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迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因的构建、表达及鉴定 被引量:2
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作者 秦红 金晓航 +1 位作者 黄威权 刘玉林 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期689-693,共5页
目的构建、表达及鉴定迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因。方法采用RT-PCR方法从分泌迟缓爱德华菌独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1E11)中克隆出VH和VL可变区基因,再通过重叠延伸拼接PCR方法在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser... 目的构建、表达及鉴定迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因。方法采用RT-PCR方法从分泌迟缓爱德华菌独特型单克隆抗体的杂交瘤细胞株(1E11)中克隆出VH和VL可变区基因,再通过重叠延伸拼接PCR方法在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建单链抗体基因;将其克隆至表达载体pET-28a并在大肠杆菌中表达,表达产物纯化后,用SDS-PAGE、Western blot及ELASA进行鉴定。结果迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因scFv在BL21(DE3)菌中获得表达,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经过溶解包涵体、纯化和体外复性,获得了高纯度的单链抗体片段,重组蛋白的分子质量为27 ku。ELASA分析结果证实迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因scFv与原代抗体一样,具有较高的抗原亲和力。结论成功构建了迟缓爱德华菌抗独特型单链抗体基因scFv,为进一步制备迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 迟缓爱德华菌 抗独特型 单链抗体
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