从蛋白质的演化看生物进化 被引量：2

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作者 李元 马文煜 《医学与哲学》 1997年第10期529-530,共2页

从蛋白质的演化看生物进化第四军医大学微生物教研室（西安７１００３２）李元马文煜在生物学史上，拉马克、达尔文在其创立的生物进化论中强调了由生存竞争、自然选择引起的物种演化的渐进性与连续性，却忽视了某些物种演化形式的突变... 从蛋白质的演化看生物进化第四军医大学微生物教研室（西安７１００３２）李元马文煜在生物学史上，拉马克、达尔文在其创立的生物进化论中强调了由生存竞争、自然选择引起的物种演化的渐进性与连续性，却忽视了某些物种演化形式的突变性与间断性。而生物突变论则只看到一... 展开更多

关键词 蛋白质 演化 生物进化

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结核分枝杆菌RpfA融合蛋白的免疫学和生物学特性的初步研究

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作者 高辉 柏银兰 +2 位作者 王丽梅 徐志凯 薛莹 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期809-812,共4页

目的在大肠杆菌中表达并纯化结核分枝杆菌RpfA融合蛋白,并初步研究其免疫学和生物学特性。方法Rp-fA融合蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的体液免疫应答效果。分离小鼠的脾淋巴细胞,MTT法检测淋巴细胞增殖指数,ELISA法检测培养... 目的在大肠杆菌中表达并纯化结核分枝杆菌RpfA融合蛋白,并初步研究其免疫学和生物学特性。方法Rp-fA融合蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的体液免疫应答效果。分离小鼠的脾淋巴细胞,MTT法检测淋巴细胞增殖指数,ELISA法检测培养液上清IFN-γ,IL-2含量;MTBH37Rv毒株静脉感染免疫小鼠,测定脾脏细菌负荷。将不同浓度的复性RpfA融合蛋白和特异性多抗加入到MTBH37Ra中,测定H37Ra的生长曲线。结果RpfA融合蛋白免疫小鼠的脾淋巴细胞的增殖指数达到3.57,高于生理盐水对照组的1.27(P<0.05);培养上清中IFN-γ含量为362.99±72.75ng/L,IL-2含量为210.10±20.19ng/L,而生理盐水对照组含量均低于50ng/L(P<0.05)。免疫小鼠脾脏细菌负荷计数为5.57±0.37(log10CFU±S),而生理盐水对照组为6.54±0.22(P<0.05)。RpfA融合蛋白对H37Ra的生长有明显促进作用,而加入特异性多抗后可以抑制RpfA融合蛋白的促生长作用。结论RpfA融合蛋白免疫小鼠可引起体液免疫和保护性细胞免疫,可能作为基因疫苗的候选组分。RpfA融合蛋白对H37Ra生长有明显的刺激作用,可能作为快速培养检验结核分枝杆菌的添加组分。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 RpfA融合蛋白 免疫学 生物学

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丙戊酸钠抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡与分化 被引量：7

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作者 韩冬梅 陈协群 +2 位作者 梁蓉 董宝侠 尹文 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第1期21-24,共4页

为进一步研究丙戊酸钠(sodium valproate;VPA)对白血病细胞HL-60的增殖、凋亡和分化的影响,采用MTT法检测不同浓度的VPA对HL-60细胞增殖的作用;细胞化学染色法观察药物作用后细胞形态的变化;NBT还原实验结合形态学作为观测细胞分化指标... 为进一步研究丙戊酸钠(sodium valproate;VPA)对白血病细胞HL-60的增殖、凋亡和分化的影响,采用MTT法检测不同浓度的VPA对HL-60细胞增殖的作用;细胞化学染色法观察药物作用后细胞形态的变化;NBT还原实验结合形态学作为观测细胞分化指标;应用流式细胞术检测不同浓度药物作用后细胞周期的变化及凋亡细胞的比例。结果显示:VPA能明显抑制HL-60的增殖;经2mmol/L VPA处理24-48小时后,HL-60出现胞浆空泡、核固缩、核碎裂及凋亡小体;Annexin V阳性的早期凋亡细胞比例由2.9%升高到17.1%;流式细胞术检测出明显的亚二倍体峰;G1期细胞由51.1%增加至84.6%,S期细胞由37.9%减低至14.4%。0.25mmol/L VPA作用1周后,促进HL-60细胞向中幼粒、晚幼粒阶段分化,NBT阳性细胞百分率为(47±2)%。结论:VPA能明显抑制白血病细胞HL-60的增殖,并诱导其分化及凋亡。 展开更多

