多奈哌齐对PC12细胞凋亡抑制作用机制的研究 被引量：5

1

作者 李珂 万琪 +4 位作者 蒋建利 贾军宏 蒋虹 楚勤英 唐志雄 《医学研究生学报》 CAS 2006年第8期685-687,691,i0011,共5页

目的:研究多奈哌齐对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用。方法:以Aβ诱导PC12细胞损伤作为细胞模型,采用TUNEL、免疫细胞化学等方法,观察不同浓度的Aβ对PC12细胞的损伤作用和多奈哌齐干预对PC12细胞凋亡的保护作用,以及Bc... 目的:研究多奈哌齐对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用。方法:以Aβ诱导PC12细胞损伤作为细胞模型,采用TUNEL、免疫细胞化学等方法,观察不同浓度的Aβ对PC12细胞的损伤作用和多奈哌齐干预对PC12细胞凋亡的保护作用,以及Bc l-2、Caspase-3在Aβ损伤组、多奈哌齐干预组的表达及意义。结果:锥虫蓝拒染法染色结果显示,Aβ作用后,PC12细胞较正常对照组增殖缓慢。提前12 h给予多奈哌齐,TUNEL结果示PC12细胞凋亡指数为(17.29±0.83)%,较单纯Aβ损伤组(32.28±1.64)%显著降低(P<0.01);Bc l-2表达阳性率为(60.00±2.30)%,较损伤组(39.94±1.83)%显著增高(P<0.01),Caspase-3表达阳性率为(26.46±2.87)%,较损伤组(49.23±1.73)%显著降低(P<0.01)。滞后1 h给予多奈哌齐组与Aβ损伤组相比无显著差异(P>0.05)。结论:多奈哌齐预干预对Aβ诱导的PC12细胞具有保护作用,其机制可能通过调节凋亡相关蛋白Caspase-3、Bc l-2来实现。 展开更多

关键词 多奈哌齐 Β淀粉样蛋白 BCL-2 CASPASE-3

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雌激素对颏舌肌成肌细胞钙离子水平影响的实验研究 被引量：3

2

作者 郭涛 刘文佳 +1 位作者 余晓玲 丁寅 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2013年第8期695-698,703,共5页

目的:探讨不同浓度雌激素对颏舌肌成肌细胞胞内钙离子浓度的影响。方法:体外培养大鼠颏舌肌成肌细胞,缓冲液孵育颏舌肌成肌细胞使其处于正常与微酸环境下,激光共聚焦显微镜观察不同浓度雌激素作用下成肌细胞胞内钙离子的变化。结果:正... 目的:探讨不同浓度雌激素对颏舌肌成肌细胞胞内钙离子浓度的影响。方法:体外培养大鼠颏舌肌成肌细胞,缓冲液孵育颏舌肌成肌细胞使其处于正常与微酸环境下,激光共聚焦显微镜观察不同浓度雌激素作用下成肌细胞胞内钙离子的变化。结果:正常环境下,不同浓度雌激素对颏舌肌成肌细胞胞内钙离子影响不大。在微酸环境下,雌激素能够迅速下调成肌细胞胞浆钙离子强度,并在低水平重新形成新的平衡。结论:在一定条件下,雌激素能够下调颏舌肌成肌细胞胞内钙离子水平,维持肌细胞活性,从而减少肌肉的疲劳与损伤。这可能是雌激素对OSAHS起保护作用的原因之一。 展开更多

关键词 雌激素 颏舌肌成肌细胞 钙离子 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合症

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环亲和素A的重组表达及其促进肝癌细胞侵袭转移的体外研究 被引量：3

