激光治疗糖尿病视网膜病变的研究进展 被引量：31

1

作者 李红 曹虹 王雨生 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第5期489-492,共4页

糖尿病视网膜病变视力损害和失明的主要原因是增生性糖尿病视网膜病变和糖尿病黄斑水肿。对于这2个并发症,激光治疗是目前唯一被证实有效的方法。激光治疗联合全身风险因素的优化控制,可改善糖尿病视网膜病变的治疗效果。未来如何确保... 糖尿病视网膜病变视力损害和失明的主要原因是增生性糖尿病视网膜病变和糖尿病黄斑水肿。对于这2个并发症,激光治疗是目前唯一被证实有效的方法。激光治疗联合全身风险因素的优化控制,可改善糖尿病视网膜病变的治疗效果。未来如何确保优化控制全身风险因素;如何改良激光治疗策略及选择激光治疗的干预时机;如何权衡激光治疗的利益和风险,减少激光治疗并发症的发生,延缓视力损害的发展,仍是糖尿病视网膜病变临床治疗面临的重要课题。 展开更多

关键词 糖尿病视网膜病变 激光凝固术 并发症

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脉络膜新生血管基因治疗研究进展 被引量：5

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作者 叶子 王雨生 《眼科新进展》 CAS 2008年第6期460-463,467,共5页

脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)常导致严重的视力丧失,抑制CNV形成是治疗CNV性疾病的关键。基因治疗CNV已成为目前研究的热点,我们主要从CNV防治的基因转移载体、基因导入方式、常用的基因技术和治疗靶点等方面,对CN... 脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)常导致严重的视力丧失,抑制CNV形成是治疗CNV性疾病的关键。基因治疗CNV已成为目前研究的热点,我们主要从CNV防治的基因转移载体、基因导入方式、常用的基因技术和治疗靶点等方面,对CNV基因治疗的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 脉络膜新生血管 基因治疗

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从黄斑变性治疗的重大突破看临床学科研究生的培养 被引量：4

3

作者 王雨生 《医学研究生学报》 CAS 2009年第11期1124-1126,共3页

关键词 转化医学 年龄相关性黄斑变性 研究生教育

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英国眼科医师的培训和考核制度 被引量：1

4

作者 严宏 惠延年 俞兰 《眼科新进展》 CAS 2004年第2期156-157,共2页

本期我们刊发了严宏等撰写的“英国眼科医师的培训和考核制度”。英国眼科医师严格的培训和考核制度值得我们借鉴。我刊期待着更多的作者撰文 ,介绍不同国家眼科医师教育、培训和考核的经验 ,并在此基础上 ,提出我国眼科医师教育、培训... 本期我们刊发了严宏等撰写的“英国眼科医师的培训和考核制度”。英国眼科医师严格的培训和考核制度值得我们借鉴。我刊期待着更多的作者撰文 ,介绍不同国家眼科医师教育、培训和考核的经验 ,并在此基础上 ,提出我国眼科医师教育、培训和考核的对策和建议 ,从而完善我国眼科医师教育、培训和考核制度。同时 ,我们也欢迎有关国际眼科学术会议预告、会议纪要以及国际和地区性眼科学会、协会。 展开更多

关键词 眼科 培训与考核

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凋亡诱导因子在视网膜疾病中的研究进展 被引量：1

5

作者 杜红俊 王雨生 《眼科新进展》 CAS 2005年第3期276-278,共3页

凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)是位于线粒体膜间隙的一种黄素蛋白。在凋亡信号刺激时,AIF分子从线粒体释放到细胞浆,然后转位到细胞核内,引起染色体核周边凝集和DNA呈大片段断裂,从而使细胞发生凋亡的特征性改变。AIF所... 凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)是位于线粒体膜间隙的一种黄素蛋白。在凋亡信号刺激时,AIF分子从线粒体释放到细胞浆,然后转位到细胞核内,引起染色体核周边凝集和DNA呈大片段断裂,从而使细胞发生凋亡的特征性改变。AIF所诱导的细胞凋亡是独立于caspases-系统的另一条更原始和更保守的凋亡途径,因而不受(caspas-es抑制剂的抑制。凋亡与许多眼病的发生具有密切的关系,关于AIF在眼病中的作用也有报道。我们就AIF诱导凋亡的机制及其在光感受器细胞、视网膜神经节细胞和视网膜色素上皮细胞凋亡中的作用进行简要回顾。 展开更多

关键词 凋亡诱导因子 凋亡 视网膜

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一种昆明种属来源的视网膜变性小鼠同源导入C57BL/6J小鼠近交系的表型研究

6

作者 姚璐 齐林嵩 +2 位作者 安晶 张作明 张磊 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1183-1187,共5页

