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抗呼吸道合胞病毒免疫噬菌体抗体库的构建及初步鉴定
1
作者
汪治华
张国成
+6 位作者
许东亮
孙新
李小青
李思袖
张学红
聂晓晶
豆玉凤
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第9期892-893,897,共3页
目的:构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性噬菌体抗体库,搭建人源性抗体制备的技术平台,为小儿呼吸道合胞病毒感染发病机制的研究、诊断、治疗和预防提供新的有效途径。方法:从52例呼吸道合胞病毒感染患儿外周血淋巴细胞中提取总RNA,...
目的:构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性噬菌体抗体库,搭建人源性抗体制备的技术平台,为小儿呼吸道合胞病毒感染发病机制的研究、诊断、治疗和预防提供新的有效途径。方法:从52例呼吸道合胞病毒感染患儿外周血淋巴细胞中提取总RNA,并逆转录为cDNA。用PCR扩增轻链和重链Fd段(即重链的可变区和第一恒定区)基因,并将扩增的轻链和重链基因片段克隆于pComb3x噬粒载体,电转化XL1-Blue大肠杆菌,经辅助噬菌体M13K07超感染后构建成Fab段噬菌体抗体库。对此抗体库双酶切进行鉴定,并用呼吸道合胞病毒颗粒作抗原进行初步筛选。结果:经过重轻链基因的重组,成功构建一免疫噬菌体抗体基因库,共有2.6×106个不同的克隆菌,其中70%的克隆均含有轻链和重链Fd基因。因此,所构建的噬菌体抗体库的库容量为1.8×106,经初步筛选,抗体库得到了不同程度的富集。结论:利用基因重组技术和噬菌体展示技术,成功构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性免疫噬菌体抗体库,为进一步的研究奠定了基础。
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关键词
抗体库
噬菌体展示技术
FAB抗体
呼吸道合胞病毒
儿童
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题名
抗呼吸道合胞病毒免疫噬菌体抗体库的构建及初步鉴定
1
作者
汪治华
张国成
许东亮
孙新
李小青
李思袖
张学红
聂晓晶
豆玉凤
机构
第四军医大学西京医院儿童医学中心
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第9期892-893,897,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30571948)
文摘
目的:构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性噬菌体抗体库,搭建人源性抗体制备的技术平台,为小儿呼吸道合胞病毒感染发病机制的研究、诊断、治疗和预防提供新的有效途径。方法:从52例呼吸道合胞病毒感染患儿外周血淋巴细胞中提取总RNA,并逆转录为cDNA。用PCR扩增轻链和重链Fd段(即重链的可变区和第一恒定区)基因,并将扩增的轻链和重链基因片段克隆于pComb3x噬粒载体,电转化XL1-Blue大肠杆菌,经辅助噬菌体M13K07超感染后构建成Fab段噬菌体抗体库。对此抗体库双酶切进行鉴定,并用呼吸道合胞病毒颗粒作抗原进行初步筛选。结果:经过重轻链基因的重组,成功构建一免疫噬菌体抗体基因库,共有2.6×106个不同的克隆菌,其中70%的克隆均含有轻链和重链Fd基因。因此,所构建的噬菌体抗体库的库容量为1.8×106,经初步筛选,抗体库得到了不同程度的富集。结论:利用基因重组技术和噬菌体展示技术,成功构建小儿呼吸道合胞病毒感染患者人源性免疫噬菌体抗体库,为进一步的研究奠定了基础。
关键词
抗体库
噬菌体展示技术
FAB抗体
呼吸道合胞病毒
儿童
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
抗呼吸道合胞病毒免疫噬菌体抗体库的构建及初步鉴定
汪治华
张国成
许东亮
孙新
李小青
李思袖
张学红
聂晓晶
豆玉凤
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
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