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重要病原微生物研究进展及展望 被引量:4
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作者 徐志凯 戚中田 +1 位作者 胡福泉 杨瑞馥 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1061-1065,共5页
目的综述国内外重要病原微生物的研究现状和发展动态,提出未来军队病原微生物学研究的发展方向。方法采用情报调研方法,检索和综述近5年来国内外在一些重要病毒(如肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、流感病毒、脑炎病毒、出血热病毒)和细菌(... 目的综述国内外重要病原微生物的研究现状和发展动态,提出未来军队病原微生物学研究的发展方向。方法采用情报调研方法,检索和综述近5年来国内外在一些重要病毒(如肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、流感病毒、脑炎病毒、出血热病毒)和细菌(如结核分枝杆菌、2型猪链球菌、鼠疫耶尔森菌、炭疽杆菌和幽门螺杆菌)及其所致传染病研究领域的研究进展。结果病原微生物引起的各种传染病是目前威胁人类健康与生命的最重要的一类疾病。特别是近30年来,一些"新现传染病"和"再现传染病"造成的严重危害受到广泛关注。随着人类对病原微生物认识的不断加深,对付病原微生物的手段也不断完善。结论 "十二五"期间,军队医学微生物学领域应努力培养和造就一支具有较强创新能力的科技人才队伍,建设和完善一批功能先进配套的科研基地和技术平台,组织申报和落实重大项目,取得一批具有原始创新和重要应用前景的科研成果,提高科技成果转化率和科技进步贡献率,力争在若干重大前沿、主流领域的研究中取得重要进展和突破。 展开更多
关键词 病毒 细菌 传染病
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微生物功能基因组学研究的思维变革
2
作者 范雄林 徐志凯 《医学与哲学》 2001年第11期51-52,共2页
关键词 微生物基因组计划 微生物功能基因组学 研究 思维变革
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关于病原微生物毒力进化的若干思考
3
作者 丁天兵 《医学与哲学》 1995年第6期298-300,共3页
病原微生物的致病作用(毒力)差异很大。这些差异除了致病菌本身的原因外,还与宿主和外界环境有着极其密切的关系,并且处于不断的变化之中。作者依据现代进化理论,考察了一些传染病病原体的致病特点,认为其传播方式在某种程度上反... 病原微生物的致病作用(毒力)差异很大。这些差异除了致病菌本身的原因外,还与宿主和外界环境有着极其密切的关系,并且处于不断的变化之中。作者依据现代进化理论,考察了一些传染病病原体的致病特点,认为其传播方式在某种程度上反映了其毒力的强弱,是长期适应宿主和外界环境的结果,并试图通过以上分析预测病原体毒力变异的趋势,进而制定正确的卫生保健策略,改善人类社会的行为方式,采取相应有效的医疗措施以阻止毒力向增强的方向进化,从而最终使人类自己受益。 展开更多
关键词 病原微生物 毒力 进化 传播方式
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IL_2-HBVPre-S融合基因的克隆、表达及生物学活性初步鉴定 被引量:2
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作者 杨晓峰 马文煜 +1 位作者 姜绍谆 逮好英 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1996年第2期12-16,共5页
IL_2-HBVPre-S融合基因的克隆、表达及生物学活性初步鉴定杨晓峰,马文煜,姜绍谆,逮好英(第四军医大学微生物学教研室,西安710032)IL2是最早发现的淋巴因子之一,它通过与激活的T淋巴细胞表面特异性受体的... IL_2-HBVPre-S融合基因的克隆、表达及生物学活性初步鉴定杨晓峰,马文煜,姜绍谆,逮好英(第四军医大学微生物学教研室,西安710032)IL2是最早发现的淋巴因子之一,它通过与激活的T淋巴细胞表面特异性受体的相互作用,在激活的T淋巴克隆中起着... 展开更多
关键词 αA-干扰素 前S蛋白 融合基因 融合蛋白 克隆
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汉滩病毒VLP的构建及其生物学特性的研究 被引量:1
5
作者 应旗康 张晓晓 +4 位作者 王芳 冯伟 张尧 吴兴安 刘梓愉 《科学技术与工程》 北大核心 2015年第10期159-162,共4页