目的将本实验室发现的一种昆明种属来源的自发性遗传性视网膜变性小鼠(暂命名为KMrdf/rdf小鼠)的致病基因同源导入C57BL/6J小鼠,培育一种新的近交系小鼠(暂命名为B6rdf/rdf小鼠),并对B6rdf/rdf小鼠进行眼部表型的发育学研究。方法采用... 目的将本实验室发现的一种昆明种属来源的自发性遗传性视网膜变性小鼠(暂命名为KMrdf/rdf小鼠)的致病基因同源导入C57BL/6J小鼠,培育一种新的近交系小鼠(暂命名为B6rdf/rdf小鼠),并对B6rdf/rdf小鼠进行眼部表型的发育学研究。方法采用眼底照相、眼底荧光素血管造影、组织形态学和视网膜电图观测不同年龄B6rdf/rdf小鼠的眼部表型。结果眼底照相和荧光素血管造影发现B6rdf/rdf小鼠表现为进行性视网膜血管退化及脱色素改变,视网膜组织形态学表现为外核层在P14显著变薄,外核层和外网状层至P21已基本消失,视网膜电图自P14已记录不到明显波形。结论 B6rdf/rdf小鼠眼部表型呈快速进行性改变,与KMrdf/rdf小鼠表型相似。 展开更多

关键词 视网膜色素变性 视网膜电图 同源导入近交系 表型 发育

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放射性视网膜病变的认识及研究进展 被引量：10

7

作者 杜军辉(综述) 王雨生(审校) 张晓光(审校) 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期283-287,共5页

放射性视网膜病变是指人体接触放射线或放射治疗后发生的一类视网膜病变。在中国，多见于鼻咽癌的放射治疗后。虽然随着放射设备的改进和放射治疗技术的进步，治疗的靶向性明显提高，不良反应减少，但疗效的提高使患者的生存时间逐渐延... 放射性视网膜病变是指人体接触放射线或放射治疗后发生的一类视网膜病变。在中国，多见于鼻咽癌的放射治疗后。虽然随着放射设备的改进和放射治疗技术的进步，治疗的靶向性明显提高，不良反应减少，但疗效的提高使患者的生存时间逐渐延长，而最终表现出放射性视网膜病变的发病率增高。因放射性视网膜病变的眼底改变与一些常见视网膜血管病变有相似之处，故临床易被忽视或误诊；而没有统一规范的治疗方案，往往最终导致无法挽救的视力丧失。因此，应引起眼科和肿瘤科医师的重视。就放射性视网膜病变的发病机制、临床表现、辅助检查、诊断和鉴别诊断以及治疗方法，尤其是近年来最新的治疗进展进行综述。 展开更多

关键词 放射性视网膜病变 视网膜 综述 治疗

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活体光学成像技术在眼科学领域的应用前景 被引量：2

8

作者 李鹤一 王雨生 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2011年第6期501-503,共3页

活体光学成像技术是一种可实时动态观察生物生物学行为的影像学技术,目前已经应用于生命科学的各个方面,如干细胞治疗、肿瘤研究和药物研究等。该技术在眼科学领域也有很大的应用潜力。现对活体光学成像技术的应用现状作一总结,并展望... 活体光学成像技术是一种可实时动态观察生物生物学行为的影像学技术,目前已经应用于生命科学的各个方面,如干细胞治疗、肿瘤研究和药物研究等。该技术在眼科学领域也有很大的应用潜力。现对活体光学成像技术的应用现状作一总结,并展望其在眼科学领域的应用前景。 展开更多

关键词 活体光学成像技术 眼科学 干细胞治疗

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癌钙调蛋白在神经系统及视神经再生方面的研究进展 被引量：1

9

作者 石燕红 李书明（综述） 崔志利（审校） 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期570-574,共5页

癌钙调蛋白（OM）是钙结合蛋白家族中的一员，属于肌钙蛋白c超家族，它具有不同于其他钙结合蛋白的特异性钙结合（CD）区域。通过研究其结构和分布特征，发现OM在调节细胞的电活动、调控细胞内信号传导通路及细胞周期等方面发挥着重要... 癌钙调蛋白（OM）是钙结合蛋白家族中的一员，属于肌钙蛋白c超家族，它具有不同于其他钙结合蛋白的特异性钙结合（CD）区域。通过研究其结构和分布特征，发现OM在调节细胞的电活动、调控细胞内信号传导通路及细胞周期等方面发挥着重要的作用。近年来，OM在促进神经轴突再生方面的研究是目前研究的热点之一，尤其是在视神经再生的研究方面取得了一定的成绩，并有待运用于临床。OM促进视神经再生的作用为解决脊髓和脑神经的再生性难题打下了基础。对OM的概念、组织的分布、主要的作用及机制、与视神经再生的关系方面进行综述。 展开更多

关键词 癌钙调蛋白 神经轴突 再生 视神经

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盐酸去甲万古霉素-PNIPAAm-PEO纳米粒在兔眼内的毒理学和药代动力学研究

10

作者 王丽曌 陈翔 +2 位作者 王雨生 陈晓农 王庆伟 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期200-205,共6页