3

作者 杨红 李郁 +4 位作者 杨勇 王德胜 陈江浩 杨向民 廖成功 《科学技术与工程》 2006年第23期4672-4675,共4页

为研究环亲和素A(CyclophilinA,CyPA)与肝癌转移的关系,用原核重组表达并纯化了CyPA。在不同浓度的CyPA刺激下,利用凝胶酶谱检测人肝癌细胞FHCC-98分泌基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)的能力。选择合适的刺激浓度,用Bord... 为研究环亲和素A(CyclophilinA,CyPA)与肝癌转移的关系,用原核重组表达并纯化了CyPA。在不同浓度的CyPA刺激下,利用凝胶酶谱检测人肝癌细胞FHCC-98分泌基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)的能力。选择合适的刺激浓度,用BordenChamber检测肝癌细胞的侵袭能力。同时用抗CD147的抗体阻断CyPA与其受体CD147的结合,检测阻断后FHCC-98在CyPA刺激下分泌MMPs及转移的能力。结果表明重组表达的CyPA能促进FHCC-98分泌激活或非激活形式的MMP-2并能促进FHCC-98的转移,而抗CD147的抗体能阻断其作用。实验结果表明:环亲和素A能与肝癌细胞表面的受体分子CD147结合,促进肝癌细胞的转移,提示其在“炎-癌”链中起到一定的作用。 展开更多

关键词 环亲和素A MMPS 肝癌 转移

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细胞工程技术在肿瘤免疫治疗药物中的现状和应用

4

作者 陈志南 邢金良 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第6期461-463,共3页

关键词 细胞工程 肿瘤 免疫疗法

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细胞工程技术在肿瘤免疫治疗药物中的现状和应用

5

作者 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第5期372-372,共1页

关键词 细胞工程技术 肿瘤 免疫治疗

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HAb18G/CD147拮抗肽对肝癌细胞表面抗原HAb18G的亲和性 被引量：6

6

作者 骞爱荣 商澎 +5 位作者 李郁 樊春梅 陈丹 王春梅 朱平 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期127-129,共3页

目的 :研究HAb18G/CD14 7拮抗肽对肝癌细胞上HAb18G/CD14 7抗原的亲和性。方法 :利用流式细胞仪测定人肝癌细胞 (HHCC ,SMMC772 1)上HAb18G抗原的表达。分别在HAb18G/CD14 7拮抗肽AP 1、AP 2和AP 6的N端标记生物素 ,用流式细胞仪和激光... 目的 :研究HAb18G/CD14 7拮抗肽对肝癌细胞上HAb18G/CD14 7抗原的亲和性。方法 :利用流式细胞仪测定人肝癌细胞 (HHCC ,SMMC772 1)上HAb18G抗原的表达。分别在HAb18G/CD14 7拮抗肽AP 1、AP 2和AP 6的N端标记生物素 ,用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜测定AP 1、AP 2和AP 6与HHCC或SMMC772 1的结合能力。结果 :HAb18G抗原在HHCC和SMMC772 1细胞上均呈高表达。AP 6对HHCC的亲和力最强 ,AP 2次之 ,AP 1最弱。AP 6对与SMMC772 1的亲和力也最强 ,AP 1次之 ,AP 2未检测到。结论 :HAb18G/CD14 7拮抗肽对肝癌细胞表面抗原HAb18G/CD14 展开更多

关键词 肝癌 拮抗肽 HAb18G/CDl47 抗原 流式细胞仪 激光共聚焦显微镜

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HAb18G及MMP-2与肝癌细胞分化的关系 被引量：7

7

作者 王贤辉 陈志南 贺书云 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2002年第1期55-56,共2页

研究肝癌细胞膜新分子ＨＡｂ１８Ｇ与ＭＭＰ－２在肝癌组织中的表达以及二者与肝癌组织分化的相关性。对３５例肝细胞肝癌（ＨＣＣ）组织进行了ＨＡｂ１８Ｇ及ＭＭＰ—２免疫组织化学检测，并用常规组织学ＨＥ染色确定肝癌的病理分级。... 研究肝癌细胞膜新分子ＨＡｂ１８Ｇ与ＭＭＰ－２在肝癌组织中的表达以及二者与肝癌组织分化的相关性。对３５例肝细胞肝癌（ＨＣＣ）组织进行了ＨＡｂ１８Ｇ及ＭＭＰ—２免疫组织化学检测，并用常规组织学ＨＥ染色确定肝癌的病理分级。ＨＡｂ１８Ｇ定位于肝癌细胞膜和胞浆．ＭＭＰ－２定位于肝癌细胞胞浆内，二者的表达与肝癌分级呈正相关。ＨＡｂ１８Ｇ作为一种细胞外基质金属蛋白酶诱导因子，同ＭＭＰ－２在肝癌组织的表达与肝癌细胞分化程度密切相关． 展开更多