汉滩病毒是一种单负链RNA病毒,在我国主要引起以发热、出血、急性肾功能损害和免疫功能紊乱为主要特征的肾综合征出血热(HFRS),临床治疗尚无特效治疗药物,主要依靠灭活疫苗进行预防,但其诱导机体产生病毒中和抗体滴度较低,诱导细胞免疫... 汉滩病毒是一种单负链RNA病毒,在我国主要引起以发热、出血、急性肾功能损害和免疫功能紊乱为主要特征的肾综合征出血热(HFRS),临床治疗尚无特效治疗药物,主要依靠灭活疫苗进行预防,但其诱导机体产生病毒中和抗体滴度较低,诱导细胞免疫反应能力差。病毒样颗粒(virus like particles,VLP)具有病毒天然蛋白成分和构象,但不含病毒核酸,是理想的候选疫苗。将表达汉滩病毒包膜糖蛋白Gn和Gc的M片段与含有表达汉滩病毒核蛋白的S片段的载体在哺乳动物细胞中共表达,包装出汉滩病毒VLP,对包装出的VLP进行初步纯化和生物学特性的鉴定。 展开更多
关键词 汉滩病毒 病毒免疫 VLP 疫苗
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IFNα A-HBV preS 融合蛋白在大肠杆菌中的表达及生物学活性的初步鉴定
6
作者 杨晓峰 马文煜 姜绍谆 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1997年第2期23-24,55,共3页
本实验利用重组IFNαA-HBVpreS融合基因ply5质粒在大肠杆菌DH5α中表达IFNαA-HBVpreS融合蛋白。该融合基因产物的分子量为39kD左右,融合蛋白的表达率为11.8%。对该融合蛋白的初步鉴定表明:... 本实验利用重组IFNαA-HBVpreS融合基因ply5质粒在大肠杆菌DH5α中表达IFNαA-HBVpreS融合蛋白。该融合基因产物的分子量为39kD左右,融合蛋白的表达率为11.8%。对该融合蛋白的初步鉴定表明:该融合蛋白既具有HBVpreS蛋白的免疫原性,又具备IFNα的生物学活性。 展开更多
关键词 IFNαA HBVpreS 融合蛋白 大肠杆菌 表达 鉴定
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医学院校生物技术专业病毒学课程教学实践与体会
7
作者 吕欣 张芳琳 +1 位作者 柏银兰 吴兴安 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期104-107,共4页
病毒学课程是生物技术专业的一门主干课程,课程授课课时充裕,教学设计上结合本专业学生特点,在授课时根据授课内容尝试多样的教学方法,包括在传统的讲座式教学模式(LBL)基础上辅以讨论的讨论式LBL、以问题为基础的教学模式(PBL)及体验... 病毒学课程是生物技术专业的一门主干课程,课程授课课时充裕,教学设计上结合本专业学生特点,在授课时根据授课内容尝试多样的教学方法,包括在传统的讲座式教学模式(LBL)基础上辅以讨论的讨论式LBL、以问题为基础的教学模式(PBL)及体验式角色互换讲课模式,均取得良好的教学效果,并为学生获得扎实的基础理论知识和基本技能、综合分析解决问题的能力及良好的教学、科学素养奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 病毒学课程 生物技术 教学方法
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汉坦病毒S基因的分段表达及其表达产物的鉴定 被引量:20
8
作者 尹文 徐志凯 +2 位作者 阎岩 薛小平 王海涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期23-25,32,共4页
用含PRPL启动子的原核表达载体PGEX4T系统,构建了含汉坦病毒76118株S基因全长片段(1.3kb)及部分片段(1.1kb和0.7kb)的表达载体pGEX4THanS,并在大肠杆菌中分别进行了表达。用1... 用含PRPL启动子的原核表达载体PGEX4T系统,构建了含汉坦病毒76118株S基因全长片段(1.3kb)及部分片段(1.1kb和0.7kb)的表达载体pGEX4THanS,并在大肠杆菌中分别进行了表达。用18株具有不同特异性的抗汉坦病毒mAb,以ELISA夹心法对上述表达产物进行了检测。结果表明,重组基因全长片段的表达产物(NP)与其中13株抗汉坦病毒组特异性和Ⅰ型特异性NP的mAb均可发生反应;1.1kb基因片段的表达产物与上述mAb都不起反应;0.7kb基因片段的表达产物只与上述部分mAb发生反应。 展开更多
关键词 汉坦病毒 S基因 原核表达 核蛋白 单克隆抗体
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汉滩病毒M、S基因部分片段嵌合基因真核载体的构建与基因免疫 被引量:9
