大鼠β细胞素蛋白的表达、纯化及生物学活性鉴定 被引量：1

1

作者 安家泽 宋振顺 +2 位作者 窦科峰 李开宗 韩骅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期284-286,共3页

目的:获得大量重组大鼠β细胞素并检测其活性。方法:用PCR法从大鼠肾组织中扩增534bp的β细胞素基因片段,并按读框克隆到原核表达载体pET28a(+)中。以构建的重组质粒pET28a-rBTC转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,在IPTG诱导下表达β细胞素蛋... 目的:获得大量重组大鼠β细胞素并检测其活性。方法:用PCR法从大鼠肾组织中扩增534bp的β细胞素基因片段,并按读框克隆到原核表达载体pET28a(+)中。以构建的重组质粒pET28a-rBTC转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,在IPTG诱导下表达β细胞素蛋白,表达产物用SDS-PAGE和Westernblot检测。采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。结果:经IPTG诱导后,在大肠杆菌中可表达相对分子质量Mr为20000的目的蛋白。目的蛋白主要以包涵体的形式表达;表达量约占菌体蛋白总量的20%～30%。表达的目的蛋白与抗His标签抗体具有良好的反应性。结论:大鼠β细胞素基因在PET表达系统中得到高效表达;蛋白复性后能有效地促进NIH3T3细胞的体外增殖。 展开更多

关键词 Β细胞素 基因克隆 表达 蛋白质纯化

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Notch信号通路与血管发育 被引量：4

2

作者 梁洁 韩骅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1225-1226,F0003,共3页

关键词 血管形成 NOTCH信号 血管发生

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树突状细胞与胃癌研究进展 被引量：6

3

作者 丰帆 徐光辉 +2 位作者 同李平 韩骅 张洪伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期99-101,共3页

胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤,治疗效果不理想,预后较差。树突状细胞(DC)是专职的抗原提呈细胞,其在抗肿瘤免疫中发挥了十分重要的作用。大量研究表明,胃癌组织内浸润的DC密度较低的胃癌患者5年生存率较低,预后较差。因此,探索以D... 胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤,治疗效果不理想,预后较差。树突状细胞(DC)是专职的抗原提呈细胞,其在抗肿瘤免疫中发挥了十分重要的作用。大量研究表明,胃癌组织内浸润的DC密度较低的胃癌患者5年生存率较低,预后较差。因此,探索以DC疫苗为基础的胃癌免疫治疗方法将具有十分重要的意义。动物实验证明DC疫苗在小鼠体内显著的抗肿瘤效果。在临床治疗中,DC疫苗在少数胃癌患者治疗中也取得了显著的临床效果。本文综述了DC与肿瘤免疫,与胃癌的诊断、进展、预后,以及与胃癌免疫治疗的研究现状。 展开更多

关键词 树突状细胞 胃癌 进展 预后 免疫治疗

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小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养及极化相关实验方法的建立 被引量：13

4

作者 任凯夕 赵诣林 +1 位作者 金超 韩骅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期310-313,共4页

目的建立小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养,并将其极化为M1和M2型巨噬细胞的方法。方法获取小鼠骨髓细胞,以GM-CSF诱导其中单核细胞向巨噬细胞分化发育,并辅以LPS和IFN-γ以及IL-4刺激巨噬细胞分别向M1型和M2型分化。采用流式细胞术、实时... 目的建立小鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养,并将其极化为M1和M2型巨噬细胞的方法。方法获取小鼠骨髓细胞,以GM-CSF诱导其中单核细胞向巨噬细胞分化发育,并辅以LPS和IFN-γ以及IL-4刺激巨噬细胞分别向M1型和M2型分化。采用流式细胞术、实时定量PCR和ELISA的实验检测极化后细胞内以及细胞培养上清中的标志性细胞因子如IL-12、IL-10、Arg1、Ym1、MMR等的表达情况。结果形态学观察发现骨髓获取的细胞经诱导分化后呈现巨噬细胞特征性的贴壁形态;流式细胞术行胞内染色表明,极化后的M1型与M2型巨噬细胞各自表达其特征性的细胞因子IL-12和Arg1;实时定量PCR和ELISA分别检测所培养细胞胞内以及培养上清中的细胞因子,结果表明所刺激的M1型巨噬细胞高表达IL-12、iNOS、TNF-α等炎性因子,而M2型巨噬细胞表达MMR、Arg1、Ym1等标志因子。结论建立了稳定的M1和M2型巨噬细胞体外培养体系。 展开更多