背景 传统给药方法治疗眼内炎症时,药物难以透过血-视网膜屏障而达到有效的治疗浓度,局部药物缓释系统可以减少用药剂量并降低药物的毒性作用,构建载药药物缓释系统对眼内感染性疾病的治疗具有重要意义. 目的 评价多聚体材料聚N-异丙基... 背景 传统给药方法治疗眼内炎症时,药物难以透过血-视网膜屏障而达到有效的治疗浓度,局部药物缓释系统可以减少用药剂量并降低药物的毒性作用,构建载药药物缓释系统对眼内感染性疾病的治疗具有重要意义. 目的 评价多聚体材料聚N-异丙基丙烯酰胺-聚氧化乙烯（PNIPAAm-PEO）构建的盐酸去甲万古霉素-PNIPAAm-PEO（NV-PNIPAAm-PEO）纳米粒在兔眼玻璃体腔内注射给药后的眼部毒理学和眼内药代动力学特征,为眼后节给药治疗感染性眼病提供依据. 方法 NV-PNIPAArn-PEO纳米粒平均载药量约为质量分数22％,用无菌生理盐水配成质量浓度为20 g/L的凝胶液.新西兰白兔41只采用随机数字表法分为实验组31只和对照组10只,将20 g/L NV-PNIPAAm-PEO凝胶液0.1 ml注射入实验组兔的一侧眼玻璃体腔内,对照组注入等容量的生理盐水.分别于给药后的第1、2、3、7、14、21和28天进行眼前后节裂隙灯显微镜和B型超声检查,记录实验眼的视网膜电图（ERG）反应,对角膜、虹膜、玻璃体和视网膜组织行组织病理学检查,以评价NV-PNIPAAm-PEO对眼部组织结构和功能的影响.将兔眼角膜和视网膜脉络膜制备组织匀浆,收集兔房水、玻璃体和血浆样本,用高效液相色谱分析（HPLC）法检测上述各组织中的药物质量浓度.结果 NV-PNIPAAm-PEO玻璃体腔内注射后1～28 d,裂隙灯显微镜下可见眼前后节组织正常,B型超声检查未见异常；最大混合ERG b波振幅、a波振幅和峰潜时在两组间的差异均无统计学意义（P＞0.05）.视网膜组织病理学检查表明,两组兔玻璃体腔内注射后视网膜结构均正常.HPLC法分析表明,注射后1～28d,兔眼角膜组织中药物质量分数均低于检测水平下限,血浆药物质量浓度最高为（0.34±0.11） mg/L,房水药物质量浓度为（0.08±0.04）～（2.16±0.07） mg/L,视网膜脉络膜中药物质量分数为（0.11±0.02）～（2.54±0.38）μg/g,玻璃体药物质量浓度为（5.65±1.14） ～ （406.69±21.05） mg/L,21d内玻璃体腔内药物质量浓度高于大多数革兰阳性菌的最低抑菌质量浓度. 结论 载药量约为22％ NV-PNIPAAm-PEO纳米粒在兔眼玻璃体腔内注射未见明显眼内毒性反应,玻璃体腔内可维持有效药物质量浓度时间达21d,NV-PNIPAAm-PEO纳米粒是治疗眼内感染较好的缓释给药方法. 展开更多

关键词 眼 抗生素 药代动力学 盐酸去甲万古霉素 眼内炎 药物治疗 注射 玻璃体内 聚N-异丙基丙烯酰胺-聚氧化乙烯 纳米微粒 色谱法 高效液相 革兰阳性细菌 毒理学 兔

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醛糖还原酶抑制剂AL-1576对大鼠半乳糖性白内障的防治研究

11

作者 张玉凤 周健 +1 位作者 张自峰 路璐 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期495-499,共5页

背景糖性白内障是糖尿病的主要眼部并发症之一，研究表明醛糖还原酶（AR）活性的升高与糖尿病的慢性并发症密切相关，是抗糖性白内障药物研究的重要靶点，其研究对糖性白内障的防治具有重要意义。目的探讨AR抑制剂AL-1576对半乳糖性白... 背景糖性白内障是糖尿病的主要眼部并发症之一，研究表明醛糖还原酶（AR）活性的升高与糖尿病的慢性并发症密切相关，是抗糖性白内障药物研究的重要靶点，其研究对糖性白内障的防治具有重要意义。目的探讨AR抑制剂AL-1576对半乳糖性白内障的防治效果和作用机制。方法4～5周龄SD大鼠42只，通过喂养质量分数50％半乳糖饲料制作半乳糖性白内障模型。大鼠按照随机数字表法平均分为7个组，AL-1576预防组，早、中、晚期治疗组在喂食50％半乳糖饲料的当天及5、10、15d后开始添加质量分数0．0125％AL-1576，另设空白对照组、模型对照组和AL-1576干预10d后撤除的早期撤药组。在裂隙灯显微镜下动态观察各组大鼠晶状体的混浊程度并进行分级，造模35d时摘出晶状体，分别测量其干质量、湿质量，计算并比较各组晶状体含水量的变化；检测造模35d时各组大鼠晶状体内AR活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及谷胱甘肽（GSH）的含量。结果模型对照组大鼠12只眼晶状体均为Ⅳ级混浊，AL-1576预防组12只眼晶状体均透明，早期撤药组为Ⅱ-Ⅲ级混浊，早期治疗组为Ⅱ级混浊，而中期治疗组、晚期治疗组均为Ⅲ～Ⅳ级混浊，7个组晶状体混浊的程度差异均有统计学意义（H=17．760，P=0．009）。各AL-1576治疗组大鼠晶状体含水量、AR活性均比模型对照组明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05），但给药的时间越晚，晶状体含水量、AR活性降低的程度越小；各AL-1576治疗组大鼠晶状体SOD活性和GSH的含量明显高于模型对照组，差异均有统计学意义（P〈0．05），AL-1576预防组的升高幅度最大。结论在半乳糖性白内障形成的不同阶段给予AR抑制剂AL-1576可明显抑制AR的活性。AL-1576通过阻断和减轻晶状体水肿，提高晶状体的抗氧化能力，预防和延缓晶状体混浊的发生。 展开更多