关键词 丙戊酸钠 HL-60细胞 细胞增殖 细胞凋亡 细胞分化

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重组耻垢分枝杆菌Ag85B-ESAT6-rMs对小鼠巨噬细胞功能的影响 被引量：2

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作者 郝彦斐 罗泰来 +4 位作者 王平 康健 柏银兰 王丽梅 徐志凯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期361-363,共3页

目的:探讨重组耻垢分枝杆菌Ag85B-ESAT6-rMs对小鼠巨噬细胞功能的影响。方法:将耻垢分枝杆菌(Ms)与重组耻垢分枝杆菌Ag85B-ESAT6-rMs分别感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,通过抗酸染色和细胞内细菌菌落形成单位计数评价Ms和Ag85B-ESAT6-rMs... 目的:探讨重组耻垢分枝杆菌Ag85B-ESAT6-rMs对小鼠巨噬细胞功能的影响。方法:将耻垢分枝杆菌(Ms)与重组耻垢分枝杆菌Ag85B-ESAT6-rMs分别感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,通过抗酸染色和细胞内细菌菌落形成单位计数评价Ms和Ag85B-ESAT6-rMs被巨噬细胞吞噬和消化能力;采用流式细胞术检测巨噬细胞凋亡情况;分别采用实时定量PCR技术和ELISA检测细胞因子TNF-α的表达和分泌水平。结果:小鼠巨噬细胞实验证实,Ag85B-ESAT6-rMs比Ms具有更强的感染和促进巨噬细胞的吞噬能力,Ag85B-ESAT6-rMs可增加巨噬细胞表达和分泌TNF-α的水平,并促进受感染巨噬细胞的凋亡。结论:Ag85B-ESAT6-rMs可以促进巨噬细胞的吞噬消化功能,将有助于增强巨噬细胞对Ms抗原的递呈和机体抗Ms感染的特异性免疫。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 耻垢分枝杆菌 巨噬细胞 AG85B ESAT6

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人源性脑胶质瘤噬菌体抗体库的构建 被引量：1

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作者 王彦刚 章翔 +5 位作者 阎岩 付洛安 刘卫平 吴景文 郭庆东 刘先珍 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期795-797,共3页

为构建人源性脑胶质瘤噬菌体抗体库 ,从脑胶质瘤患者外周血淋巴细胞 (PBL)中提取细胞总RNA ,经逆转录后用套式PCR分别扩增抗体轻链Vκ和重链VH基因。先构建Vκ基因库 ,并使连接Vκ和VH基因的linker与Vκ基因连接 ,再将VH基因克隆入Vκ... 为构建人源性脑胶质瘤噬菌体抗体库 ,从脑胶质瘤患者外周血淋巴细胞 (PBL)中提取细胞总RNA ,经逆转录后用套式PCR分别扩增抗体轻链Vκ和重链VH基因。先构建Vκ基因库 ,并使连接Vκ和VH基因的linker与Vκ基因连接 ,再将VH基因克隆入Vκ基因库 ,即构建成功单链抗体 (ScFv)库。随机挑取菌落鉴定 ,测序表明从PBL中扩增出人源性Vκ和VH基因 ,并构建了库容量约为 2× 10 6的ScFv噬菌体抗体库。随机挑取克隆的测序表明 ,测定的VH基因与Kabat的抗体基因库中人抗体VH基因有较高的同源性 ,证明所克隆的基因属人抗体可变区基因。结果表明实验构建成人源性脑胶质瘤噬菌体抗体库 。 展开更多