关键词 巨噬细胞 巨噬细胞极化 体外培养

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Notch信号调控巨噬细胞激活分子机制的研究进展 被引量：6

5

作者 高春辰 秦鸿雁 韩骅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期108-111,共4页

巨噬细胞是机体抗感染免疫的主要效应细胞,是一类具有异质性的细胞亚群。因其解剖位置和功能表型上的差异,巨噬细胞可分为两类:组织定居巨噬细胞和炎性巨噬细胞。其中,炎性巨噬细胞的产生是巨噬细胞激活的表现形式,也是抵抗病原体入侵... 巨噬细胞是机体抗感染免疫的主要效应细胞,是一类具有异质性的细胞亚群。因其解剖位置和功能表型上的差异,巨噬细胞可分为两类:组织定居巨噬细胞和炎性巨噬细胞。其中,炎性巨噬细胞的产生是巨噬细胞激活的表现形式,也是抵抗病原体入侵和重构组织稳态的一种免疫应答方式。巨噬细胞主要存在两种激活方式:经典激活和替代激活,激活后的巨噬细胞分别行使特定的功能。Notch信号通路可调控体内多种免疫细胞发育和功能,并通过多种分子机制调控巨噬细胞的激活。本文拟从巨噬细胞的类型、激活方式和Notch调控巨噬细胞激活的分子机制方面进行综述。 展开更多

关键词 巨噬细胞 NOTCH M1型巨噬细胞 M2型巨噬细胞

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HEK293T细胞表达的单核细胞趋化蛋白1促进巨噬细胞迁移 被引量：3

6

作者 王媛媛 赵俊龙 +4 位作者 刘娟 姜亚丽 韩骅 秦鸿雁 刘晓渭 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期149-152,共4页

目的构建巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)真核表达载体,转染人胚肾HEK293T细胞,验证其对巨噬细胞的趋化作用。方法小鼠基因组DNA作模板,用PCR法获得MCP-1启动子区基因片段,插入p FLAGCMV1载体。用双酶切法和测序... 目的构建巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)真核表达载体,转染人胚肾HEK293T细胞,验证其对巨噬细胞的趋化作用。方法小鼠基因组DNA作模板,用PCR法获得MCP-1启动子区基因片段,插入p FLAGCMV1载体。用双酶切法和测序鉴定正确后,将构建好的病毒载体转染HEK293T细胞,用Western blot法检测MCP-1的表达,用Transwell^(TM)实验检测转染后细胞分泌的MCP-1对巨噬细胞的趋化作用。结果重组载体酶切鉴定在相应位置有目的片段,转染单核细胞趋化因子重组载体后的HEK293T细胞有MCP-1表达,转染后HEK293T细胞分泌的MCP-1明显增加巨噬细胞的迁移。结论HEK293T细胞表达的MCP-1明显增强巨噬细胞的迁移。 展开更多

关键词 巨噬细胞 单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) 真核表达载体 载体构建

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肿瘤干细胞的研究现状 被引量：3

7

作者 王林 秦鸿雁 韩骅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第B03期107-109,共3页

关键词 肿瘤干细胞 进行性 血液系统肿瘤 干细胞分化 脑部肿瘤 乳腺癌 研究现状 自我更新能力 组织来源 多向分化

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成纤维细胞生长因子10在前列腺增生组织中的表达 被引量：3

8

作者 邱建新 邹炼 李荣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期595-597,共3页

目的　检测前列腺增生组织中成纤维细胞生长因子 10(FGF 10 )的表达 ,探讨其在前列腺增生中的作用。方法　应用半定量RT PCR技术和免疫组织化学方法 ,检测 2 0例前列腺增生组织中FGF 10的表达 ,并与正常的前列腺组织进行比较。结果　前... 目的　检测前列腺增生组织中成纤维细胞生长因子 10(FGF 10 )的表达 ,探讨其在前列腺增生中的作用。方法　应用半定量RT PCR技术和免疫组织化学方法 ,检测 2 0例前列腺增生组织中FGF 10的表达 ,并与正常的前列腺组织进行比较。结果　前列腺增生组织中FGF 10mRNA的水平高于正常前列腺组织 ;前列腺组织中均见FGF 10阳性染色 ,前列腺增生组织中表达显著高于正常的前列腺组织。结论　前列腺增生组织中FGF 10的表达高于正常前列腺组织 ,提示FGF 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子10 前列腺增生 RT-PCR 免疫组织化学 基因表达