关键词 白内障 半乳糖 醛糖还原酶 醛糖还原酶抑制剂

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结缔组织生长因子在增生性玻璃体视网膜病变增生膜中的表达 被引量：7

12

作者 郭长梅 惠延年 +4 位作者 王雨生 阎峰 韩泉洪 崔志利 马吉献 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2005年第2期128-131,共4页

目的观察结缔组织生长因子(CTGF)在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)增生膜中的表达,并鉴别增生膜中阳性细胞来源。方法采用SABC免疫组织化学方法对玻璃体切割手术获得的43例PVR增生膜进行CTGF蛋白的检测,并采用免疫荧光双标记技术在阳性表... 目的观察结缔组织生长因子(CTGF)在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)增生膜中的表达,并鉴别增生膜中阳性细胞来源。方法采用SABC免疫组织化学方法对玻璃体切割手术获得的43例PVR增生膜进行CTGF蛋白的检测,并采用免疫荧光双标记技术在阳性表达的增生膜和正常人眼球标本中判定CTGF阳性细胞来源。结果免疫组织化学显示PVR增生膜中阳性细胞形态多是一类胞体为长圆形或多角形,胞浆丰富的上皮样细胞。17例C2-C3级膜中12例阳性,26例D1-D3级膜中19例阳性,其染色反应为阴性"-"、弱阳性"+"、阳性"2+"和强阳性"3+"的分别有5、3、6、3例和7、5、8、6例,总阳性率分别为70.6%和73.1%。统计学分析CTGF阳性表达与膜分级问无相关性(P>0.1)。免疫荧光双标记法显示PVR增生膜中有RPE、巨噬细胞、神经胶质细胞,CTGF阳性细胞来源于RPE细胞;正常眼球RPE层不表达CTGF。结论正常眼球RPE层不表达CTGF,PVR形成过程中RPE细胞在TGF-β1等生长因子的刺激下,CTGF表达上调,表明CTGF参与了PVR增生膜的形成和发展。 展开更多

关键词 增生性玻璃体视网膜病变 结缔组织生长因子 增生膜 SABC免疫组织化学方法 免疫荧光双标记法 CTGF 玻璃体切割手术 RPE细胞 细胞来源 神经胶质细胞 TGF-β1 阳性表达 PVR 双标记技术 上皮样细胞 统计学分析 眼球标本 细胞形态

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缺氧诱导因子1与眼内新生血管 被引量：11

13

作者 张鹏 王雨生 +2 位作者 惠延年 白建伟 胡丹 《眼科新进展》 CAS 2004年第3期224-226,共3页

缺氧可上调血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的表达 ,造成眼内新生血管形成。在缺氧状态下 ,VEGF的表达是由缺氧诱导因子 1(hypoxia in duciblefactor 1,HIF 1)诱导的。现就HIF 1的功能、信号传导途径、HIF

关键词 缺氧诱导因子1 眼内新生血管 缺氧 血管内皮生长因子

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p42/p44 MAPK信号转导通路在缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞VEGF表达中的作用 被引量：13

14

作者 赵炜 王雨生 +2 位作者 张瑞 张鹏 惠延年 《眼科新进展》 CAS 2005年第2期109-112,共4页

目的　探讨p4 2 /p4 4丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activedproteinkinase ,MAPK)信号转导通路对缺氧诱导的人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞VEGF表达中的作用。方法　利用CoCl2 建立培养的人RPE细胞缺氧模型,用2 0... 目的　探讨p4 2 /p4 4丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activedproteinkinase ,MAPK)信号转导通路对缺氧诱导的人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium ,RPE)细胞VEGF表达中的作用。方法　利用CoCl2 建立培养的人RPE细胞缺氧模型,用2 0μmol·L-1p4 2 /p4 4MAPK特异性阻断剂PD980 5 9处理RPE细胞,在缺氧条件下分别培养0min、5min、10min、30min、6 0min和12 0min ,用Westernblot方法检测磷酸化p4 2 /p4 4MAPK表达;培养人RPE细胞1h、3h、6h、12h和2 4h ,用酶联免疫吸附试验(en zymelinkedimmunosorbantassay ,ELISA)检测缺氧条件下RPE细胞上清中VEGF的含量。结果　缺氧刺激5min、10min、30min、6 0min和12 0min时,磷酸化p4 2 / p4 4MAPK水平逐渐增高;相应PD980 5 9处理组磷酸化p4 2 / p4 4MAPK水平降低,只可见磷酸化p4 2MAPK条带。在缺氧1h、3h、6h、12h和2 4h时,RPE细胞上清液中VEGF含量随时间逐渐增加(P <0 .0 1) ,PD980 5 9处理组VEGF含量较对照组显著减少(P <0 .0 1)。结论　p4 2 /p4 展开更多