关键词 肝癌 HAB18G MMP-2 肝癌细胞分化 基质蛋白酶 免疫组织化学检测

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PD98059对慢性髓细胞白血病Ras-MAPK信号转导的作用 被引量：4

8

作者 尚振川 孙秉中 +5 位作者 冯琦 王玮 王莎 张涛 陈志南 王晶 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期54-55,共2页

目的:探讨PD98059对慢性髓细胞白血病信号转导的作用及其作用机制。方法:将PD98059加入慢性髓细胞白血病细胞系K562细胞中,通过细胞活力、DNA合成、集落形成和MAPK活性的变化,观察PD98059对慢性髓细胞白血病信号转导的作用。结果:PD9805... 目的:探讨PD98059对慢性髓细胞白血病信号转导的作用及其作用机制。方法:将PD98059加入慢性髓细胞白血病细胞系K562细胞中,通过细胞活力、DNA合成、集落形成和MAPK活性的变化,观察PD98059对慢性髓细胞白血病信号转导的作用。结果:PD98059可明显抑制K562细胞活力、DNA合成、集落形成和MAPK活性(与对照组比较,P<0.05),其抑制作用具有浓度依赖性。结论:PD98059可通过阻断Ras-MAPK信号通路而发挥其抑制作用。Ras-MAPK通路极有可能成为CML治疗的新靶点。 展开更多

关键词 PD98059 慢性髓细胞白血病 RAS-MAPK 信号转导

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CD147结构与功能研究进展 被引量：3

9

作者 骞爱荣 商澎 陈志南 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期728-731,共4页

关键词 CDL47 分子结构 基因结构 分子功能 粘附分子 肿瘤

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HAb18G/CD147在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义 被引量：2

10

作者 朱少君 米力 +6 位作者 李艳红 张阳 巩丽 韩秀娟 姚丽 兰淼 张伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期784-786,共3页

目的:探讨HAb18G基因产物表达与食管鳞状细胞癌(ESCC)临床病理特征及预后的关系。方法:应用免疫组化SP染色法分析了108例食管鳞状细胞癌标本中HAb18G基因产物表达情况和定位,并对其进行了术后3年随访。结果:HAb18G基因产物在有淋巴结癌... 目的:探讨HAb18G基因产物表达与食管鳞状细胞癌(ESCC)临床病理特征及预后的关系。方法:应用免疫组化SP染色法分析了108例食管鳞状细胞癌标本中HAb18G基因产物表达情况和定位,并对其进行了术后3年随访。结果:HAb18G基因产物在有淋巴结癌转移和预后差的食管鳞状细胞癌病例中高表达;HAb18G的高表达与食管鳞状细胞癌的浸润转移、分化程度均相关(P<0.05);淋巴结转移和HAb18G表达可作为食管鳞状细胞癌患者预后独立指标。结论:HAb18G在食管鳞状细胞癌中的表达与食管癌的发生发展、浸润转移和预后密切相关,可作为临床预测浸润转移和估计预后的一个重要参考指标。 展开更多

关键词 HAB18G/CD147 食管鳞状细胞癌 免疫组化 预后

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肝癌细胞内HAb18G/CD147信号转导通路关键分子的筛选 被引量：1

11

作者 周宏伟 姚毅冰 +7 位作者 梁耀杰 王志红 周晓燕 郭卫平 杨向民 蒋建利 孙君重 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1196-1200,共5页

目的筛选肝癌细胞内HAb18G/CD147信号转导通路中差异表达的关键分子。方法提取SMMC-7721细胞和T7721细胞(SMMC-7721经稳定转染并高表达HAb18G/CD147的肝癌细胞),应用信号转导相关基因芯片筛选两种肝癌细胞内差异表达的关键分子。结果基... 目的筛选肝癌细胞内HAb18G/CD147信号转导通路中差异表达的关键分子。方法提取SMMC-7721细胞和T7721细胞(SMMC-7721经稳定转染并高表达HAb18G/CD147的肝癌细胞),应用信号转导相关基因芯片筛选两种肝癌细胞内差异表达的关键分子。结果基因芯片结果显示共有13个差异表达的基因,在高表达HAb18G/CD147的T7721细胞系中,表达下调的基因包括:骨形成蛋白(BMP)家族的BMP-2、BMP-5,内皮素1(ET-1),结缔组织生长因子-富含半胱氨酸血管生成诱导物61-肾母细胞瘤过表达基因(CCN)蛋白家族的WISP-2(Wnt1-induced signaling proteins-2/CCN5)和富含半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich 61/CCN1),前列腺干细胞抗原(PSCA);表达上调的基因包括:白细胞介素10受体α(IL-10Rα),趋化因子家族的IL-6、IL-8和CXC趋化因子配体2(CXCL2/GROβ),线粒体超氧化物歧化酶2(SOD2),B因子(B factor)和转化生长因子β(TGF-β)诱导基因克隆3(βig-h3)的表达。结论共筛选出HAb18G/CD147信号转导通路相关的13个差异表达基因,这些基因与肝癌细胞免疫微环境重塑、血管形成、增殖、侵袭和迁移等生物学过程相关。 展开更多