关键词 神经胶质瘤 噬菌体抗体库 单链抗体 免疫治疗 脑肿瘤 PBL 外周血淋巴细胞

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柯萨基B3病毒感染鼠NK细胞活性和表面β－内啡肽受体的关系 被引量：2

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作者 沈茜 章同华 汪美先 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期155-158,共4页

系统观察了柯萨基Ｂ３病毒诱导员心肌炎病理过程中，ＮＫ细胞活性和表面β－内啡肽（β－ＥＰ）受体改变的关系。在感染后３～１０天，ＮＫ细胞活性升高；血浆β－ＥＰ浓度亦显著升高；ＮＫ细胞表面β－ＥＰ受体的结合容量及解离常数均... 系统观察了柯萨基Ｂ３病毒诱导员心肌炎病理过程中，ＮＫ细胞活性和表面β－内啡肽（β－ＥＰ）受体改变的关系。在感染后３～１０天，ＮＫ细胞活性升高；血浆β－ＥＰ浓度亦显著升高；ＮＫ细胞表面β－ＥＰ受体的结合容量及解离常数均下降。提示受染鼠ＮＫ细胞膜β－ＥＰ受体的变化及血浆β－ＥＰ浓度的升高，有利于增强ＮＫ细胞的活性，减少心肌组织中感染性病毒的滴度。 展开更多

关键词 内啡肽 受体 杀伤细胞 柯萨奇病毒

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丙型肝炎病毒C区截短型基因原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达 被引量：1

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作者 胡刚 董晓慧 +3 位作者 薛小平 楚雍烈 尹文 雷迎峰 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期320-322,326,共4页

目的建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的原核表达系统,获得高产量的纯化核心蛋白。方法应用多聚酶链反应(PCR),以HCV-H株全长cDNA序列为模板,扩增获得C区羧基端部分缺失的基因片段,克隆入原核表达载体pBVIL1,构建原核表达载体pBVI... 目的建立稳定表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的原核表达系统,获得高产量的纯化核心蛋白。方法应用多聚酶链反应(PCR),以HCV-H株全长cDNA序列为模板,扩增获得C区羧基端部分缺失的基因片段,克隆入原核表达载体pBVIL1,构建原核表达载体pBVIL1-Ct,转化HB101宿主菌,通过温度诱导表达截短型C蛋白。结果扩增得到目的基因长度为462bp,构建pBVIL1-Ct表达载体,在HB101宿主菌中通过温度诱导获得稳定表达,表达蛋白占菌体总蛋白含量的24%。Western-Blot及ELISA检测证实表达产物可与HCV患者阳性血清发生特异性结合反应。结论羧基端部分缺失的HCV C区基因片段可在大肠杆菌中稳定表达并具有良好的反应原性。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒(HCV) 核心蛋白 基因表达 大肠杆菌

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汉坦病毒S基因真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的瞬时表达 被引量：1

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作者 薛小平 徐志凯 +5 位作者 马文煜 闫岩 张芳琳 尹文 吴兴安 白文涛 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第2期9-11,共3页

本文采用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增了汉坦病毒陈株的Ｓ基因的编码区序列，克隆入真核表达载体ＰＣＭＶ４，构建了可表达汉坦病毒Ｓ基因的真核表达载体ＰＣＭＶ４－ＣｈｅｎＳ１．３。用电穿孔法转染ＣＯＳ－７细胞，免... 本文采用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增了汉坦病毒陈株的Ｓ基因的编码区序列，克隆入真核表达载体ＰＣＭＶ４，构建了可表达汉坦病毒Ｓ基因的真核表达载体ＰＣＭＶ４－ＣｈｅｎＳ１．３。用电穿孔法转染ＣＯＳ－７细胞，免疫荧光和ＥＬＩＳＡ检测表明，目的基因在ＣＯＳ－７细胞中获得瞬时表达。 展开更多

关键词 汉坦病毒 S基因 真核表达 COS-7细胞

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单克隆抗体对变形链球菌生长的影响 被引量：1

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作者 文立亚 张传彬 岳松龄 《口腔医学纵横》 CAS CSCD 1996年第1期13-14,共2页

