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Basigin的分子作用机制及其在眼部的生物学功能
1
作者 尹婕 李郁 王雨生 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2016年第10期979-983,共5页
Basigin是调节细胞活性、信号接收及免疫识别的重要分子,参与发育、微生物感染、炎症发生、营养及药物运输。Basigin的分子结构及其与分子伴侣间的同源或异源交互作用是其发挥广泛生物学功能的重要基础。Basigin与视网膜的成熟和功能发... Basigin是调节细胞活性、信号接收及免疫识别的重要分子,参与发育、微生物感染、炎症发生、营养及药物运输。Basigin的分子结构及其与分子伴侣间的同源或异源交互作用是其发挥广泛生物学功能的重要基础。Basigin与视网膜的成熟和功能发挥有重要关系,其在眼部的其他生物学功能也值得关注。本文就Basigin分子机制及眼部特异性表达的最新研究进展进行综述。 展开更多
关键词 BASIGIN 视网膜 眼 发病机制
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小鼠脊髓损伤早期不同炎症因子的表达变化 被引量：20
2
作者 郑晶晶 姚安会 +6 位作者 刘芳芳 王亚周 于才勇 陈鹏 张坤 鞠躬 王键 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期391-394,共4页
目的:探讨小鼠脊髓夹伤后早期各时间点损伤区中IL-1β、IL-6、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-1(MIP-1)、IL-4、IL-10、TGF-β的表达变化情况。方法:6 8周雄性BALB/c小鼠行T8节段脊髓重度夹伤模型,分别于术后6 h、12 h、2... 目的:探讨小鼠脊髓夹伤后早期各时间点损伤区中IL-1β、IL-6、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-1(MIP-1)、IL-4、IL-10、TGF-β的表达变化情况。方法:6 8周雄性BALB/c小鼠行T8节段脊髓重度夹伤模型,分别于术后6 h、12 h、24 h、3 d和7 d取以损伤区为中心共5 mm脊髓,用TRIzol试剂提取总RNA,反转录后进行实时定量PCR检测上述各基因的表达情况。结果:小鼠脊髓损伤早期,损伤区促炎因子IL-1β、IL-6及趋化因子MCP-1、MIP-1急剧升高,6 h内即达高峰,随后开始下降,3 d内归于正常;而炎症抑制因子IL-4早期不升反降,3 d降至最低;IL-10在6 h有所升高,但无统计学意义;TGF-β逐渐升高,12 h至高峰,随后下降,7 d再度升高。结论:脊髓损伤早期损伤区促炎因子表达增加,炎症抑制因子表达不变或减少,可能使损伤局部的炎症反应呈扩大趋势,从而导致继发的炎症损伤。 展开更多
关键词 脊髓损伤 炎症因子 实时定量PCR BALB/C小鼠
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TAT-乙肝病毒靶向核糖核酸酶融合蛋白原核载体的构建及表达 被引量：13
3
作者 丁劲 刘军 +2 位作者 薛采芳 李英辉 宫卫东 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期49-51,共3页
目的:构建蛋白质转导结构域(protein transduction domain,PTD)TAT和乙肝病毒靶向核糖核酸酶(targeted ribonuclease,TR)融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达。方法:将已构建的乙肝病毒靶向核糖核酸酶基因、乙肝病毒核心蛋白(HBV... 目的:构建蛋白质转导结构域(protein transduction domain,PTD)TAT和乙肝病毒靶向核糖核酸酶(targeted ribonuclease,TR)融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达。