关键词 视网膜色素上皮细胞 血管内皮生长因子 丝裂原活化蛋白激酶 缺氧

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结缔组织生长因子mRNA在增生性糖尿病视网膜病变视网膜前纤维血管膜中的表达 被引量：8

15

作者 郭长梅 惠延年 +3 位作者 王雨生 马吉献 阎峰 苏静波 《眼科新进展》 CAS 2003年第2期79-81,共3页

目的　观察结缔组织生长因子 ( connective tissue growth factor,CTGF) m RNA在增生性糖尿病视网膜病变 ( proliferative diabetic retinopathy,PDR)纤维血管性视网膜前膜中的表达。方法　采用原位杂交方法 ,对玻璃体切割术获得的 6例 ... 目的　观察结缔组织生长因子 ( connective tissue growth factor,CTGF) m RNA在增生性糖尿病视网膜病变 ( proliferative diabetic retinopathy,PDR)纤维血管性视网膜前膜中的表达。方法　采用原位杂交方法 ,对玻璃体切割术获得的 6例 PDR的纤维血管性膜进行 CTGF m RNA的检测。结果　 2例纤维血管性膜标记为阳性染色 ( ) ,4例为强阳性染色 ( ) ;每例标本随机计数 10 0个细胞中的阳性细胞数 ,取 6例标本的平均值 ,计算平均阳性率为 77% .阳性细胞多见于成纤维细胞样细胞和新生血管的血管内皮细胞。结论　 PDR纤维血管性膜形成过程中成纤维样细胞及血管内皮细胞在 TGF-β等生长因子的刺激下 ,CTGF m RNA显著上调 ,CTGF参与了 PDR纤维血管性膜的形成和发展。 展开更多

关键词 结缔组织生长因子 原位杂交 纤维血管膜 视网膜前膜 增生性糖尿病视网膜病变

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MEK/ERK和PI3K/Akt通路对大鼠脉络膜新生血管中DDR2和MMP-13表达的调控作用 被引量：5

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作者 杨秀梅 王雨生 +2 位作者 张建 李燕 药立波 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期678-685,共8页

背景 研究表明盘状结构域受体2（DDR2）和基质金属蛋白酶-13（MMP-13）在肿瘤新生血管发生中具有重要作用,是相关疾病治疗的关键靶点,但DDR2和MMP-13在脉络膜新生血管（CNV）发生中的作用尚不清楚.目的 探讨DDR2和MMP-13在大鼠CNV中的... 背景 研究表明盘状结构域受体2（DDR2）和基质金属蛋白酶-13（MMP-13）在肿瘤新生血管发生中具有重要作用,是相关疾病治疗的关键靶点,但DDR2和MMP-13在脉络膜新生血管（CNV）发生中的作用尚不清楚.目的 探讨DDR2和MMP-13在大鼠CNV中的表达特点以及MEK/ERK和PI3 K/Akt通路对DDR2及MMP-13表达的调控作用.方法 采用532 nm倍频激光视网膜光凝法制备棕色挪威（BN）大鼠CNV模型,将78只BN模型鼠按照随机数字表法分为正常对照组（n=7）、模型对照组（n=39）、PD98059（MEK1抑制剂）组（n=16）和LY294002（PI3K抑制剂）组（n=16）,PD98059组和LY294002组大鼠分别于光凝后1d、7d玻璃体内注射5 mmol/L PD98059 3μl或5 mmol/L LY294002 3μl.分别于光凝前和光凝后1、3、7、14 d用过量麻醉法处死动物并制备样本和切片,采用Western blot法检测各组大鼠眼杯中ERK、p-ERK、Akt和p-Akt蛋白的表达变化,采用逆转录PCR（RT-PCR）法检测各组大鼠眼杯中DDR2 mRNA和MMP-13 mRNA的表达变化,采用组织病理学方法测定各组大鼠CNV厚度,采用免疫组织化学和免疫荧光染色法分别定位和测定大鼠CNV区域DDR2和MMP-13的表达.结果 光凝后3d,光凝局部细胞增生,光凝后7 d CNV形成,至光凝后14 d CNV趋于稳定.免疫组织化学染色结果显示,DDR2在正常大鼠视网膜血管内皮细胞层、视网膜神经节细胞（RGCs）层和内核层细胞中呈弱表达,但在CNV中呈强阳性表达;MMP-13在正常对照组大鼠视网膜内界膜层、光感受器层和巩膜层均呈强阳性表达,在模型对照组中呈强阳性表达.免疫荧光结果显示,CNV组织中DDR2和MMP-13共表达.RT-PCR结果显示,模型对照组光凝后1、3、7、14 d DDR2 mRNA相对表达水平分别为55.22±4.03、47.74±2.23、14.82±4.56和5.59±2.47,MMP-13 mRNA相对表达水平分别为25.54±3.83、43.51±4.36、10.90±4.00和5.23±3.23,与正常对照组相比,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.免疫荧光结果显示,模型对照组光凝后3、7、14 d大鼠CNV区DDR2相对荧光密度单位（RFU）值分别为2.73±0.53、5.21±0.31和3.22±0.33,MMP-13 RFU值分别为1.66±0.17、3.57±0.44和2.67±0.21,组间总体比较差异均有统计学意义（F=81.01,P＜0.05;F=40.31,P＜0.01）;PD98059组和LY294002组光凝后14 d CNV区DDR2 RFU值分别为1.14±0.19和1.03±0.14,与模型对照组比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）,MMP-13RFU值分别为1.37±0.25和1.24±0.20,与模型对照组比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.Western blot结果显示,模型对照组光凝后7d眼杯中p-ERK和p-Akt水平升高,与正常对照组大鼠相比差异均有统计学意义（均P＜0.05）;至光凝后14 d恢复至近正常水平,与正常对照组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）.PD98058组大鼠眼杯p-ERK水平明显下降,注射后7d、14 d PD98058组大鼠眼杯中p-ERK表达的抑制率分别为71.58％和65.21％,PD98058组7d与模型对照组7d比较、PD98058组14 d与模型对照组14 d比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.LY294002组大鼠眼杯中p-Akt表达水平明显下降,LY294002注射后7d、14d大鼠眼杯中p-Akt表达的抑制率分别为65.62％和67.04％,LY294002组7d与模型对照组7d比较、LY294002组14d与模型对照组14 d比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.各组眼杯中ERK和Akt的表达水平总体比较差异均无统计学意义（F=0.62,P＞0.05;F=0.81,P＞0.05）.模型对照组、PD98059组和LY294002组光凝后14 d大鼠CNV厚度分别为（119.19±18.03）、（51.00±11.29）和（59.18±9.00） μm,总体比较差异有统计学意义（F=29.376,P＜0.05）,与模型对照组比较,PD98059和LY294002注射后CNV厚度分别减少57.21％和50.34％,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 DDR2和MMP-13在大鼠CNV中表达上调,参与CNV的形成;MEK/ERK和PI3K/Akt通路通过参与调控DDR2和MMP-13在CNV局部的表达而抑制CNV的发生和进展. 展开更多