用自制的抗远缘链球菌ＯＭＺ１７６２２０ｋＤ表面蛋白抗原的单克隆抗体（ＭＣＡｂ）对ＯＭＺ１７６菌的生长进行研究。结果表明，在一定时间内ＭＣＡｂ（ＷＣ３Ａ６ｄ）与ＯＭＺ１７６菌作用后，其生长率较对照组明显下降（Ｐ＜０．０... 用自制的抗远缘链球菌ＯＭＺ１７６２２０ｋＤ表面蛋白抗原的单克隆抗体（ＭＣＡｂ）对ＯＭＺ１７６菌的生长进行研究。结果表明，在一定时间内ＭＣＡｂ（ＷＣ３Ａ６ｄ）与ＯＭＺ１７６菌作用后，其生长率较对照组明显下降（Ｐ＜０．０１）。 展开更多

关键词 口腔微生物 变形链球菌 生长 单克隆抗体

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汉滩病毒感染HUVEC细胞系炎症介质表达的检测

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作者 阎岩 徐志凯 +5 位作者 白文涛 刘勇 王海涛 吴兴安 张芳琳 罗雯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期417-418,共2页

目的检测汉滩病毒陈株感染HUVEC细胞系ECV304中炎症介质的表达。方法用汉滩病毒陈株感染HUVEC细胞系ECV304,取感染后不同时间的细胞提取细胞总RNA,用半定量RT-PCR检测感染细胞中ICAM-1、eNOS和IL-6基因的表达,并将扩增的ICAM-1和eNOS基... 目的检测汉滩病毒陈株感染HUVEC细胞系ECV304中炎症介质的表达。方法用汉滩病毒陈株感染HUVEC细胞系ECV304,取感染后不同时间的细胞提取细胞总RNA,用半定量RT-PCR检测感染细胞中ICAM-1、eNOS和IL-6基因的表达,并将扩增的ICAM-1和eNOS基因克隆,测定核苷酸序列。结果IACM-1的表达产物在病毒感染后较未感染细胞有明显升高,序列分析结果表明扩增的基因为特异性扩增产物;用扩增eNOS的引物从病毒感染细胞可扩增出表达产物,从未感染细胞不能扩增出任何产物,但序列分析结果表明扩增的基因与一新基因高度同源。结论汉滩病毒陈株感染ECV304细胞可上调炎症某些介质的表达。 展开更多

关键词 汉滩病毒 ICAM-1 RT-PCR

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丙型肝炎病毒核心区截短型基因真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

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作者 韦三华 尹文 +5 位作者 雷迎风 胡兴斌 吕欣 杨敬 孙梦宁 徐志凯 《医学研究生学报》 CAS 2005年第12期1063-1065,i0017,共4页

目的:建立截短的丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中瞬时表达。方法:应用多聚酶链反应(PCR),以HCV-H株全长cDNA序列为模板,扩增获得C区羧基端部分缺失的基因片段,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),并... 目的:建立截短的丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中瞬时表达。方法:应用多聚酶链反应(PCR),以HCV-H株全长cDNA序列为模板,扩增获得C区羧基端部分缺失的基因片段,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),并通过脂质体转染至CHO细胞。结果:构建了真核表达载体pcDNA3.1-C t,成功转染CHO细胞,间接免疫荧光和RT-PCR证实pcDNA3.1-C t在CHO细胞中表达截短型的C蛋白。结论:成功构建羧基端部分缺失的HCV C区基因的真核表达载体,瞬时转染CHO细胞,为进一步基因免疫和构建多表位卡介苗(BCG)活载体疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 基因表达 转染

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提取变形链球菌表面蛋白抗原的方法探讨

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作者 张传彬 文立亚 钱凤兰 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期249-250,T013,共3页

采用培养基加载体的方法培养变形链球菌，提取细菌表面蛋白抗原Ⅰ／Ⅱ（ＳＡⅠ／Ⅱ），可使常规从培养上清液中提取ＳＡⅠ／Ⅱ的程序明显简化且操作方便。该方法所获得的ＳＡⅠ／Ⅱ的量是常规法等体积培养液中所得的１６倍。该法对于需... 采用培养基加载体的方法培养变形链球菌，提取细菌表面蛋白抗原Ⅰ／Ⅱ（ＳＡⅠ／Ⅱ），可使常规从培养上清液中提取ＳＡⅠ／Ⅱ的程序明显简化且操作方便。该方法所获得的ＳＡⅠ／Ⅱ的量是常规法等体积培养液中所得的１６倍。该法对于需大量培养细菌提取蛋白抗原的实验研究有实用价值。 展开更多