9
作者 张芳琳 徐志凯 +6 位作者 阎岩 罗雯 刘勇 吴兴安 白文涛 赵茜 王海涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期419-421,共3页
目的在本室前期工作的基础上,进一步进行汉滩病毒M基因G2片段与S基因0.7Kb片段嵌合基因基因免疫的研究。方法构建汉滩病毒76-118株M基因G2片段与S基因5′端700bp片段的嵌合基因真核表达载体pcDNA3.1-G2S0.7。用该质粒免疫Balb/c小鼠,并... 目的在本室前期工作的基础上,进一步进行汉滩病毒M基因G2片段与S基因0.7Kb片段嵌合基因基因免疫的研究。方法构建汉滩病毒76-118株M基因G2片段与S基因5′端700bp片段的嵌合基因真核表达载体pcDNA3.1-G2S0.7。用该质粒免疫Balb/c小鼠,并用ELISA法及淋巴细胞增殖实验,检测基因免疫后的免疫应答效果。结果限制性内切酶鉴定结果表明真核表达载体的构建正确。用pcDNA3.1-G2S0.7直接免疫小鼠,可诱导产生抗汉滩病毒核蛋白NP及糖蛋白GP特异性的抗体,抗体效价分别为1200及180。淋巴细胞增殖实验表明,嵌合基因免疫小鼠脾细胞对NP及GP的增殖指数,均明显高于对照组。结论汉滩病毒M基因G2片段及S基因0.7kb片段的嵌合基因,既可刺激机体产生特异性的抗汉滩病毒体液免疫应答,也可刺激机体产生特异性的细胞免疫应答,本研究为进一步进行汉滩病毒基因疫苗的研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 汉滩病毒 M基因 S基因 基因疫苗 体液免疫 细胞免疫
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检测抗人疱疹病毒6型IgG的间接免疫荧光试验的建立及其应用 被引量:12
10
作者 刘军连 徐志凯 +4 位作者 王红英 王德堂 张芳琳 杨乔欣 姚堃 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期181-182,共2页
目的 :建立检测血清中人疱疹病毒 6型 (HHV 6 )IgG的间接免疫荧光试验 (IFA)。方法 :用HHV 6国内分离株感染人脐带血单个核细胞制备抗原片 ,建立检测HHV 6IgG的IFA方法 ,并用于育龄期妇女血清流行病学调查。结果 :建立的IFA具有特异性。... 目的 :建立检测血清中人疱疹病毒 6型 (HHV 6 )IgG的间接免疫荧光试验 (IFA)。方法 :用HHV 6国内分离株感染人脐带血单个核细胞制备抗原片 ,建立检测HHV 6IgG的IFA方法 ,并用于育龄期妇女血清流行病学调查。结果 :建立的IFA具有特异性。对 116份育龄期妇女血清标本检测表明 ,HHV 6IgG的阳性率为 72 .4 % ,几何平均滴度 (GMT)为 1∶6 1;在孕妇和正常未孕妇女之间 ,以及不同孕期的孕妇之间 ,HHV 6IgG的阳性率和GMT均无差异 (P >0 .0 5 )。结论 :建立了具有特异性的IFA法 ,可用于对育龄妇女HHV 展开更多
关键词 人疱疹病毒6型 间接免疫荧光试验 IGG抗体 育龄期妇女 血清流行病学调查
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一种新的免疫球蛋白超家族成员PTA1的细胞分布及表达的研究 被引量:9
11
作者 田方 金伯泉 +3 位作者 姜绍谆 刘雪松 申立中 夏海滨 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1996年第4期53-57,共5页
PTA1分子是一种新的人类T细胞活化抗原,同时表达于血小板表面,最近基因克隆序列表明,PTA1分子属于免疫球蛋白超家族中一个新的成员。PTA1分子与杀伤性T淋巴细胞的分化密切相关,并参与血小板的凝集和活化。本文应用P... PTA1分子是一种新的人类T细胞活化抗原,同时表达于血小板表面,最近基因克隆序列表明,PTA1分子属于免疫球蛋白超家族中一个新的成员。PTA1分子与杀伤性T淋巴细胞的分化密切相关,并参与血小板的凝集和活化。本文应用PTA1单克隆抗体间接免疫荧光染色和流式细胞仪分析,对PTA1抗原在正常人外周血单个核细胞(PBMC)、人胎儿胸腺细胞及各种血液细胞系的分布及表达进行了较系统的观察。结果表明,正常人PBMC经PHA刺激后PTA1有较高水平表达,并与Tac抗原(CD25)表达具有良好的相关性;PMA刺激的胎儿胸腺细胞、PMA刺激的Jurkat细胞和T淋巴细胞杂交瘤细胞系47C7均有高水平的表达,而B淋巴细胞系和绝大多数髓样细胞系则不表达该抗原。此结果对于进一步研究PTA1分子的功能,以及对PTA1配体的鉴定具有重要的价值。 展开更多
关键词 活化 抗原 淋巴细胞 免疫球蛋白 超家族 PTA1