方法:将已构建的乙肝病毒靶向核糖核酸酶基因、乙肝病毒核心蛋白(HBV core protein,HBVc)基因、人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(human eosinophil derived neurotoxin,hEDN)基因,克隆人含PTD TAT的pTAT原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内,以IPTG诱导融合蛋白表达。表达产物用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定。结果:成功地构建了乙肝病毒靶向核糖核酸酶及其两个对照的融合蛋白原核表达载体,并在IPTG诱导下获得特异性表达。结论:Tat-乙肝病毒 靶向核糖核酸酶融合蛋白的构建,为体内应用靶向核酸酶治 疗乙型肝炎奠定了基础。 展开更多
关键词 TAT-乙肝病毒 靶向核糖核酸酶 融合蛋白 原核载体 构建
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基质金属蛋白酶-7在卵巢浆液性肿瘤中的表达 被引量：15
4
作者 郭颖 刘军 +1 位作者 吴静 张建国 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期471-473,共3页
目的　探讨MMP 7在卵巢浆液性肿瘤中的表达情况。方法　采用免疫组化SP法对 6例正常卵巢、12例卵巢浆液性囊腺瘤、6例交界性囊腺瘤及 2 2例卵巢浆液性囊腺癌MMP 7的表达进行了研究。结果　正常卵巢不表达MMP 7。大部分卵巢浆液性肿瘤的... 目的　探讨MMP 7在卵巢浆液性肿瘤中的表达情况。方法　采用免疫组化SP法对 6例正常卵巢、12例卵巢浆液性囊腺瘤、6例交界性囊腺瘤及 2 2例卵巢浆液性囊腺癌MMP 7的表达进行了研究。结果　正常卵巢不表达MMP 7。大部分卵巢浆液性肿瘤的胞浆及间质中都有MMP 7的阳性表达。MMP 7在卵巢良性、恶性及交界性浆液性肿瘤胞浆中的表达无明显差异 ;而在肿瘤间质中 ,恶性及交界性卵巢浆液性肿瘤中的表达远高于良性肿瘤 (P <0 .0 5 )。在交界性及恶性浆液性卵巢肿瘤中 ,部分肿瘤细胞的细胞核中也有MMP 7的表达 ,为国内外首次报道。结论　MMP 展开更多
关键词 卵巢浆液性肿瘤 表达 基质金属蛋白酶-7 免疫组织化学染色 卵巢肿瘤
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淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白基因片段原核载体的构建及表达 被引量：6
5
作者 吴兴安 胡刚 +6 位作者 李继业 刘勇 张芳琳 于澜 白文涛 孙修勤 徐志凯 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第6期78-80,65,共4页
淋巴囊肿病病毒感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,提取细胞总RNA,采用RT-PCR法成功获得了淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白0.6kb基因片段。构建其原核表达载体,IPTG诱导表达。结果表明,该融合蛋白分子量约48kD,可与抗LCDV多克隆血清特异反应。为LCDV... 淋巴囊肿病病毒感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,提取细胞总RNA,采用RT-PCR法成功获得了淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白0.6kb基因片段。构建其原核表达载体,IPTG诱导表达。结果表明,该融合蛋白分子量约48kD,可与抗LCDV多克隆血清特异反应。为LCDV基因工程疫苗的研制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 淋巴囊肿病病毒 主要衣壳蛋白 基因片段 原核载体 虹彩病毒 诱导表达
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动物实验用脱毛剂配方的改进 被引量：24
6