关键词 盘状结构域受体2 脉络膜/病理 新生血管 基质金属蛋白酶-13 疾病模型 BN大鼠

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Notch信号对激光诱导的小鼠CNV生成过程中巨噬细胞极化表型及功能的调控 被引量：5

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作者 李娜 窦国睿 +6 位作者 张萍 赵俊龙 晏贤春 燕洁静 李曼红 韩骅 王雨生 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期207-215,共9页

背景 巨噬细胞在脉络膜新生血管（CNV）中的作用尚存在争议,与其在不同微环境中的功能异质性有关,Notch信号通路参与眼内新生血管生长的调控,但其对CNV中巨噬细胞功能的调控作用尚未证实. 目的 探讨巨噬细胞在CNV生成中极化表型的变化与... 背景 巨噬细胞在脉络膜新生血管（CNV）中的作用尚存在争议,与其在不同微环境中的功能异质性有关,Notch信号通路参与眼内新生血管生长的调控,但其对CNV中巨噬细胞功能的调控作用尚未证实. 目的 探讨巨噬细胞在CNV生成中极化表型的变化与Notch信号通路对巨噬细胞极化表型的调控.方法 在体实验选择58只成年雄性C57BL小鼠,以随机数字表法按照造模后取材时间的不同随机分为光凝后3d组和7d组.每组选23只小鼠用视网膜光凝法诱导小鼠CNV模型,分别于光凝后3d和7d制备脉络膜铺片,采用免疫荧光染色法观察CNV面积和巨噬细胞阳性染色面积,血管内皮生长因子（VEGF）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）的分泌情况;光凝后3d和7d对眼杯冰冻切片行免疫荧光染色,观察CNV中巨噬细胞的极化表型及其分泌VEGF、TNF-α的情况,评估巨噬细胞上Notch信号胞内段（NICD）相应分子标志物的表达情况.每组设定6只小鼠的左眼为正常对照眼,其右眼以激光光凝法建立CNV模型,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测眼杯组织中VEGF、TNF-α和巨噬细胞极化相关因子的表达情况.体外分离和培养C57BL小鼠的骨髓单核前体细胞,用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）诱导其分化为巨噬细胞,加入Notch信号通路抑制剂γ-分泌酶抑制剂（GSI）和极化诱导因子,24 h后收集细胞及培养液上清,通过qRT-PCR及ELISA法检测M1型、M2型巨噬细胞分子表面标志物的表达水平. 结果 与光凝后第3天比较,光凝后第7天CNV面积明显增大,但巨噬细胞浸润面积缩小,差异均有统计学意义（t=8.138、5.272,均P=0.000）.光凝后第3天,巨噬细胞在CNV周边和中央均有分布,第7天时局限于CNV中央部.光凝后第3天,色素上皮-脉络膜-巩膜复合体中精氨酸合酶1（Arg1）、甘露糖受体（MR）及白细胞介素-6（IL-6）mRNA的相对表达量明显高于第7天,而诱导型一氧化氮合酶（iNOS） mRNA的相对表达量无明显改变.免疫荧光结果显示,光凝后第3天F4/80＋ Arg1＋细胞（M2型巨噬细胞）数量明显多于F4/80＋ iNOS＋细胞（M1型巨噬细胞）,光凝后第7天F4/80＋ Arg1＋细胞数量明显减少,差异均有统计学意义（t=7.348,P=0.000;t5.562,P＜0.001）,但仍多于F4/80＋ iNOS＋细胞,二者间差异有统计学意义（t=4.568,P＜0.01）.在光凝后3d时巨噬细胞分泌的VEGF和TNF-α明显多于光凝后7d,差异均有统计学意义（t=5.143、4.519,均P＜0.01）.巨噬细胞中Notch信号下游分子在光凝后3d时未见表达,7d时表达量明显增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.体外实验表明,阻断Notch信号后,M1型巨噬细胞分子标志物表达量明显下降,而M2型巨噬细胞分子标志物的表达量明显增加,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 巨噬细胞的极化表型在CNV模型的不同阶段发生变化,而巨噬细胞中Notch信号的激活状态调控巨噬细胞的极化表型改变和功能. 展开更多