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TAT蛋白转导域介导BCR/ABL融合蛋白通过小鼠血脑屏障的作用 被引量：1

9

作者 梁英民 蒋姗姗 +6 位作者 韩骅 孙强 刘利 郝淼旺 邓中荣 陈任安 刘强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期244-247,共4页

目的　探讨HIV - 1反式激活蛋白 (TAT)的蛋白转导结构域 (PTD)介导的BCR/ABL(TATPTD -BCR/ABL)融合蛋白通过血脑屏障的作用。方法　在大肠杆菌中表达PTD -BCR/ABL融合蛋白。将经Ni-NTA树脂亲和层析纯化的融合蛋白 ,经尾静脉注射小鼠体... 目的　探讨HIV - 1反式激活蛋白 (TAT)的蛋白转导结构域 (PTD)介导的BCR/ABL(TATPTD -BCR/ABL)融合蛋白通过血脑屏障的作用。方法　在大肠杆菌中表达PTD -BCR/ABL融合蛋白。将经Ni-NTA树脂亲和层析纯化的融合蛋白 ,经尾静脉注射小鼠体内 ,用免疫组织化学染色法 ,对小鼠脑组织细胞内的PTD -BCR/ABL融合蛋白进行检测。结果　①表达和纯化了相对分子质量 (Mr)为 2 3× 10 3 的PTD -BCR/ABL融合蛋白 ;②将其经静脉注射到小鼠体内 ,在小鼠脑组织细胞中可检测到PTD -BCR/ABL融合蛋白。结论　PTD可在体内介导较大Mr的融合蛋白通过血脑屏障 。 展开更多

关键词 蛋白转导 融合蛋白 血脑屏障 小鼠

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兔BK通道β亚基多克隆抗血清的制备 被引量：1

10

作者 王亚蓉 魏经国 +4 位作者 孙强 马克军 张孝勇 张艳霞 韩骅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期375-378,共4页

目的:用小鼠制备抗兔BK通道β亚基的抗血清。方法:采用RT-PCR扩增编码兔BK通道β亚基胞内段的基因。在大肠杆菌中表达GST-β亚基融合蛋白。以从PAGE凝胶上切下的融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗血清。用ELISA和Westernblot鉴定抗血... 目的:用小鼠制备抗兔BK通道β亚基的抗血清。方法:采用RT-PCR扩增编码兔BK通道β亚基胞内段的基因。在大肠杆菌中表达GST-β亚基融合蛋白。以从PAGE凝胶上切下的融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗血清。用ELISA和Westernblot鉴定抗血清的特异性。结果:用RT-PCR扩增出约300bp的兔BK通道基因。序列分析显示,扩增的序列与已发布的新西兰大白兔骨骼肌BK通道的序列完全一致。在E.coliDH5α成功地表达Mr约为37000GST-β亚基融合蛋白。ELISA和Westernblot检测证明,针对GST-β亚基融合蛋白的抗血清,不仅可特异性地识别GST-β,也可识别源于兔组织的β蛋白。抗血清的最高滴度达1∶128000。结论:克隆了编码兔BK通道β亚基胞内段的基因,并成功地获得可特异性识别新西兰大白兔BK通道β亚基的高滴度抗血清,为BK通道的进一步研究提供了物质基础。 展开更多

关键词 BK通道 抗体

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肝细胞特异性杀伤载体的构建和应用

11

作者 高春辰 赵俊龙 +4 位作者 韩俊 李东东 赵高炀 韩骅 秦鸿雁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期491-495,共5页

目的间充质干细胞(MSC)有重要的免疫调节和组织再生作用,但其治疗肝损伤的机制尚不完全清楚,既可能通过旁分泌因子调节炎症,也可直接转分化为肝细胞。为明确这两种机制,拟构建巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的膜定位绿色荧光蛋白(GFP)与白... 目的间充质干细胞(MSC)有重要的免疫调节和组织再生作用,但其治疗肝损伤的机制尚不完全清楚,既可能通过旁分泌因子调节炎症,也可直接转分化为肝细胞。为明确这两种机制,拟构建巨细胞病毒(CMV)启动子驱动的膜定位绿色荧光蛋白(GFP)与白蛋白启动子调控的PE40毒素的共表达质粒,以期杀伤转染MSC中向肝细胞转分化的细胞。方法用PCR获得GFP以及DLL1(Delta-like 1)跨膜区基因片段,融合成膜定位GFP基因并插入pFlag-CMV-1载体。将白蛋白基因启动子和PE40基因片段插入已构建好的膜定位GFP序列下游,构建真核表达载体,荧光显微镜检测GFP的表达。应用可表达白蛋白的人正常肝脏细胞检测该载体对肝细胞的杀伤。结果成功构建肝细胞特异性杀伤载体,该载体转染后对正常肝脏细胞具有杀伤作用,提示该载体可用于探索MSC治疗肝损伤的机制。结论成功构建能特异性杀伤肝细胞的载体。 展开更多