作者 李峰 吴军正 +1 位作者 刘斌 张洪 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期298-299,共2页
目的：研究８０ｇ／Ｌ的硫化钠酒精溶液的脱毛效果。方法：分别用８０ｇ／Ｌ的硫化钠水溶液、８０ｇ／Ｌ的硫化钠甘油糊剂和８０ｇ／Ｌ的硫化钠酒精溶液３种不同配方的脱毛剂做脱毛效果、脱毛时间、脱毛剂用量对比实验。结果：８０ｇ／... 目的：研究８０ｇ／Ｌ的硫化钠酒精溶液的脱毛效果。方法：分别用８０ｇ／Ｌ的硫化钠水溶液、８０ｇ／Ｌ的硫化钠甘油糊剂和８０ｇ／Ｌ的硫化钠酒精溶液３种不同配方的脱毛剂做脱毛效果、脱毛时间、脱毛剂用量对比实验。结果：８０ｇ／Ｌ的硫化钠水溶液、８０ｇ／Ｌ硫化钠甘油糊剂和８０ｇ／Ｌ的硫化钠酒精溶液的脱毛时间（ｍｉｎ）分别为３．２０±０．６１、２．５５±０．５４和１．７５±０．３３，单位面积用量（ｍｌ／ｃｍ２）分别为０．６１±０．０７、０．４２±０．０３和０．３３±０．０２。结论：８０ｇ／Ｌ的硫化钠酒精溶液具有脱毛迅速、用量少、使用方便、而且脱毛效果好的特点。 展开更多
关键词 实验动物 硫化物 毛发去除 脱毛剂
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大鼠脊髓全横断损伤模型的建立 被引量：6
7
作者 刘锐 游思维 +3 位作者 刘惠玲 沈学锋 赵宇 鞠躬 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期263-268,共6页
目前用于脊髓全横断的动物模型,常遗有部分未损脊髓组织,局部脊髓损伤范围很大,尤其是破坏了的血运扩大了继发性变性,造成了复杂的局部病理变化,致使难以分析治疗性脊髓伤区内移植的疗效。因此迫切需要一种还原论式的脊髓横断模型,本实... 目前用于脊髓全横断的动物模型,常遗有部分未损脊髓组织,局部脊髓损伤范围很大,尤其是破坏了的血运扩大了继发性变性,造成了复杂的局部病理变化,致使难以分析治疗性脊髓伤区内移植的疗效。因此迫切需要一种还原论式的脊髓横断模型,本实验设计了一种切割辅以吸除的方法,可以在局部造成平均约0.6mm的清洁横断区,同时保存脊髓腹、背动脉及脊髓背静脉的大鼠脊髓横断模型,并用H.E.染色法、神经丝(NF)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的免疫组织化学方法及生物素化的葡萄糖胺(BDA)的追踪方法检验损伤区及其两侧脊髓的组织反应。 展开更多
关键词 大鼠 脊髓全横断损伤 动物模型 免疫组织化学
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人参皂甙Rd对皮层神经元兴奋性毒性损伤后胞内游离钙的影响 被引量：10
8
作者 张琛 叶瑞东 +5 位作者 韩军良 史明 曹荣 饶志仁 吴昊 赵钢 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期112-118,共7页
目的:探讨人参皂甙Rd(Ginsenoside Rd,GSRd)对皮层神经元兴奋性毒性损伤后细胞内游离钙离子浓度变化的影响。方法:采用原代方法培养大鼠皮层神经元,免疫荧光染色鉴定神经元纯度。应用激光共聚焦显微镜,观察GSRd对谷氨酸(Glutamate,Glu)... 目的:探讨人参皂甙Rd(Ginsenoside Rd,GSRd)对皮层神经元兴奋性毒性损伤后细胞内游离钙离子浓度变化的影响。方法:采用原代方法培养大鼠皮层神经元,免疫荧光染色鉴定神经元纯度。应用激光共聚焦显微镜,观察GSRd对谷氨酸(Glutamate,Glu)和N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)刺激后神经元胞内游离钙离子浓度变化的影响。使用钙离子荧光探针Fluo-4,AM标记细胞内游离钙,以Fluo-4的荧光强度反映细胞内游离钙浓度变化。结果:空白对照组荧光强度没有明显变化,而高浓度Glu刺激可迅速升高神经元胞内的荧光强度;在给予GSRd干预时,荧光强度升高的幅度明显降低,与MK-801的作用相似;NMDA刺激亦可使神经元胞内荧光强度明显升高,而加入GSRd干预时,荧光强度升高的幅度较NMDA损伤组有明显减小。结论:GSRd能够抑制高浓度Glu和NMDA引起的大量钙内流,提示减轻兴奋性毒性损伤过程中的钙超载可能是GSRd神经保护作用的机制之一。 展开更多
关键词 人参皂甙RD 谷氨酸 NMDA 兴奋性毒性 钙离子
