EDA蛋白对人牙乳头间充质细胞一般生物学活性及EGFR表达的影响

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作者 甘云娜 王忠义 +3 位作者 陈苏民 赵桂文 叶晓兰 沈丽娟 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2006年第6期604-606,共3页

目的:研究EDA蛋白对人牙乳头间充质细胞一般生物学活性及EGFR表达的影响。方法:测定转染和未转染pIRES2-EGFP-EDA的人牙乳头间充质细胞的生长曲线和碱性磷酸酶活性;免疫荧光法观察转染和未转染EDA的人牙乳头间充质细胞EGFR的表达,对荧... 目的:研究EDA蛋白对人牙乳头间充质细胞一般生物学活性及EGFR表达的影响。方法:测定转染和未转染pIRES2-EGFP-EDA的人牙乳头间充质细胞的生长曲线和碱性磷酸酶活性;免疫荧光法观察转染和未转染EDA的人牙乳头间充质细胞EGFR的表达,对荧光照片进行灰度扫描,统计学分析。结果:和未转染者相比,转染EDA的人牙乳头间充质细胞的增殖有轻度减弱,其碱性磷酸酶活性则有显著减弱。正常人牙乳头间充质细胞有EGFR的微弱表达,而转染EDA的人牙乳头间充质细胞中EGFR的表达明显增强。结论:EDA基因对人牙乳头间充质细胞的增殖和活性有抑制作用;这可能与其上调人牙乳头间充质细胞的EGFR的表达有关。 展开更多

关键词 人牙乳头间充质细胞 转染 EGFR

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人骨保护素在毕赤酵母中的分泌表达及表达产物的生物活性分析(英文) 被引量：2

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作者 刘继中 陈苏民 +3 位作者 李毅 胡蕴玉 纪宗玲 杨彤涛 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期566-571,共6页

为了在毕赤酵母表达系统中分泌表达人骨保护素 (osteoprotegerin ,OPG) ,以人骨肉瘤细胞系MG6 3的mRNA为模板 ,采用RT PCR法得到人OPG编码区cDNA ,克隆入毕赤酵母表达载体pPICZ B ,电转化毕赤酵母GS115 (Mut+) ,经 3%甲醇诱导分泌表达人... 为了在毕赤酵母表达系统中分泌表达人骨保护素 (osteoprotegerin ,OPG) ,以人骨肉瘤细胞系MG6 3的mRNA为模板 ,采用RT PCR法得到人OPG编码区cDNA ,克隆入毕赤酵母表达载体pPICZ B ,电转化毕赤酵母GS115 (Mut+) ,经 3%甲醇诱导分泌表达人OPG与组氨酸的融合蛋白 .SDS PAGE及Western印迹分析表明 ,有分子量约 6 6kD的目的蛋白表达 .纯化后的表达产物加入体外培养的小鼠骨髓细胞培养基中 ,当浓度为 10 0ng ml时 ,象牙片上骨吸收陷窝的数量及玻片上的TRAP阳性多核细胞的数量均减少 (P <0 0 5 ) .而同时加入人OPG的多克隆抗体后 ,这一抑制作用可被拮抗 ,在浓度为 5 0ng ml时则无此作用 .人OPG蛋白在酵母系统的成功表达 ,为该蛋白的进一步应用研究提供了依据 . 展开更多

关键词 人骨保护素 毕赤酵母 分泌表达 表达产物 生物活性

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ndrg2 mRNA在人胎脑组织中表达的时空特点 被引量：4

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作者 侯双兴 王立峰 +3 位作者 邓艳春 刘新平 张健 刘娜 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期43-47,共5页

本研究利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测了ndrg2 mRNA在人胎脑组织中表达的时空特点,为进一步研究其功能提供实验依据。收集正常引产16～28周人胎脑组织标本,进行总RNA提取,应用RT-PCR方法半定量分析ndrg2基因在上述人胎脑组织中... 本研究利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测了ndrg2 mRNA在人胎脑组织中表达的时空特点,为进一步研究其功能提供实验依据。收集正常引产16～28周人胎脑组织标本,进行总RNA提取,应用RT-PCR方法半定量分析ndrg2基因在上述人胎脑组织中的表达水平和变化规律。RT-PCR结果显示:ndrg2 mRNA在正常人胎脑16、20、24和28周的各脑功能区均有表达,但随着发育,其表达水平有差别。在小脑、延髓和海马等部位,ndrg2 mRNA的表达水平在16周胎脑中较高。而在额叶和顶叶等部位,ndrg2 mRNA的表达水平在28周胎脑中达到高峰。以上结果表明,在人胚脑发育过程中ndrg2 mRNA从16～28周均有表达,但在不同脑后其表达存在一定差异,提示ndrg2基因对中枢神经系统的发育和成熟可能有重要影响。 展开更多