关键词 HAB18G/CD147 肝癌 信号转导 骨形成蛋白2(BMP-2) TGF-β诱导基因克隆3(βig-h3)

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βig-h3对肝癌细胞黏附、侵袭和分泌基质金属蛋白酶的影响 被引量：1

12

作者 唐娟 蒋建利 +2 位作者 周宏伟 杨向民 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期821-822,共2页

目的:研究βig-h3对肝癌细胞SMMC-7721黏附、侵袭和分泌基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:通过黏附、侵袭及明胶酶谱实验,检测瞬时分别转染βig-h3基因和转染空载体的SMMC-7721细胞的黏附、侵袭能力和分泌MMP的变化。结果:转染βig-h3... 目的:研究βig-h3对肝癌细胞SMMC-7721黏附、侵袭和分泌基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法:通过黏附、侵袭及明胶酶谱实验,检测瞬时分别转染βig-h3基因和转染空载体的SMMC-7721细胞的黏附、侵袭能力和分泌MMP的变化。结果:转染βig-h3基因的SMMC-7721细胞的黏附率、侵袭率及MMP-2、MMP-9的分泌量,均明显高于转染空载体的SMMC-7721细胞。结论:βig-h3具有促进肝癌细胞浸润和转移的作用,是肝癌发生发展过程中的促进因子。 展开更多

关键词 βig—h3 肝癌细胞 转移

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大肠癌靶向治疗临床试验的研究进展 被引量：3

13

作者 陈亮 张思河 +1 位作者 张青 田蓉 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第3期230-234,238,共6页

针对大肠癌不同分子靶标的治疗方案已相继进入临床试验阶段,有些已显示出较好疗效。靶向抑制EGFR单抗C225、ABX-EGF和EMD7200是迄今最有治疗前景的药物,前者FDA已批准上市,后两者正处在临床Ⅰ、Ⅱ期阶段;靶向抑制EGFR表达的小分子药物EK... 针对大肠癌不同分子靶标的治疗方案已相继进入临床试验阶段,有些已显示出较好疗效。靶向抑制EGFR单抗C225、ABX-EGF和EMD7200是迄今最有治疗前景的药物,前者FDA已批准上市,后两者正处在临床Ⅰ、Ⅱ期阶段;靶向抑制EGFR表达的小分子药物EKB569、ZD1839、CI-1033等的初期临床疗效还不明确,其与化疗药物联用的疗效均需进一步观察。靶向阻断Ras/Raf、细胞周期信号通路的小分子药物R115777、BAY43-9006、Flavopiridol等的单药疗效均不明显,其与化疗药物联用疗效还在观察之中。靶向抑制VEGF的Bevacizumab是FDA批准上市的另一个治疗大肠癌的单抗药物;靶向抑制VEGF或VEGFR的小分子化合物PTK/ZK、Thalidomide、SU5416等单药临床疗效一般,但其与化疗药物联用的疗效值得期待。其他针对MMPs、COX-2、mTOR、泛素-蛋白酶等靶点的小分子药物的单药治疗或联合治疗的疗效还在观察之中,现在难以定论。 展开更多

关键词 肠癌 靶向治疗 临床试验

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βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的差异表达及其意义