关键词 细菌培养 变形链球菌 表面蛋白抗原

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免疫脂质体在肿瘤诊断和治疗中的应用

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作者 徐梁 张学庸 汪美先 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1991年第1期67-71,共5页

本文综述了免疫脂质体的制备方法及其在肿瘤诊断和治疗中的新进展。脂质体与抗体连接即成为免疫脂质体,连接的方法有交联法和插入法。免疫脂质体用于免疫诊断敏感度高,操作简便快速。用于抗肿瘤导向治疗己实验了多种药物。进行了深入研... 本文综述了免疫脂质体的制备方法及其在肿瘤诊断和治疗中的新进展。脂质体与抗体连接即成为免疫脂质体,连接的方法有交联法和插入法。免疫脂质体用于免疫诊断敏感度高,操作简便快速。用于抗肿瘤导向治疗己实验了多种药物。进行了深入研究对脂质体与细胞的作用机理及多价结合的意义。体内抗肿瘤研究尤其是人肿瘤裸鼠移植瘤的治疗己取得不少进展。本文分析了3种特殊类型免疫脂质体的特点,讨论了目前存在的问题。免疫脂质体在肿瘤诊断和治疗中具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 脂质体 肿瘤 单克隆抗体 诊断

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沙眼衣原体中组蛋白样蛋白的研究

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作者 李元 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1996年第3期37-38,共2页

沙眼衣原体中组蛋白样蛋白的研究李元综述马文煜，王成济审校原核细胞与真核细胞的本质区别在于细胞核的差异。真核细胞染色体的基本单位是核小体，其结构为ＤＮＡ分子（１８６ｂｐ）围绕组蛋白Ｈ２ａ、Ｈ２ｂ、Ｈ３、Ｈ４各二分子组成... 沙眼衣原体中组蛋白样蛋白的研究李元综述马文煜，王成济审校原核细胞与真核细胞的本质区别在于细胞核的差异。真核细胞染色体的基本单位是核小体，其结构为ＤＮＡ分子（１８６ｂｐ）围绕组蛋白Ｈ２ａ、Ｈ２ｂ、Ｈ３、Ｈ４各二分子组成的八聚体而成，核小体之间由Ｈ１相连... 展开更多

关键词 沙眼衣原体 组蛋白样蛋白

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假说与科研成果—单克隆抗体技术创立的启示

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作者 李元 马文煜 《医学与哲学》 1996年第10期531-532,共2页

假说与科研成果—单克隆抗体技术创立的启示第四军医大学微生物教研室（西安７１００３２）李元马文煜１９７５年Ｇ．Ｋｏｈｌｅｒ和Ｃ．Ｍｉｌｓｔｅｉｎ在Ｎ．Ｋ．Ｊｅｒｎｅ的免疫学理论指导下，创造性地建立了淋巴细胞杂交瘤技术，... 假说与科研成果—单克隆抗体技术创立的启示第四军医大学微生物教研室（西安７１００３２）李元马文煜１９７５年Ｇ．Ｋｏｈｌｅｒ和Ｃ．Ｍｉｌｓｔｅｉｎ在Ｎ．Ｋ．Ｊｅｒｎｅ的免疫学理论指导下，创造性地建立了淋巴细胞杂交瘤技术，成功地研制出高纯度、高特异性的单克... 展开更多

关键词 假说 科研成果 单克隆抗体 启示 医学哲学

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日本脑炎病毒E蛋白基因酵母双杂交表达载体的构建

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作者 樊英如 马文煜 +2 位作者 黄庆生 薛小平 付莉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期196-197,共2页

关键词 日本脑炎病毒 酵母双杂交 载体构建 E蛋白

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