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结核分枝杆菌Ag85B基因的克隆及真核表达载体的构建 被引量:11
12
作者 范雄林 徐志凯 +3 位作者 白光春 李元 李别虎 薛莹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期314-316,共3页
目的构建以结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B基因为基础的核酸疫苗。方法采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Ra株基因组中,扩增出分泌蛋白Ag85B的成熟蛋白的编码基因 ,用限制性内切酶消化后,插入克隆载体 pUC19中。经酶切鉴定与序列测定证实后 ,... 目的构建以结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B基因为基础的核酸疫苗。方法采用聚合酶链反应从结核杆菌H37Ra株基因组中,扩增出分泌蛋白Ag85B的成熟蛋白的编码基因 ,用限制性内切酶消化后,插入克隆载体 pUC19中。经酶切鉴定与序列测定证实后 ,以亚克隆法构建于真核表达载体 pcDNA3的相应酶切位点。结果结核分枝杆菌H37Ra株Ag85B成熟蛋白的编码基因经序列测定证实 ,与Erdman株完全一致 ;用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切鉴定证实 ,克隆基因正确插入载体pcDNA3。结论以Ag85B成熟蛋白的编码基因为基础的真核表达载体的构建成功 ,为进一步研究其在结核病防治中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 AG85B 真核表达载体 基因克隆
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结核分枝杆菌Ag85B基因疫苗免疫保护作用的初步研究 被引量:8
13
作者 范雄林 徐志凯 +5 位作者 李元 李别虎 薛莹 柏银兰 白光春 贾向志 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期90-92,共3页
目的:研究编码结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的基因疫苗pTB30m和pTB30s对免疫动物的保护作用。方法:以基因疫苗pTB30m和pTB30s肌注免疫BALB/c小鼠。免疫完成6 wk后,用5×105 CFU的MTB H37Rv毒株经小鼠尾静脉攻击感染。同时用尼龙毛柱... 目的:研究编码结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的基因疫苗pTB30m和pTB30s对免疫动物的保护作用。方法:以基因疫苗pTB30m和pTB30s肌注免疫BALB/c小鼠。免疫完成6 wk后,用5×105 CFU的MTB H37Rv毒株经小鼠尾静脉攻击感染。同时用尼龙毛柱分离基因免疫BALB/c小鼠的T细胞,并以5×106 T细胞/只小鼠过继免疫正常BALB/c小鼠,立即用105 CFU的MTB毒株经小鼠尾静脉攻击感染。4 wk后分别计数脾脏中的细菌负荷。结果:与生理盐水对照组相比较,pTB30m及pTB30s质粒免疫组BALB/c小鼠脾脏中的细菌负荷均减少,分别为0.645(log10 CFU,P<0.01)和0.839(log10CFU,P<0.001);而空质粒对照组小鼠脾脏中的细菌负荷减少较少。经质粒pTB30m和pTB30s免疫的BALB/c小鼠的T细胞,过继免疫的正常BALB/c小鼠,对攻击感染的MTB H37Rv毒株在脾脏中的增殖具有部分抑制作用。结论:pTB30s免疫的BALB/c小鼠,对MTB H37 Rv毒株攻击的保护作用优于pTB30m质粒免疫,有望进一步用于结核病的防治研究。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 AG85B 基因疫苗 免疫保护作用
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结核分枝杆菌HSP65与IL-2融合蛋白的表达和纯化 被引量:6
14
作者 王丽梅 师长宏 +4 位作者 张海 薛莹 柏银兰 高辉 徐志凯 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期801-804,共4页