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人端粒酶催化亚单位mRNA的实时荧光RT-PCR定量检测 被引量：7
9
作者 郭颖 刘军 +2 位作者 薛采芳 吴静 宋天保 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期618-620,共3页
目的 :建立可定量测定人端粒酶催化亚单位 (hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法。方法 :用Trizol 试剂从HepG2细胞中分离总RNA ,然后反转录为cDNA。利用一对基因特异引物和一条TaqManMGB探针 ,以实时荧光PCR定量hTERT的cDNA。同时定... 目的 :建立可定量测定人端粒酶催化亚单位 (hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法。方法 :用Trizol 试剂从HepG2细胞中分离总RNA ,然后反转录为cDNA。利用一对基因特异引物和一条TaqManMGB探针 ,以实时荧光PCR定量hTERT的cDNA。同时定量测定人 β 肌动蛋白 (hBA)的mRNA作为内对照。用梯度稀释的克隆的人 β 肌动蛋白基因制作标准曲线。结果 :标准曲线的相关系数为 1.0 0。实时荧光反转录PCR方法的平均变异系数为 7.1%。HepG2细胞hTERTmRNA与hBAmRNA的比值为 (1.3± 0 .3)× 10 -4。结论 :建立了可定量测定人端粒酶催化亚单位 (hTERT)mRNA的实时荧光反转录PCR方法。 展开更多
关键词 RNA 端粒酶催化亚单位 实时荧光PCR 反转录PCR HepG2细胞 定量测定 Β-肌动蛋白 BA 稀释 特异引物
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电针抑制脊髓内趋化因子CX3CL1表达减轻炎性痛的实验研究 被引量：11
10
作者 李雨衡 王文 +2 位作者 罗层 王强 熊利泽 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期169-173,共5页
目的：通过观察电针对完全弗氏佐剂（CFA）所致大鼠炎性痛急性期脊髓组织内趋化因子CX3CL1（Fractalkine,FKN）及其受体CX3CR1表达的影响,探讨FKN是否可能参与电针镇痛的相关机制。方法：清洁级雄性SD大鼠82只,分两批进行实验。第1批大... 目的：通过观察电针对完全弗氏佐剂（CFA）所致大鼠炎性痛急性期脊髓组织内趋化因子CX3CL1（Fractalkine,FKN）及其受体CX3CR1表达的影响,探讨FKN是否可能参与电针镇痛的相关机制。方法：清洁级雄性SD大鼠82只,分两批进行实验。第1批大鼠40只,随机分为4组（n=10）：空白对照组（Control组）,CFA模型组（CFA组）,电针治疗组（EA组）和非穴位电针组（Sham组）,其中CFA、EA和Sham组使用CFA足底注射造成炎性痛模型;造模后EA组给予电针刺激双侧＂足三里＂（30 min,2 Hz连续波,1～2 m A）,而Sham组接受非穴位针刺处理;分别于造模前及造模后1～7 d观察并测量大鼠机械缩足反应阈值（paw withdrawal mechanical threshold,PWMT）及热缩足反应阈值（paw withdrawal thermal latency,PWTL）,观察电针对CFA所致慢性痛的治疗作用。第2批大鼠42只,仍按上述分组方法随机分入7组（其中CFA、EA、Sham组取造模后1、3 d两个时间点,Control组取一个时间点）,在相应时间点处死实验动物取腰段脊髓组织进行Western Blot检验,观察电针干预对FKN及CX3CR1表达的影响。结果：CFA造模致实验动物PWMT及PWTL显著下降（P〈0.01）,提示电针处理部分拮抗了CFA的致痛作用（P〈0.05）;Western Blot结果显示,电针处理能够降低CFA所致动物脊髓组织升高的FKN表达,在造模后3 d最为显著（P〈0.01）,但其受体CX3CR1表达无显著性差异。结论：电针刺激大鼠＂足三里＂能够改善CFA所致炎性痛症状,其中抑制脊髓的FKN表达可能是电针镇痛的机制之一。 展开更多
关键词 炎性痛 趋化因子 FRACTALKINE 电针 大鼠