关键词 脉络膜新生血管 巨噬细胞/功能 细胞间肽类和蛋白类/代谢 NOTCH信号 近交系C57BL小鼠

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氧化衰老、细胞外基质和光感受器外节膜盘对RPE细胞中黏着斑激酶表达的影响 被引量：2

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作者 朱洁 王雨生 +3 位作者 赵炜 杨秀梅 李夏 姜廷帅 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期544-548,共5页

背景脉络膜新生血管（CNV）是引起视力障碍的重要原因之一，发生机制复杂。黏着斑激酶（FAK）在调控细胞增生、存活、移行和分化等细胞进程中发挥重要作用，参与新生血管的应答。然而，FAK在CNV发生中的作用尚未见相关报道。目的观察氧... 背景脉络膜新生血管（CNV）是引起视力障碍的重要原因之一，发生机制复杂。黏着斑激酶（FAK）在调控细胞增生、存活、移行和分化等细胞进程中发挥重要作用，参与新生血管的应答。然而，FAK在CNV发生中的作用尚未见相关报道。目的观察氧化衰老、细胞外基质（ECM）成分和吞噬光感受器外节膜盘（POS）等CNV生成相关因素作用下人视网膜色素上皮（RPE）细胞中FAK的表达及磷酸化变化，探讨FAK在CNV发生中的作用。方法体外原代培养来自于供体眼的人RPE细胞，并分别暴露于H2O2氧化衰老、吞噬POS和ECM成分等刺激因素。用10、20、50、100μmol／L4种浓度的H2O2处理培养的RPE细胞20d，诱导RPE细胞氧化衰老；用含终密度1×10^6／mlPOS的培养液培养RPE细胞20d，设置正常细胞对照组、单纯POS处理组、200μmol／LCoCl2缺氧组及POS＋缺氧组；将RPE细胞接种于涂布100mg／L的纤维连接蛋白（FN）、层黏连蛋白（LN）和I型胶原酶的培养皿中，分别继续培养30rain和1h。在不同时间点收集细胞提取总蛋白，Western blot法观察不同时间点RPE细胞中FAK的表达及磷酸化FAK（pFAK）变化。结果20μmol／L及50μamol／LH2O2处理组FAK蛋自在RPE细胞的表达量明显高于对照组，而pFAK在各H2O2处理组均较对照组明显下降，差异均有统计学意义（P〈0．01）。长期吞噬POS后，RPE细胞内出现消化不完全的溶酶体颗粒；单纯POS处理组与对照组间RPE细胞中FAK和pFAK的表达量差异无统计学意义（P〉0．05），但单纯缺氧组FAK和pFAK的表达量较对照组均升高，POS＋缺氧组pFAK的表达较单纯缺氧组显著升高，差异均有统计学意义（P〈O．01）。与对照组比较，在FN、LN和I型胶原刺激后1h，RPE细胞中pFAK表达上调，差异均有统计学意义（P〈0．05，P〈O．01）。结论在衰老、吞噬POS和ECM成分等因素作用下，RPE细胞中出现FAK的表达及磷酸化．提示FAK在CNV发生过程中发挥调控作用。 展开更多

关键词 脉络膜新生血管 视网膜色素上皮 黏着斑激酶 磷酸化 衰老 缺氧 细胞外基质

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玻璃体内注射塞来昔布对激光诱导大鼠脉络膜新生血管的抑制作用 被引量：4

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作者 蔡岩 王雨生 +3 位作者 徐建锋 石圆圆 张朝霞 马吉献 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2009年第11期945-949,共5页

目的观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对实验性大鼠脉络膜新生血管(CNV)的影响及其机制。方法雄性棕色挪威大鼠36只,以右眼为实验眼,激光光凝诱导实验性CNV模型。模型建立成功后,36只大鼠立即随机分为治疗组(n=18)和对照组(n=... 目的观察选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对实验性大鼠脉络膜新生血管(CNV)的影响及其机制。方法雄性棕色挪威大鼠36只,以右眼为实验眼,激光光凝诱导实验性CNV模型。模型建立成功后,36只大鼠立即随机分为治疗组(n=18)和对照组(n=18),分别玻璃体内注射10μL塞来昔布(1mg/mL)和10μL生理盐水。光凝后7d采用Westernblot(n=6)和RT-PCR(n=6)分别检测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及其mRNA以及COX-2mRNA的表达;光凝后14d采用苏木精-伊红染色(n=3)和脉络膜铺片(n=3)法分别检测CNV的厚度和面积。结果经塞来昔布治疗后,CNV的厚度和面积均明显减小(P=0.00),VEGF蛋白及其mRNA表达均明显下降(P=0.02,P=0.03),而COX-2mRNA无明显变化(P=0.59)。结论玻璃体内注射塞来昔布能够有效地抑制实验性CNV,其可能是通过抑制VEGF的表达而发挥作用的,为临床防治CNV相关性眼病提供新思路。 展开更多