目的获得融合表达的结核分枝杆菌热休克蛋白65与人白细胞介素2的重组蛋白,为进一步研究其对结核疫苗的作用奠定基础。方法用PCR的方法分别从H37Rv DNA和质粒pGEM-Teasy-IL-2中扩增目的基因片段hsp65和IL-2,将各目的片段克隆至pMD18-T载... 目的获得融合表达的结核分枝杆菌热休克蛋白65与人白细胞介素2的重组蛋白,为进一步研究其对结核疫苗的作用奠定基础。方法用PCR的方法分别从H37Rv DNA和质粒pGEM-Teasy-IL-2中扩增目的基因片段hsp65和IL-2,将各目的片段克隆至pMD18-T载体中进行测序,将测序正确的目的基因片段分别经EcoRI和ClaI,ClaI和HindⅢ双酶切后亚克隆至原核表达载体pPro-EX HTa,转化大肠杆菌DH5α,挑选阳性克隆,经IPTG诱导后进行融合表达,并通过镍柱对融合蛋白进行纯化。结果PCR法扩增获得的各目的基因片段与GenBank报道的一致。构建的融合蛋白原核表达载体在大肠杆菌中表达后,经SDS-PAGE和Western-blot分析,在Mr 78000处有特异性的蛋白表达条带。用镍柱进行亲和层析纯化后得到了高纯度的HSP65-IL-2融合蛋白。结论成功的构建了结核分枝杆菌HSP65与人IL-2的融合表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达,有望为结核的预防提供有效的疫苗。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 热休克蛋白65 白细胞介素2 表达 纯化
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抗菌肽的研究进展 被引量:15
15
作者 尹文 徐晨 马戈甲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B03期136-138,共3页
关键词 抗菌肽 抗菌 抗病毒 抗肿瘤 药物开发
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羊布鲁氏菌BCSP31、OMP31、L7/L12基因的原核表达载体构建及表达 被引量:8
16
作者 司瑞 白文涛 +5 位作者 张芳琳 刘艳丽 胡刚 吴兴安 阎岩 徐志凯 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第11期961-964,共4页
目的构建羊布鲁氏菌外膜蛋白BCSP31、OMP31和L7/L12基因的重组表达质粒,并在原核系统中表达。方法根据羊布鲁氏菌M5株外膜蛋白BCSP31、OMP31和抗原L7/L12蛋白基因序列设计引物,分别扩增出大小约为1kb、730bp和380bp的目的基因片断,插入p... 目的构建羊布鲁氏菌外膜蛋白BCSP31、OMP31和L7/L12基因的重组表达质粒,并在原核系统中表达。方法根据羊布鲁氏菌M5株外膜蛋白BCSP31、OMP31和抗原L7/L12蛋白基因序列设计引物,分别扩增出大小约为1kb、730bp和380bp的目的基因片断,插入pGEM7Zf(+)中测序并进行分析。将3种基因片段亚克隆入pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,用SDS-PAGE及Western-blot进行分析鉴定。结果SDS-PAGE结果表明3个目的蛋白均以融合蛋白的方式成功表达,在相对分子量57kDa、49kDa、38kDa处有表达条带,经薄层扫描分析,目的蛋白分别占全菌蛋白的42%、36%、40%。Western-blot证实3种融合蛋白均能被布鲁氏菌免疫兔血清识别。结论成功构建了3种蛋白的表达载体并进行了高效表达,3种蛋白均具有良好的免疫原性。 展开更多
关键词 羊布鲁氏菌 BCSP31蛋白 OMP31蛋白 L7/L12蛋白 基因表达
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IgG Fab-BPI融合蛋白真核表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达 被引量:7
17
作者 马越云 马文煜 +3 位作者 于文彬 尹文 苏明权 丁振若 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期470-472,共3页