14

作者 周宏伟 蒋建利 +2 位作者 郭卫平 陈志南 杨向民 《医学研究生学报》 CAS 2006年第6期492-494,共3页

目的:测定转化生长因子β(TGF-β)诱导分子βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的表达情况。方法:培养人肝癌细胞T7721(转染并稳定高表达HAb18G/CD147)、7721(未转染HAb18G/CD147)、人肝细胞癌细胞系(HHCC)和正常人张氏肝细胞QZG,提取总RNA,... 目的:测定转化生长因子β(TGF-β)诱导分子βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的表达情况。方法:培养人肝癌细胞T7721(转染并稳定高表达HAb18G/CD147)、7721(未转染HAb18G/CD147)、人肝细胞癌细胞系(HHCC)和正常人张氏肝细胞QZG,提取总RNA,设计合成特异性引物,以β-肌动蛋白(β-actin)作为内参照,检测βig-h3 mRNA的差异表达情况。结果:逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)结果显示,TGF-β诱导分子βig-h3的mRNA在人肝癌细胞中的表达水平明显高于正常肝细胞(P<0.01),其在人肝癌细胞系中的表达水平依次为HHCC>T7721>7721,在正常肝细胞QZG中表达水平最低。结论:证明了βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中高表达,为进一步探讨βig-h3在肝癌细胞黏附和转移过程中的作用机制奠定了基础。 展开更多

关键词 βjg-h3/TGFBI 肝癌 HAB18G/CD147 黏附

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抗人肝癌单克隆抗体HAb18 Fd及轻链基因的克隆与鉴定 被引量：9

15

作者 陈志南 邢金良 +2 位作者 杨向民 宋斐 张思河 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2003年第2期105-109,共5页

目的 :克隆抗人肝癌单抗HAb18Fd及轻链基因 ,并对其可靠性和准确性进行验证。方法 :从分泌单抗HAb18的杂交瘤细胞株中提取总RNA ,利用RT PCR扩增抗体Fd及轻链基因 ,连入 pMD18T载体后 ,挑选阳性克隆进行序列测定并利用相应的软件对序列... 目的 :克隆抗人肝癌单抗HAb18Fd及轻链基因 ,并对其可靠性和准确性进行验证。方法 :从分泌单抗HAb18的杂交瘤细胞株中提取总RNA ,利用RT PCR扩增抗体Fd及轻链基因 ,连入 pMD18T载体后 ,挑选阳性克隆进行序列测定并利用相应的软件对序列进行分析。然后将轻链及Fd基因依次克隆到噬菌体展示载体 pComb3中 ,转化大肠杆菌XL1 blue并利用辅助噬菌体M 13K0 7进行挽救 ,收获噬菌体后利用间接ELISA方法检测其抗原特异性。结果 :扩增的HAb18全长轻链和Fd基因大小分别为 6 6 5bp和 6 6 8bp ,序列分析显示 :VH及VL均含有 2个特征性的半胱氨酸 ,CH1属于IgG1亚类 ,CL属于κ亚型。ELISA证实 ,Fab基因表达产物具有与相应抗原特异结合的活性。结论 :成功克隆了肝癌单抗HAb18的Fd及轻链基因 ,为下一步构建多种形式的基因工程抗体奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 抗人肝癌单克隆抗体 HAb18Fd 轻链基因 克隆 鉴定

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HAb18G/CD147在多种恶性肿瘤中的表达及其临床意义 被引量：14

16

作者 封兰兰 朱少君 +6 位作者 张阳 李艳红 巩丽 兰淼 韩秀娟 姚丽 张伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期958-961,共4页

目的探讨HAb18G/CD147表达与食管癌、结肠癌、宫颈癌、肺癌、卵巢癌和肝细胞癌的临床相关性。方法应用免疫组织化学SP染色法分析上述6种恶性肿瘤及其癌旁组织和淋巴结转移灶标本中CD147基因表达和定位,并对CD147表达与肿瘤分化程度、浸... 目的探讨HAb18G/CD147表达与食管癌、结肠癌、宫颈癌、肺癌、卵巢癌和肝细胞癌的临床相关性。方法应用免疫组织化学SP染色法分析上述6种恶性肿瘤及其癌旁组织和淋巴结转移灶标本中CD147基因表达和定位,并对CD147表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移情况进行分析。结果相对于癌旁组织,CD147在6种肿瘤中的表达均明显生升高。CD147表达与肿瘤的分化程度、浸润深度和淋巴结转移均显著正相关。结肠癌、宫颈癌以及食管癌中,CD147在浸润深的组织中的表达显著升高(P<0.05);宫颈癌、食管癌、肺癌以及卵巢癌中,CD147在淋巴结转移灶中的表达显著升高(P<0.05),但在结肠癌中差别不显著;结肠癌、宫颈癌、食管癌以及肺癌中,CD147在分化差的组织中的表达显著升高(P<0.05)。结论CD147表达在分化差、浸润深以及淋巴结转移的组织中明显升高,提示CD147可能是恶性肿瘤的预后指标。 展开更多