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HBV靶向核糖核酸酶基因的原核表达和纯化及多克隆抗体的制备 被引量：8
11
作者 李英辉 刘军 +3 位作者 赵亚 薛采芳 丁劲 黄豫晓 《医学研究生学报》 CAS 2005年第4期295-297,301,共4页
目的:旨在获得HBV靶向核糖核酸酶,并制备其兔的多克隆抗体。方法:将构建好的HBV靶向核糖核酸酶基因克隆入原核表达载体pET32a(+),转化入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达并经Ni2+亲和层析纯化。通过SDS PAGE和West... 目的:旨在获得HBV靶向核糖核酸酶,并制备其兔的多克隆抗体。方法:将构建好的HBV靶向核糖核酸酶基因克隆入原核表达载体pET32a(+),转化入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达并经Ni2+亲和层析纯化。通过SDS PAGE和Westernblot鉴定后,用纯化的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体,并以复性的蛋白作为抗原,用ELISA测定抗体的效价。结果:成功地纯化和复性了HBV靶向核糖核酸酶,获得了较高效价的抗血清。结论:获得纯化并复性的HBV靶向核糖核酸酶和多克隆抗体,为进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 HBV靶向核糖核酸酶 原核表达 多克隆抗体
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HBV靶向核糖核酸酶真核表达载体的构建及其在2.2.15细胞内的表达 被引量：9
12
作者 李英辉 刘军 薛采芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期217-220,共4页
目的　构建人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(hEDN)与乙肝病毒核心蛋白 (HBVc)的融合真核表达载体(该融合蛋白即为构建的靶向核糖核酸酶 ) ,抑制乙肝病毒在细胞内的复制。方法　分别从HL 6 0细胞和 2 2 15细胞中提取总RNA ,用RT PCR特异... 目的　构建人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(hEDN)与乙肝病毒核心蛋白 (HBVc)的融合真核表达载体(该融合蛋白即为构建的靶向核糖核酸酶 ) ,抑制乙肝病毒在细胞内的复制。方法　分别从HL 6 0细胞和 2 2 15细胞中提取总RNA ,用RT PCR特异性扩增hEDN及HBVc编码基因 ,将hEDN和HBVc克隆入真核表达载体pcDNA3 1(- ) ,hEDN克隆入原核表达载体 pGEX4T 1,并以纯化的原核表达产物免疫Balb/c小鼠 ,制备特异性抗体。用免疫荧光法检验 pcDNA3 1(- ) /HBVc -hEDN在转染 2 2 15细胞内地表达。结果　成功地构建了hEDN和HBVc的真核融合表达载体 ,并在 2 2 15细胞中较高效地表达。结论　pcDNA3 1(- ) /HBVc hEDN的构建和在 2 2 15细胞内的表达 。 展开更多
关键词 靶向核糖核酸酶 乙肝病毒 真核表达
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醛糖还原酶在小鼠损伤脊髓小胶质/巨噬细胞中的表达及其作用 被引量：4
13
作者 陈鹏 郭宏敏 +6 位作者 郑晶晶 于才勇 刘芳芳 卞干兰 钟金淑子 鞠躬 王键 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期203-205,共3页