关键词 脉络膜新生血管 环氧化酶-2 塞来昔布 血管内皮生长因子

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Toll样受体4对氧诱导视网膜新生血管发生的促进作用及其机制 被引量：3

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作者 徐文芹 尹婕 王雨生 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期317-323,共7页

背景研究发现，Toll样受体（TLRs）在视网膜新生血管的形成中发挥重要作用，但其作用机制尚不清楚。目的探讨TLR4对小鼠氧诱导视网膜病变（OIR）中新生血管生成的作用及其机制。方法将18只7日龄新生C57BL／6J小鼠以随机数字表法按小鼠... 背景研究发现，Toll样受体（TLRs）在视网膜新生血管的形成中发挥重要作用，但其作用机制尚不清楚。目的探讨TLR4对小鼠氧诱导视网膜病变（OIR）中新生血管生成的作用及其机制。方法将18只7日龄新生C57BL／6J小鼠以随机数字表法按小鼠窝别分为常氧组、OIR组及0IR＋脂多糖（LPS）-EB组，常氧组小鼠在正常氧环境中饲养，OIR组及OIR＋LPS—EB组小鼠于生后第7天（P7）与母鼠置于体积分数（75±2）％高氧氧箱中饲养5d以诱导OIR模型，于P12在正常氧环境中饲养，OIR＋LPS-EB组P12小鼠腹腔内注射LPS-EB，剂量为1mg／kg，OIR组同法注射PBS。各组摘取P17小鼠眼球于质量分数4％多聚甲醛中固定并行视网膜铺片和Lectin染色，计算视网膜无血管区和新生血管区面积占全视网膜的百分比。各组制备P17小鼠眼后节组织冰冻切片并行免疫荧光检测，计数小鼠5mm视网膜全长活化小胶质细胞数目；采用CDllb和TLR4免疫荧光双标记法检测各组小鼠视网膜小胶质细胞中CDllb、TLR4的表达及其分泌血管内皮生长因子（VEGF）、白细胞介素1p（IL-1β）和肿瘤坏死因子-a（TNF-a）的水平。结果常氧组P17小鼠视网膜血管分布和形态正常，OIR组和OIR＋LPS—EB组P17小鼠视网膜中央均出现无血管区和新生血管簇，OIR＋LPS-EB组小鼠视网膜无血管区面积比为（18．47±1．32）％，新生血管面积比为（3．29±0．85）％，分别大于OIR组的（15．78±1．44）％和（1．77±0．19）％，差异均有统计学意义（t=3．36，P=0．01；t=4．22，P=0．00）。免疫荧光结果显示，常氧组P17小鼠视网膜中活化小胶质细胞数量极少，OIR组和OIR＋LPS—EB组P17小鼠视网膜中活化小胶质细胞荧光强度增强，活化小胶质细胞数量增加，其中OIR＋LPS-EB组小鼠视网膜中小胶质细胞数明显多于OIR组，差异有统计学意义[（95．50±4．77）／5mm与（74．83±4．17）／5mm，t=8．00，P〈0．01]。常氧组小鼠视网膜中TLR4阳性小胶质细胞数量极少，OIR组和OIR＋LPS—EB组小鼠视网膜中TLR4荧光增强，TLR4阳性小胶质细胞数量明显增加，OIR＋LPS—EB组小鼠视网膜中TLR4阳性小胶质细胞数目明显多于OIR组，差异有统计学意义[（49．50±6．38）／5mm与（28．17±6．24）／5mm，t=5．86，P〈0．01）]。常氧组P17小鼠视网膜中CDllb和VEGF／IL-1β／TNF-a共表达的小胶质细胞数量分别为（1．17±0．75）／5mm、0和0，而OIR＋LPS—EB组小鼠视网膜中共表达CDllb和VEGF／IL·1β／TNF—d的小胶质细胞数量多于OIR组，差异有统计学意义[（44．50±8．78）／5mm与（28．50±5．61）／5mm，F=44．07，P〈0．01；（24．10±6．49）／5mm与（16．00±3．46）／5nlm，F=11．31，P〈0．01；（33．83±14．82）／5mm与（23．00±2．83）／5mm，t=19．92，P〈0．01]。结论TLR4可促进OIR小鼠视网膜新生血管的生成，其作用机制可能与TLR4激活视网膜小胶质细胞中相关的下游信号通路，促进血管生长因子及炎性因子的释放有关。 展开更多

关键词 TOLL样受体4 视网膜新生血管 血管生成 缺血/病理 神经胶质细胞/代谢 动物模型 近交系C57BL小鼠 炎性介质/代谢 信号转导

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