目的构建抗抗LPSFab-BPI真核表达载体,并在CHO细胞中表达。方法通过RT-PCR,获得广谱抗LPSmAbC3A2IgG的Fd和完整轻链LCcDNA片段。在分别构建了pcDNA3-Fd和pcDNA3-LC表达载体的基础上,将包括BPIN端抗LPS活性中心的180bpDNA片段,通过一段... 目的构建抗抗LPSFab-BPI真核表达载体,并在CHO细胞中表达。方法通过RT-PCR,获得广谱抗LPSmAbC3A2IgG的Fd和完整轻链LCcDNA片段。在分别构建了pcDNA3-Fd和pcDNA3-LC表达载体的基础上,将包括BPIN端抗LPS活性中心的180bpDNA片段,通过一段长16个氨基酸的linker连接于上述Fab表达载体中Fd基因的下游,构建成Fab-BPI融合蛋白FB真核表达载体。将pcDNA3-LC质粒中包括hCMV启动子、LC和BGHpolyA等序列在内的片段,插入到pcDNA3-Fd中hCMV启动子上游,从而构建成单质粒的Fab-BPI表达载体pcD-NA3-FB,转染真核细胞。结果序列测定表明,重组质粒构建正确。pcDNA3-FB转染CHO细胞后,经ELISA、免疫荧光和mR-NA鉴定表达成功,免疫印迹试验显示,与抗κ轻链和抗BPI抗体反应的蛋白区带的Mr均为60000左右。交叉反应试验证明,Fab和FB与多种革兰氏阴性菌的LPS有交叉反应性。结论成功地在CHO细胞中表达出了抗LPSFab-BPIFB融合蛋白。FB作为融合蛋白,集广泛交叉反应性和强大中和活性于一身,有可能成为更适于临床应用的新的抗LPS免疫制剂。 展开更多
关键词 LPS FAB 杀菌通透性增强蛋白 真核表达 IGG
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乙型脑炎病毒E蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达 被引量:5
18
作者 吴玉水 任君萍 +6 位作者 黄庆生 丁天兵 张伟 宋建华 朱忠勇 张红毅 马文煜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期130-131,135,共3页
目的 :用巴斯德毕赤酵母系统表达乙型脑炎病毒 (JEV)E蛋白。方法 :将JEVE蛋白基因亚克隆入真核表达载体 pPIC9K ,以电穿孔法转化酵母SMD116 8。用MD平板筛选重组子、G4 18筛选高拷贝转化子 ,经甲醇诱导表达后 ,SDS PAGE和免疫印迹分析... 目的 :用巴斯德毕赤酵母系统表达乙型脑炎病毒 (JEV)E蛋白。方法 :将JEVE蛋白基因亚克隆入真核表达载体 pPIC9K ,以电穿孔法转化酵母SMD116 8。用MD平板筛选重组子、G4 18筛选高拷贝转化子 ,经甲醇诱导表达后 ,SDS PAGE和免疫印迹分析表达产物。结果 :由于糖基化不同 ,所表达产物的相对分子质量 (Mr)约为 1130 0 0和 780 0 0 ,表达量约为5 0mg/L。结论 :在巴斯德比赤酵母中成功地表达了JEVE蛋白 。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 E蛋白 基因克隆 蛋白表达 巴斯德毕赤酵母 电穿孔法
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汉滩病毒囊膜糖蛋白G2与核蛋白氨基端在昆虫细胞中的融合表达 被引量:4
19
作者 刘勇 徐志凯 +4 位作者 张芳琳 罗雯 吴兴安 白文涛 胡刚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期215-217,共3页
目的 :在Bac to Bac杆状病毒表达系统中 ,融合表达汉滩病毒的囊膜糖蛋白G2与核蛋白氨基端。方法 :构建含有汉滩病毒G2S0 .7嵌合基因的表达载体 pFBDHTa G2S0 .7,并转化DH10Bac感受态菌。利用其含有的细菌Tn7转座系统 ,将嵌合基因重组至... 目的 :在Bac to Bac杆状病毒表达系统中 ,融合表达汉滩病毒的囊膜糖蛋白G2与核蛋白氨基端。方法 :构建含有汉滩病毒G2S0 .7嵌合基因的表达载体 pFBDHTa G2S0 .7,并转化DH10Bac感受态菌。利用其含有的细菌Tn7转座系统 ,将嵌合基因重组至杆状病毒穿梭质粒bacmid中 ,并筛选含有G2S0 .7嵌合基因的重组杆状病毒 ,在昆虫细胞中表达该融合蛋白。对表达产物用间接免疫荧光、ELISA和免疫印迹进行检测。结果 :构建了的含G2S0 .7嵌合基因的重组杆状病毒 ,感染昆虫细胞后 ,可表达相应大小的融合蛋白。该蛋白可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G2的特异性单克隆抗体 (mAb)所识别。结论 :利用杆状病毒表达系统 ,成功地表达同时具有核蛋白及糖蛋白G2生物学活性的融合蛋白G2S0 .7。 展开更多
关键词 汉滩病毒 杆状病毒 昆虫细胞 核蛋白 糖蛋白 融合表达
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抗迟缓爱德华菌单克隆抗体的制备及鉴定 被引量:7
20
作者 金晓航 黄威权 +3 位作者 夏永娟 李元 李别虎 张荣庆 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期168-168,共1页
关键词 迟缓爱德华菌 单克隆抗体 制备 鉴定
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