关键词 肝细胞 绿色荧光蛋白 PE40毒素 载体构建

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抗人黑色素瘤嵌合抗体真核表达载体的构建与表达

12

作者 冯蕾 韩骅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期247-250,共4页

目的:构建嵌合型抗人黑色素瘤抗体的真核表达载体,并实现真核表达。方法:从3株杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的可变区基因,插入含有抗人Tac抗原信号肽以及人免疫球蛋白κ轻链恒定区基因和γ1重链恒定区基因的真核表达载体pMH -CA中,转染... 目的:构建嵌合型抗人黑色素瘤抗体的真核表达载体,并实现真核表达。方法:从3株杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的可变区基因,插入含有抗人Tac抗原信号肽以及人免疫球蛋白κ轻链恒定区基因和γ1重链恒定区基因的真核表达载体pMH -CA中,转染2 93T细胞,进行嵌合抗体表达,并用RT- PCR、ELISA、Westernblot免疫印迹等对抗体表达鉴定。结果:成功构建了抗人黑色素瘤人 鼠嵌合抗体,并实现其真核表达。RT- PCR证实了该抗体在mRNA水平上的表达,ELISA和West ernblot证实了抗人黑色素瘤人 鼠嵌合抗体的表达。结论:成功表达了抗人黑色素瘤人-鼠嵌合抗体。 展开更多

关键词 嵌合抗体 黑色素瘤 基因工程

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组织定居巨噬细胞起源及稳态维持和功能研究进展 被引量：1

13

作者 陶欢 白健 +2 位作者 高春辰 韩骅 秦鸿雁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期133-135,139,共4页

组织定居巨噬细胞广泛存在于各种组织器官中,具有高度的异质性。组织定居巨噬细胞参与胚胎及个体的生长发育,并介导炎症反应和组织损伤修复,在维持组织稳态中具有十分重要的作用。近年来借助体内遗传示踪技术,组织定居细胞的来源,维持... 组织定居巨噬细胞广泛存在于各种组织器官中,具有高度的异质性。组织定居巨噬细胞参与胚胎及个体的生长发育,并介导炎症反应和组织损伤修复,在维持组织稳态中具有十分重要的作用。近年来借助体内遗传示踪技术,组织定居细胞的来源,维持稳态机制以及组织定居巨噬细胞与疾病关系的研究均有了突破性进展,本文拟从组织定居巨噬细胞的起源,稳态维持及其生理病理功能等最新研究进展进行综述,以丰富我们对组织定居巨噬细胞维持机体稳态机制的理解,并探索以组织定居巨噬细胞为靶点治疗相关疾病的新策略。 展开更多

关键词 组织定居巨噬细胞 起源 稳态维持 功能 疾病 综述

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巨噬细胞功能、活化和起源异质性在肝纤维化中作用的研究进展 被引量：1

14

作者 白健 师伟 秦鸿雁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期114-118,共5页

肝巨噬细胞在肝纤维化的损伤和修复阶段发挥着不同的作用,具有功能异质性。早期研究表明肝巨噬细胞的这种功能异质性可能与其具有不同的活化模式密切相关。然而,近年来关于巨噬细胞起源的研究打破了免疫学教科书中传统理论:即成体组织... 肝巨噬细胞在肝纤维化的损伤和修复阶段发挥着不同的作用,具有功能异质性。早期研究表明肝巨噬细胞的这种功能异质性可能与其具有不同的活化模式密切相关。然而,近年来关于巨噬细胞起源的研究打破了免疫学教科书中传统理论:即成体组织定居巨噬细胞来源于胚胎时期的卵黄囊。因而肝巨噬细胞的功能异质性是否和其起源相关,是目前巨噬细胞领域研究的热点。本文拟从巨噬细胞功能、活化和起源异质性,结合不同肝纤维化模型中巨噬细胞作用的研究进展和靶向巨噬细胞治疗的应用三个方面进行总结,有望为临床开展肝纤维化的细胞治疗提供新思路和新策略。 展开更多

关键词 巨噬细胞 异质性 肝纤维化 治疗 综述

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