V5 His MGr1 Ag及其反义表达载体pCDNA3 .1/V5 His anMGr1 Ag。以脂质体介导法将MGr1 Ag的正、反义真核表达载体分别转染入MGC80 3与SGC790 1/VCR中 ,经Westernblot证实 ,成功建立了MGr1 Ag表达上调及下调的胃癌细胞株 ,为研究MGr1 展开更多

关键词 抗药性 多药 胃肿瘤 真核表达载体

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胃癌前病变MC5抗原定量分析及对胃癌高危人群预测价值的探讨 被引量：1

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作者 刘杰 胡家露 +5 位作者 曹晓燕 樊代明 陈希陶 张学庸 林一帆 张沥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第1期43-46,共4页

应用本院制备的抗结肠癌单克隆抗体ＭＣ５及ＡＢＣ免疫组化染色，检测了６４例具有随访结果的胃粘膜异型增生标本。用计算机图像分析系统对ＭＣ５抗原的表达进行了定量分析，并通过计算约登指数及绘制ＲＯＣ曲线探讨了高危界值。６４例... 应用本院制备的抗结肠癌单克隆抗体ＭＣ５及ＡＢＣ免疫组化染色，检测了６４例具有随访结果的胃粘膜异型增生标本。用计算机图像分析系统对ＭＣ５抗原的表达进行了定量分析，并通过计算约登指数及绘制ＲＯＣ曲线探讨了高危界值。６４例标本中包括癌变组３０例，未癌变组３４例，随访时间６～７２个月（平均２６个月）。免疫组化染色结果显示，癌变组３０例标本中有２０例表达阳性（６６．７％），未癌变组３４例标本中仅８例呈阳性表达（２３．５％），两组比较差异显著（Ｐ＜０．０１）。图像分析等结果显示，ＭＣ５的平均灰度值＞０．２２为高危界值，以此值作为判定不典型增生是否具有癌变倾向的依据，其灵敏度为７６．７％，特异度为７３．５％，准确度为７５．０％。结论：ＭＣ５抗原的表达程度和胃粘膜不典型增生癌变关系密切。ＭＣ５抗原表达阳性的胃粘膜不典型增生尤其当灰度值≥０．２２的病例，是具有潜在癌变倾向的高危人群，对这些病人进行严密的随访监测，可提高早期胃癌的检出率。 展开更多

关键词 胃粘膜增生 MC5抗原 胃肿瘤 癌前病变 高危人群

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胃癌相关抗原表位模拟短肽的筛选 被引量：1

5

作者 韩全利 丁杰 +5 位作者 巩爱春 喻召才 乔泰东 陈宝军 张学庸 樊代明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期308-310,共3页

目的 :筛选能模拟胃癌相关抗原表位的功能短肽。方法 :利用离子交换层析 ,对抗胃癌相关抗原单克隆抗体 (mAb)进行纯化 ,并以此mAb为靶标 ,将其包被于ELISA板上 ,以噬菌体随机 12肽库对其进行 3轮亲和筛选。结果 :从噬菌体随机12肽库中 ... 目的 :筛选能模拟胃癌相关抗原表位的功能短肽。方法 :利用离子交换层析 ,对抗胃癌相关抗原单克隆抗体 (mAb)进行纯化 ,并以此mAb为靶标 ,将其包被于ELISA板上 ,以噬菌体随机 12肽库对其进行 3轮亲和筛选。结果 :从噬菌体随机12肽库中 ,筛选到 12个噬菌体阳性克隆。结论 :获得了具有模拟胃癌相关抗原表位的阳性噬菌体克隆 。 展开更多

关键词 表位 噬菌体表面呈现 随机短肽库

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超抗原与T细胞的作用 被引量：4

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作者 时永全 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第1期75-77,共3页

超抗原不需要抗原提呈细胞的加工处理，以MHCII类分子依赖或非依赖的方式递呈，结合于TCR的Vβ而激活T细胞，使其发生增殖、凋亡和免疫无反应性。研究超抗原与T细胞的作用，将有助于探讨淋巴细胞对自身抗原的耐受机制，HIV致病的机理，... 超抗原不需要抗原提呈细胞的加工处理，以MHCII类分子依赖或非依赖的方式递呈，结合于TCR的Vβ而激活T细胞，使其发生增殖、凋亡和免疫无反应性。研究超抗原与T细胞的作用，将有助于探讨淋巴细胞对自身抗原的耐受机制，HIV致病的机理，以及超抗原在肿瘤免疫治疗中的安全应用等。 展开更多