关键词 NDRG2 RT-PCR 胎脑 人

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无汗性外胚层发育不全患者EDA基因突变检测 被引量：3

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作者 甘云娜 王忠义 +4 位作者 陈苏民 柴玉波 纪宗玲 沈丽娟 叶小兰 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期305-307,共3页

目的:检测无汗性外胚层发育不全患者的EDA基因的突变。方法:提取无汗性外胚层发育不全综合症患者的基因组DNA,采用PCR方法扩增EDA基因外显子,直接将PCR产物送测序。结果:该患者EDA基因存在突变:-48位碱基A突变为G。结论:该患者EDA基因... 目的:检测无汗性外胚层发育不全患者的EDA基因的突变。方法:提取无汗性外胚层发育不全综合症患者的基因组DNA,采用PCR方法扩增EDA基因外显子,直接将PCR产物送测序。结果:该患者EDA基因存在突变:-48位碱基A突变为G。结论:该患者EDA基因存在突变:-48位碱基A突变为G,该突变位点国内外未见报道。 展开更多

关键词 无汗性外胚层发育不全 EDA基因

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伊马替尼联合P27基因克隆对慢性粒细胞白血病K562细胞的作用 被引量：2

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作者 王玮 孙秉中 +1 位作者 谢红 药立波 《实用医学杂志》 CAS 2006年第13期1473-1476,共4页

目的:探讨伊马替尼和P27基因克隆联合作用对K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。方法:RT-PCR扩增P27基因,胶纯化回收后连接到T载体测序,序列正确后构建P27-pcDNA3.1载体,将P27-pcDNA3.1与空载体分别以脂质体转染入P27基... 目的:探讨伊马替尼和P27基因克隆联合作用对K562细胞的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。方法:RT-PCR扩增P27基因,胶纯化回收后连接到T载体测序,序列正确后构建P27-pcDNA3.1载体,将P27-pcDNA3.1与空载体分别以脂质体转染入P27基因缺失的K562细胞,经筛选得到G418抗性的K562细胞株,Westernblot证实转染后有P27蛋白表达,MTT法检测细胞生长指数和细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果:表达外源性P27蛋白的P27-pcDNA3.1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株,流式细胞仪显示G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少,P27-pcDNA3.1-K562细胞与伊马替尼联合应用后凋亡细胞比例明显上升,MTT法显示细胞存活率较P27-K562细胞组及伊马替尼-K562细胞组均明显下降(P<0.01vsP27-K562细胞组,P<0.05vs伊马替尼-K562细胞组)。结论:表达外源P27蛋白联合应用伊马替尼对抑制K562细胞增殖及促凋亡方面具有协同作用。 展开更多

关键词 基因产物 rex 哌嗪类 克隆 分子 增殖抑制 凋亡

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钙激活Cl-通道基因疫苗对哮喘小鼠气道高反应性的预防作用 被引量：1

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作者 宋立强 李妍 +2 位作者 戚好文 王吉村 张乐宁 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1735-1738,共4页

目的:探讨hCLCA1DNA疫苗对哮喘小鼠气道高反应性(AHR)的影响。方法:构建重组真核表达载体pSecTag-2A/hCLCA1,将其作为DNA疫苗肌注法接种给BALB/c小鼠(每2周1次),并采用间接ELISA法检测血清抗体。卵蛋白致敏法复制接种小鼠的哮喘模型。引... 目的:探讨hCLCA1DNA疫苗对哮喘小鼠气道高反应性(AHR)的影响。方法:构建重组真核表达载体pSecTag-2A/hCLCA1,将其作为DNA疫苗肌注法接种给BALB/c小鼠(每2周1次),并采用间接ELISA法检测血清抗体。卵蛋白致敏法复制接种小鼠的哮喘模型。引喘5d后,测定小鼠气道压力峰值-时间指数(APTI)和离体气管环收缩最大张力,并计数肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞的数量。设接种空载体pSecTag-2A对照组、生理盐水组和正常小鼠对照组。结果:间接ELISA法证实疫苗接种3次后,小鼠产生能结合mCLCA3胞外肽段的血清抗体,其滴度为1∶800-1∶1000。疫苗组、空质粒组和生理盐水组的APTI、气管环收缩张力和BALF中嗜酸性粒细胞含量均明显高于正常小鼠(P<0.01);但疫苗组的这些指标显著低于空载体组(P<0.01)。空载体组与生理盐水组结果相似。结论:人源hCLCA1基因疫苗能诱导小鼠产生结合自身mCLCA3的交叉抗体,并因此阻断了上皮对哮喘AHR的促进作用,从而在一定程度上抑制了哮喘AHR的发生。 展开更多