关键词 HAB18G 恶性肿瘤 免疫组化 预后

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HAb18G/CD147拮抗肽对体内血管生成的影响 被引量：9

17

作者 商澎 骞爱荣 +3 位作者 胡佩珍 马福成 朱平 陈志南 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期355-357,共3页

关键词 HAB18G CD147 拮抗肽 血管生成

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改良明胶酶谱测定明胶酶活性 被引量：12

18

作者 骞爱荣 商澎 陈志南 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期282-283,共2页

关键词 明胶酶谱 基质金属蛋白酶 电泳 聚丙烯酰胺凝胶

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抗人肝癌单克隆抗体HAb18 Fab基因的克隆和表达 被引量：5

19

作者 邢金良 王永庆 +2 位作者 杨向民 宋斐 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期570-573,共4页

目的:克隆抗人肝癌单抗(mAb)HAb18的Fab基因,并在大肠杆菌中表达。方法:采用RT-PCR法,利用设计的引物扩增mAb Fd和K链全长基因,并分别克隆到T载体中进行序列分析。然后,亚克隆到原核表达载体pComb3中,转化感受态大肠杆菌后以IPTG诱导表... 目的:克隆抗人肝癌单抗(mAb)HAb18的Fab基因,并在大肠杆菌中表达。方法:采用RT-PCR法,利用设计的引物扩增mAb Fd和K链全长基因,并分别克隆到T载体中进行序列分析。然后,亚克隆到原核表达载体pComb3中,转化感受态大肠杆菌后以IPTG诱导表达。采用ELISA和免疫荧光法检测表达产物的特异性。结果:克隆了mAb HAb18的Fah基因,并在大肠杆菌中获得表达。竞争性ELISA和免疫荧光检测证实,表达产物具有与相应抗原特异结合的活性。结论: 成功地构建了抗人肝癌小分子Fab抗体,为其进一步在肝癌诊断与治疗中的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 肝癌 单克隆抗体 FAB 表达

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菌落PCR快速分析抗体库重组率时的假阳性现象 被引量：3

20

作者 张思河 包国强 +1 位作者 邢金良 陈志南 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期248-250,共3页

目的　评价菌落PCR法鉴定噬菌体抗体库阳性重组率的可靠性。方法　鼠抗体基因Lc片段、Fd片段经酶切、纯化后 ,依次克隆入pComb3载体上相应的酶切位点 ,电转化XL1 blue菌后建立鼠源性Fab噬菌体抗体库。比较菌落PCR法、质粒PCR法及质粒酶... 目的　评价菌落PCR法鉴定噬菌体抗体库阳性重组率的可靠性。方法　鼠抗体基因Lc片段、Fd片段经酶切、纯化后 ,依次克隆入pComb3载体上相应的酶切位点 ,电转化XL1 blue菌后建立鼠源性Fab噬菌体抗体库。比较菌落PCR法、质粒PCR法及质粒酶切法鉴定转化菌阳性重组率的一致性。同时用空菌、空载体、空载体菌等作模板为对照PCR ,以排除相关组分的干扰。结果　建立的Lc库的库容为 1.175×10 6CFU ,Fab库的库容为 1.0 2×10 6CFU。 3种方法鉴定的阳性重组率不同 (Lc的重组率依次为 10 0 %、78%、78% ,Fd的重组率依次为 90 %、6 6 %、6 6 % ,Lc与Fd同时插入的重组率依次为 90 %、5 0 %、5 0 % )。菌落PCR法鉴定的重组率偏高 ,存在假阳性现象。对照PCR提示 ,XL1 blue菌本身可能是导致假阳性扩增的原因。结论　用菌落PCR法不能准确鉴定噬菌体抗体库的重组率 。 展开更多

关键词 菌落PCR 质粒PCR 限制性酶切 重组率 噬菌体抗体库

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