目的:观察小鼠在脊髓损伤(SCI)后,醛糖还原酶(AR)在脊髓损伤后修复过程中的作用及可能的机制。方法:采用C57BL/6-ar+/+(B6野生型小鼠)和C57BL/6-ar-/-(B6-AR基因敲除)小鼠,建立脊髓重度夹伤模型。首先分析了AR分子在损伤脊髓中的细胞表... 目的:观察小鼠在脊髓损伤(SCI)后,醛糖还原酶(AR)在脊髓损伤后修复过程中的作用及可能的机制。方法:采用C57BL/6-ar+/+(B6野生型小鼠)和C57BL/6-ar-/-(B6-AR基因敲除)小鼠,建立脊髓重度夹伤模型。首先分析了AR分子在损伤脊髓中的细胞表达类型及脊髓损伤后AR分子mRNA的表达水平变化情况;通过BBB运动学分析,比较AR基因敲除小鼠和野生型小鼠脊髓损伤后运动功能恢复情况,对比损伤区面积变化;通过qRT-PCR方法,检测对比M1/M2型巨噬细胞特异分子iNOS和Arg I的表达变化。结果:AR分子在野生型小鼠损伤脊髓中的小胶质/巨噬细胞中高表达;qRT-PCR研究发现:脊髓损伤后AR表达逐渐升高,在损伤后第3天达到高峰。AR敲除小鼠在脊髓损伤后,其运动功能恢复好于野生型小鼠(P<0.05),同时损伤区面积也小于对照组。AR基因缺失后,损伤脊髓中的小胶质/巨噬细胞通过高表达Arg I向M2型巨噬细胞方向极化。结论:AR通过调节脊髓中小胶质/巨噬细胞的极化来影响脊髓损伤后的修复。 展开更多
关键词 醛糖还原酶 脊髓损伤 小胶质细胞 巨噬细胞
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用微卫星引物对近交系小鼠进行遗传监测 被引量：8
14
作者 李军林 张思河 魏泓 《西北农业学报》 CAS CSCD 2001年第1期1-3,共3页
目的 :近交系小鼠广泛地应用于医学和生物学研究领域 ,无品系污染是其基本要求 ,采用 1 0对微卫星引物对 BALB/ C-nu-nu、DBA/ 2、SCID、T73 9、TA2 、6 1 5六种近交系小鼠进行遗传监测 ,试图寻找相关品系遗传监测的基因位点和应用于实... 目的 :近交系小鼠广泛地应用于医学和生物学研究领域 ,无品系污染是其基本要求 ,采用 1 0对微卫星引物对 BALB/ C-nu-nu、DBA/ 2、SCID、T73 9、TA2 、6 1 5六种近交系小鼠进行遗传监测 ,试图寻找相关品系遗传监测的基因位点和应用于实际监测。方法 :在确定实验材料符合要求的情况下 ,采用聚合酶链式反应扩增短串联重复序列 ,选择多态性位点作为相关品系的遗传监测标记。结果 :除 1个位点表现为单态性外 ,其余9个微卫星位点表现出多态性 ,其中 D2 Nds3、D3Mit1 5、D3Mit1 7、D3Mit1 8等 4个位点多态性显著 ,这 4个位点适宜用于小鼠遗传监测。上述结果说明微卫星 DNA多态性标记适用于近交系小鼠遗传监测 ,有助于遗传监测从表现型过渡到 DNA水平。 展开更多
关键词 近交系小鼠 微卫星DNA多态性 遗传监测 实验动物
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神经系统中的一氧化氮和一氧化氮合酶 被引量：25
15
作者 贾铀生 鞠躬 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1993年第1期1-6,共6页
80年代初Funchgott等发现许多血管扩张剂(如ACh)的扩张血管作用是由于血管内皮受到刺激释放血管舒张因子,此因子引起血管平滑肌松弛,从而引起血管扩张;而并非由于激动其受体而直接产生者。后来的研究表明,血管舒张因子就是一氧化氮(NO)... 80年代初Funchgott等发现许多血管扩张剂(如ACh)的扩张血管作用是由于血管内皮受到刺激释放血管舒张因子,此因子引起血管平滑肌松弛,从而引起血管扩张;而并非由于激动其受体而直接产生者。后来的研究表明,血管舒张因子就是一氧化氮(NO)。近年来,业已从多种组织中提取了一氧化氮合酶(NOS)。在脑组织,已证实NOS就是依赖还原型辅酶Ⅱ的硫辛酸脱氢酶(NADPH Diaphorase,ND)。本文对NOS和NO的一些基本问题做一综述。 展开更多
关键词 神经系统 一氧化氮 一氧化氮合酶
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六种抗大鼠Nogo-A分子单克隆抗体的免疫荧光组织化学染色特性的比较 被引量：3
16
作者 邓斌 刘芳芳 +5 位作者 赵湘辉 于才勇 卞干兰 冯睿 鞠躬 王键 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期425-427,共3页