关键词 哮喘 气道高反应件 疫苗 DNA 氯化物通道 钙激活

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酪氨酸激酶抑制剂STI571治疗慢性粒细胞白血病的研究 被引量：1

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作者 王玮 孙秉中 +1 位作者 药立波 刘新平 《实用医学杂志》 CAS 2005年第19期2108-2111,共4页

目的:研究特异性酪氨酸激酶抑制剂STI571对慢性粒细胞白血病(简称慢粒)细胞增殖、凋亡、周期调控及bcr-abl融合基因表达的影响,为慢粒的基因治疗提供理论依据。方法:细胞培养慢粒急变细胞系K562细胞株,通过MTT检测STI571作用下细胞存活... 目的:研究特异性酪氨酸激酶抑制剂STI571对慢性粒细胞白血病(简称慢粒)细胞增殖、凋亡、周期调控及bcr-abl融合基因表达的影响,为慢粒的基因治疗提供理论依据。方法:细胞培养慢粒急变细胞系K562细胞株,通过MTT检测STI571作用下细胞存活率,流式细胞仪检测周期变化,电镜及DNA电泳检测细胞凋亡,半定量RT-PCR检测STI571对bcr-abl融合基因表达的影响。结果:STI571作用后K562细胞中G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少。流式细胞图中的二倍体峰前可见一明显亚二倍体峰———凋亡峰(apoptosispeak),提示STI571能明显诱导K562细胞凋亡。电镜发现STI571作用于K562细胞12～72h后,诱导出各期凋亡细胞及凋亡小体。半定量PCR灰度扫描结果显示bcr-abl基因的mRNA表达下降,电泳检测扩增产物,荧光亮度减弱。结论:STI571能明显抑制白血病细胞增殖,细胞阻滞于G0/G1期,且具有明显的诱导凋亡作用,反馈抑制bcr-abl融合基因的表达。 展开更多

关键词 蛋白质酪氨酸激酶 白血病 髓样 慢性 细胞周期 凋亡 STI571 BCR-ABL融合基因 慢性粒细胞白血病 酪氨酸激酶抑制剂 基因治疗 K562细胞凋亡

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p16基因克隆联合伊马替尼对慢性粒细胞白血病K562细胞作用的研究 被引量：1

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作者 王玮 孙秉中 +1 位作者 刘庆春 药立波 《实用医学杂志》 CAS 2008年第5期700-703,共4页

目的:探讨p16基因克隆联合伊马替尼对慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞的增殖、周期及凋亡等的调控作用。方法:RT-PCR扩增p16基因,胶纯化回收后连接到T载体测序,序列正确后构建p16-pcDNA3.1载体,将p16-pcDNA3.1与空载体分别以脂质体转染... 目的:探讨p16基因克隆联合伊马替尼对慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞的增殖、周期及凋亡等的调控作用。方法:RT-PCR扩增p16基因,胶纯化回收后连接到T载体测序,序列正确后构建p16-pcDNA3.1载体,将p16-pcDNA3.1与空载体分别以脂质体转染入p16基因缺失的K562细胞,经筛选得到G418抗性的K562细胞株,Westernblot证实转染后有p16蛋白表达,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果:反复测序发现,从K562细胞中扩增的DNA片段属于非特异性扩增,证实K562细胞中p16基因缺失。转染p16基因后表达外源性p16蛋白的p16-pcDNA3.1-K562细胞株生长速度明显减慢;伊马替尼作用于已转染p16-pcDNA3.1的K562细胞,其细胞存活率与伊马替尼作用未转染K562细胞及单纯转染p16-pcDNA3.1的K562细胞相比均明显降低。转染p16基因后G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少,p16-pcDNA3.1-K562细胞与伊马替尼联合应用后凋亡细胞比例明显上升。结论:p16基因抑制K562细胞增殖并调节其周期,外源p16联合应用伊马替尼对抑制K562细胞增殖及促凋亡方面具有协同作用。 展开更多

关键词 白血病 淋巴细胞 慢性基因 P16 K562细胞伊马替尼 基因克隆

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人Lrg在真核细胞内亚细胞定位的检测 被引量：1

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作者 杜可军 常文辉 +5 位作者 侯立朝 骆文静 刘承利 陈苏民 陈景元 柴玉波 《科学技术与工程》 2006年第1期13-16,共4页