关键词 超抗原 增殖 凋亡 T细胞

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胃癌相关抗原MG7—Ag免疫PCR检测系统有关影响因素的分析 被引量：1

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作者 陈峥 任军 等 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第6期516-518,共3页

目的：应用免疫PCR技术检测胃癌相关抗原MG7－Ag时，对影响该系统的相关因素进行分析比较。方法 以ELISA法与免疫PCR同时检测胃癌抗原MGAg，以比较这两种方法检出抗原的敏感性和特异性。同时检测抗体浓度、反应时间、链亲和素的浓度，... 目的：应用免疫PCR技术检测胃癌相关抗原MG7－Ag时，对影响该系统的相关因素进行分析比较。方法 以ELISA法与免疫PCR同时检测胃癌抗原MGAg，以比较这两种方法检出抗原的敏感性和特异性。同时检测抗体浓度、反应时间、链亲和素的浓度，以及DNA拷贝数对免疫PCR系统的影响。结果 免疫PCR法检出抗原的敏感性远远高于ELISA法，显著提高了胃癌患者外周血中MGAg抗原的检出率。与ELISA法相比较，相应的抗体浓度、反应时间、链亲和素的浓度不会导致非特异性条带的出现。同时确定DNA的最适拷贝数为10^-3ng，即对系统非特异性常规ELISA法，特异性较好，可成为检测患者外周血中肿瘤抗原的有效手段。 展开更多

关键词 免疫-PCR 胃癌 相关抗原 单克隆抗体 影响因素

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延迟整流钾通道在人AGS胃癌细胞的表达及Kv1·5对AGS细胞生长的影响

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作者 兰梅 时永全 +3 位作者 韩者艺 郝志明 潘阳林 樊代明 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期709-712,共4页

目的观察9种延迟整流钾通道在人AGS胃癌细胞的表达及下调Kv1·5表达对AGS细胞生长的影响。方法用RT-PCR方法检测Kv1·1、Kv1·2、Kv1·3、Kv1·5、Kv1·6、Kv2·1、Kv2·2、Kv3·1和Kv3·2α... 目的观察9种延迟整流钾通道在人AGS胃癌细胞的表达及下调Kv1·5表达对AGS细胞生长的影响。方法用RT-PCR方法检测Kv1·1、Kv1·2、Kv1·3、Kv1·5、Kv1·6、Kv2·1、Kv2·2、Kv3·1和Kv3·2α亚单位在AGS细胞的表达;用间接免疫荧光法证实Kv1·5的蛋白表达后,采用小干扰RNA(siRNA)下调Kv1·5表达,用MTT及流式细胞术观察其对细胞生长、细胞周期分布的影响。结果在AGS细胞中可检测到7种延迟整流钾通道的表达,其中Kv1·3、Kv1·5和Kv2·1的mRNA水平较高,Kv1·6和Kv3·1的水平较低。间接免疫荧光法证实Kv1·5主要表达于AGS的细胞膜上。用siRNA下调内源性Kv1·5的表达后,AGS细胞生长明显减慢,细胞阻滞于G1期,细胞增殖指数明显降低。结论在AGS细胞中有多种延迟整流钾通道的表达,Kv1·5可能通过对细胞周期的影响而参与胃癌细胞的增殖调节。 展开更多

关键词 延迟整流钾通道 胃肿瘤 逆转录聚合酶链反应 RNA干扰 细胞增殖

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利用噬菌体呈现技术筛选单抗MG7 ScFv片段

9

作者 喻召才 丁杰 +1 位作者 樊代明 张学庸 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期564-565,共2页

关键词 噬菌体呈现技术 单克隆抗体 基因工程 胃癌

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热休克蛋白-多肽复合物诱导肿瘤特异性免疫的机理

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作者 时永全 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第A02期58-60,共3页

近年研究发现，肿瘤组织的热休克蛋白－多肽复合物具有肿瘤疫苗的免疫作用，可诱导动物产生特异性的抗肿瘤免疫应答。在诱导免疫应答中，巨噬细胞和Ｂ细胞作为抗原提呈细胞而发挥作用。

关键词 热休克蛋白 肿瘤疫苗 多肽复合物

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神经酰胺(ceramide)信使途径 被引量：3

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作者 王雨田 孙长凯 +1 位作者 鞠躬 胡家露 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期301-305,共5页

生物体内神经酰胺有多种生成途径。作为重要的第二信使，神经酰胺在多种信号转导过程中发挥广泛作用，从而影响细胞生长、增殖、分化、凋亡及损伤等多种生理、病理过程。此机制的发现被认为是近年来信号转导研究的重要进展之一。

关键词 神经酰胺 第二信使 信号转导

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