目的:检测和比较6种针对大鼠Nogo-A分子不同表位的单克隆抗体(mAb)应用于中枢神经组织的免疫组化染色特性,从而决定它们今后可能的应用范围和方法。其中4种mAb是针对Nogo-A分子中Nogo66片段,分别命名为No-go66-1、Nogo66-2、Nogo66-3和N... 目的:检测和比较6种针对大鼠Nogo-A分子不同表位的单克隆抗体(mAb)应用于中枢神经组织的免疫组化染色特性,从而决定它们今后可能的应用范围和方法。其中4种mAb是针对Nogo-A分子中Nogo66片段,分别命名为No-go66-1、Nogo66-2、Nogo66-3和Nogo66-4;其他2种mAb是针对Nogo-A分子氨基端(570-691)肽段,分别为Nogo-N1和Nogo-N2。方法:利用免疫荧光组织化学,检测Nogo-A mAb抗体对大鼠神经组织的反应性与特异性。结果:正常SD大鼠脊髓组织的免疫荧光组织化学双标结果显示,制备的6种抗大鼠Nogo-A分子mAb均可以与商品化的兔抗大鼠Nogo-A多克隆抗体(PcAb)双标记;其中Nogo66-1、Nogo66-2、No-go66-4和NogoN-2 mAb可与MBP阳性细胞双标记,与GFAP阳性细胞不共存;而Nogo66-3和NogoN-1 mAb不仅可以与MBP阳性细胞双标,同时也可以和GFAP阳性细胞共存。结论:Nogo66-1、Nogo66-2、Nogo66-4和NogoN-2 mAb可很好的识别组织中的Nogo-A分子,用于免疫组化研究。 展开更多
关键词 NOGO-A 单克隆抗体 免疫荧光 组织化学
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以恶性疟原虫MSP1和AMA1疫苗组合免疫小鼠诱导保护性免疫 被引量：3
17
作者 李淑梅 李珣 +2 位作者 缪军 刘忠湘 薛采芳 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期936-940,共5页
目的以MSP1和AMA1的DNA疫苗、重组痘苗病毒疫苗和重组蛋白疫苗组合免疫小鼠,诱导针对疟疾红内期抗原MSP1和AMA1的保护性抗体。方法将编码恶性疟原虫MSP1全片段和AMA1胞外域的DNA免疫质粒(VR1020/190.3和VR1020/E)、痘苗病毒载体(rMVA/19... 目的以MSP1和AMA1的DNA疫苗、重组痘苗病毒疫苗和重组蛋白疫苗组合免疫小鼠,诱导针对疟疾红内期抗原MSP1和AMA1的保护性抗体。方法将编码恶性疟原虫MSP1全片段和AMA1胞外域的DNA免疫质粒(VR1020/190.3和VR1020/E)、痘苗病毒载体(rMVA/190.3和rMVA/E)及重组蛋白(d-GX190H和E)的同种类型疫苗混合,作为核酸疫苗(D)、病毒疫苗(V)及蛋白疫苗(P)按照“初始-强化”策略免疫小鼠。间接ELISA测血清中抗MSP1和AMA1抗体;用免疫血清进行体外原虫入侵红细胞抑制实验;由转基因伯氏疟原虫Pb-PfM19和P.bANKA株分别对免疫鼠进行体内攻击。结果各组免疫血清中均产生了较强的抗体应答,抗MSP1抗体与抗AMA1抗体滴度的变化趋势一致。实验组免疫小鼠血清在体外对两株原虫入侵红细胞均有较大程度的抑制。体内攻击实验中实验组小鼠平均存活时间较对照组略长。结论采用以MSP1和AMA1为基础的DNA、重组痘苗病毒和重组蛋白疫苗的组合免疫小鼠能诱导出有效的保护性抗体。以上结果为疟疾红内期疫苗合理免疫方案提供了重要的实验依据。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 裂殖子表面抗原1(MSP-1) 顶端膜抗原1(AMA-1) 疫苗 免疫
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Tat-p53融合蛋白的表达、纯化及其转导活性 被引量：2
18
作者 丁劲 刘军 +4 位作者 黄豫晓 李英辉 陈俊 赵亚 薛采芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期587-590,共4页