在真核细胞内,进行人Lrg蛋白亚细胞定位的检测。采用绿色荧光蛋白载体pIRES2-EGFP,构建pIRES2-EGFP-Lrg重组载体,稳定转染到真核细胞内,荧光显微镜进行人Lrg蛋白亚细胞定位的检测;同时利用间接免疫方法,检测人Lrg蛋白在几种细胞内的亚... 在真核细胞内,进行人Lrg蛋白亚细胞定位的检测。采用绿色荧光蛋白载体pIRES2-EGFP,构建pIRES2-EGFP-Lrg重组载体,稳定转染到真核细胞内,荧光显微镜进行人Lrg蛋白亚细胞定位的检测;同时利用间接免疫方法,检测人Lrg蛋白在几种细胞内的亚细胞定位。发现与EGFP融合的人Lrg蛋白表达于胞浆;间接免疫荧光实验同样表明Lrg是一种胞浆蛋白。说明人Lrg蛋白可能定位于胞浆。上述结果为阐明人Lrg的功能奠定了初步基础。 展开更多

关键词 人Lrg蛋白 EGFP 间接免疫荧光 胞内定位

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人ERA的细胞内定位

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作者 纪宗玲 陈苏民 +4 位作者 陈南春 张俊杰 吴元明 卢兹凡 路凡 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期169-170,185,共3页

关键词 人ERA EGFP 原位免疫细胞化学 细胞内定位 基因表达

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酪氨酸激酶抑制剂STI571与P21^(WAF)基因克隆治疗慢性粒细胞白血病的实验研究

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作者 王玮 孙秉中 +4 位作者 刘新平 冯琦 尚振川 曹云新 药立波 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期737-742,共6页

本研究探讨酪氨酸激酶抑制剂STI5 71和P2 1WAF基因克隆对慢性粒细胞白血病急变K5 62细胞株的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的治疗作用。RT PCR扩增P2 1WAF基因 ,胶纯化回收后连接到T载体测序 ,序列正确后构建P2 1 pcDNA3 .1载体 ,将P2 1 p... 本研究探讨酪氨酸激酶抑制剂STI5 71和P2 1WAF基因克隆对慢性粒细胞白血病急变K5 62细胞株的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的治疗作用。RT PCR扩增P2 1WAF基因 ,胶纯化回收后连接到T载体测序 ,序列正确后构建P2 1 pcDNA3 .1载体 ,将P2 1 pcDNA3 .1与空载体分别以脂质体转染入P2 1蛋白表达缺如的K5 62细胞 ,经筛选得到G4 18抗性的K5 62细胞株 ,Westernblot证实转染后有P2 1蛋白表达 ,MTT法检测细胞存活率 ,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果表明 :表达外源性P2 1蛋白的P2 1 pcDNA3 .1 K5 62细胞株生长速度明显慢于对照K5 62细胞株 ,流式细胞仪显示G0 /G1期细胞增多 ,MTT法显示P2 1 pcDNA3 .1 K5 62细胞与STI5 71联合应用后 ,与单用STI5 71作用的K5 62细胞相比 ,凋亡细胞比例轻度减少 ,细胞存活率下降较慢。结论 :表达外源P2 1蛋白能抑制K5 62细胞增殖 ,同时对STI5 71的促凋亡作用有轻度抑制 ,并降低K5 62细胞对STI5 71的敏感性。 展开更多

关键词 酪氨酸激酶抑制刑 ST1571 P21^WAF基因 基因克隆 慢性粒细胞白血病

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酪氨酸激酶抑制剂对转染p15基因的K562细胞的作用

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作者 王玮 孙秉中 +1 位作者 谢红 药立波 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第1期42-46,共5页

本研究探讨酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼(imatinib)和p15基因克隆联合作用对K562细胞的增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。用RT-PCR扩增p15基因,胶纯化回收后连接到T载体测序,确认序列正确后构建p15-pcDNA3.1载体,将p15-pcDNA3.1与空载体... 本研究探讨酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼(imatinib)和p15基因克隆联合作用对K562细胞的增殖、细胞周期及凋亡等的调控作用。用RT-PCR扩增p15基因,胶纯化回收后连接到T载体测序,确认序列正确后构建p15-pcDNA3.1载体,将p15-pcDNA3.1与空载体分别以脂质体转染入p15基因突变的K562细胞,经筛选得到G418抗性的K562细胞株;用Westernblot检测转染后P15蛋白的表达;用MTT法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞周期和凋亡。结果表明:从对照K562细胞中扩增的DNA片段,在第174-180位点有7个碱基缺失,这证实对照K562细胞中p15基因部位基因缺失。表达外源性P15蛋白的p15-pcDNA3.1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株;流式细胞术显示G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少;p15-pcDNA3.1-K562细胞与伊马替尼联合应用后凋亡细胞比例明显上升,MTT法显示细胞存活率较对照细胞明显下降。结论:表达外源P15蛋白联合应用伊马替尼对抑制K562细胞增殖及促凋亡方面具有协同作用。 展开更多

关键词 P15基因 酪氨酸激酶抑制剂 伊马替尼 K562细胞

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