目的:原核表达野生型p53与TatPTD(proteintransductiondomain)的融合蛋白,检测TatPTD介导p53进入肝细胞的效率。方法:利用RT-PCR方法从A549细胞系中分离野生型p53基因,将该基因分别克隆入pTAT-HA和pET-32a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(D... 目的:原核表达野生型p53与TatPTD(proteintransductiondomain)的融合蛋白,检测TatPTD介导p53进入肝细胞的效率。方法:利用RT-PCR方法从A549细胞系中分离野生型p53基因,将该基因分别克隆入pTAT-HA和pET-32a原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS内诱导表达并进行纯化。以纯化的p53蛋白经腹腔免疫BALB/c小鼠,制备高效价的抗血清。将Tat-p53融合蛋白加入HepG2细胞培养上清,利用间接免疫荧光法检测Tat-p53融合蛋白导入HepG2细胞的效率。结果:成功地构建了含有野生型p53基因的原核表达载体,表达纯化了Tat-p53融合蛋白及p53蛋白,制备p53特异的抗血清,证实Tat-p53可以高效的转入HepG2细胞内。结论:Tat-p53融合蛋白的表达纯化及活性分析,为应用Tat-p53融合蛋白治疗肝癌的实验研究奠定了基础。 展开更多
关键词 TAT p53 蛋白转导域 肿瘤 融合蛋白 活性分析 野生型P53基因 纯化 HepG2细胞 原核表达载体
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淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白基因片段在真核细胞中的初步表达 被引量：5
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作者 吴兴安 李继业 +6 位作者 胡刚 刘勇 张芳琳 于澜 白文涛 孙修勤 徐志凯 《科学技术与工程》 2003年第3期234-236,共3页
将淋巴囊肿病病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)主要衣壳蛋白(Majoy capsid protein,MCP)0.6kb基因片段克隆入真核表达载体pEGFP-N_2,得到阳性重组质粒pEGFP-N_2-LCDV0.6,用脂质体法将其转染入真核细胞CHO,并进行瞬时表达,荧光显... 将淋巴囊肿病病毒(Lymphocystis disease virus,LCDV)主要衣壳蛋白(Majoy capsid protein,MCP)0.6kb基因片段克隆入真核表达载体pEGFP-N_2,得到阳性重组质粒pEGFP-N_2-LCDV0.6,用脂质体法将其转染入真核细胞CHO,并进行瞬时表达,荧光显微镜观察及特异性RT-PCR检测结果表明:已成功将目的片断LCDV MCP 0.6kb转染到CHO细胞,并得到了初步表达。此研究为LCDV基因工程疫苗的研制提供了实验资料。 展开更多
关键词 淋巴囊肿病病毒 主要衣壳蛋白基因 真核细胞 基因克隆 基因表达 鱼类病毒
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应用40对微卫星引物对6种近交系小鼠遗传背景进行监测的研究 被引量：5
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作者 李军林 魏泓 +1 位作者 张耀光 张树辉 《四川动物》 CSCD 2001年第3期119-122,共4页
采用 40对引物的微卫星DNA　PCR对遗传质量符合要求的BALB/C nu nu、DBA/2、SCID、T73 9、TA2 、 6 15等 6种近交系小鼠进行遗传监测 ,结果 2 6对引物有稳定的扩增结果 ,5对引物表现为单态性 ,2 1对引物表现出多态性 ,其中D2Nds3、D3Mi... 采用 40对引物的微卫星DNA　PCR对遗传质量符合要求的BALB/C nu nu、DBA/2、SCID、T73 9、TA2 、 6 15等 6种近交系小鼠进行遗传监测 ,结果 2 6对引物有稳定的扩增结果 ,5对引物表现为单态性 ,2 1对引物表现出多态性 ,其中D2Nds3、D3Mitl5、D3Mitl7、D3Mit18、D11Mit2、D16Mit7等 6对引物表现出显著的多态性 ,反映了各品系小鼠独特的遗传背景 ,可应用于区别小鼠品系、监测品系间的遗传污染。为有关小鼠品系积累了遗传背景资料 。 展开更多
关键词 近交系小鼠 微卫星DNA多态性 遗传监测
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