肝癌^(188)Re放射免疫治疗的实验研究 被引量：5

1

作者 边惠洁 陈志南 +1 位作者 邓敬兰 娄超 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期461-464,共4页

目的：研究新型核素188Re标记的抗人肝癌单抗片段HAb18 F（ab′）2对荷肝癌移植瘤裸鼠的抑瘤效应。方法：建立荷人肝癌移植瘤裸鼠模型。选择肿瘤体积为（30～150）mm3的动物随机分5组，其中3组分别尾静脉注射188Re－HAb18 F（ab′）2 3... 目的：研究新型核素188Re标记的抗人肝癌单抗片段HAb18 F（ab′）2对荷肝癌移植瘤裸鼠的抑瘤效应。方法：建立荷人肝癌移植瘤裸鼠模型。选择肿瘤体积为（30～150）mm3的动物随机分5组，其中3组分别尾静脉注射188Re－HAb18 F（ab′）2 3．7、11．1和18．5MBq，给药2次，观察动物体重和肿瘤体积变化。处死动物，摘取瘤体，石蜡包埋，进行HE染色。结果：3组剂量均有不同程度的抑瘤作用，且随着剂量的增加，抑瘤效应增加。低剂量组和中剂量组动物平均体重和生理盐水对照组相比无显著性差异(P＞0．05)。组织学检查表明，随着剂量的增加，肿瘤细胞核形态发生明显的变化，从凝固、核碎裂直至溶解。结论：188Re－HAb18 F（ab′）2是一种新型核素的肝癌导向治疗剂，具有潜在的临床应用前景，本文的研究可为其过渡到临床研究提供参考依据。 展开更多

关键词 肝癌 放射免疫治疗 ^188RE 裸鼠

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PMA诱导的THP-1细胞分化过程中MMP-9及MMP-2的表达与细胞侵蚀性的关系 被引量：3

2

作者 周筠 朱平 +4 位作者 蒋建利 陈志南 姚西英 贾俊峰 樊春梅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期256-257,260,共3页

　目的: 应用单核细胞THP -1株建立单核细胞向巨噬细胞分化的体外模型, 并探讨THP- 1细胞分化过程中基质金属蛋白酶 9(MMP -9)及基质金属蛋白酶 2 (MMP -2)的表达与细胞侵蚀性的关系以及巨噬细胞在类风湿关节炎 (RA)发病机制中的作用。... 　目的: 应用单核细胞THP -1株建立单核细胞向巨噬细胞分化的体外模型, 并探讨THP- 1细胞分化过程中基质金属蛋白酶 9(MMP -9)及基质金属蛋白酶 2 (MMP -2)的表达与细胞侵蚀性的关系以及巨噬细胞在类风湿关节炎 (RA)发病机制中的作用。方法: 用乙酸肉豆蔻佛波酯 (PMA) 诱导THP- 1细胞向成熟的单核 巨噬细胞分化后, 采用倒置显微镜观察分化细胞的形态学变化。用流式细胞术测定细胞表面特异性抗原CD14的表达。采用明胶酶谱 (gelatin- zymogram)分析法测定分化前后THP- 1细胞中MMP -9和MMP- 2的表达。采用侵蚀性小室 (BoydenChamber -Matrigel人工重组基底膜 )法, 观察分化前后的THP- 1细胞侵蚀性的变化。结果: THP- 1细胞向单核 巨噬细胞分化过程中, 细胞由分散、悬浮转变为黏附、贴壁, 且出现CD14的高表达。分化后的THP- 1细胞中MMP -9和MMP- 2的表达明显增多, 侵蚀性明显增强。结论:建立了THP- 1单核细胞的体外分化模型。该细胞在分化过程中, MMP- 9和MMP -2的表达增多、侵蚀性增强, 为巨噬细胞在RA发病机制的作用提供了一定的实验依据。 展开更多

关键词 单核细胞 乙酸肉豆蔻佛波醇 细胞分化 基质金属蛋白酶 侵蚀性

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细胞亲环素A促单核细胞THP-1钙离子的运动及细胞黏附能力

3

作者 杨勇 朱平 +3 位作者 丁进 樊春梅 王彦宏 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期471-472,共2页

目的观察细胞亲环素A(CypA)对单核细胞THP-1细胞胞内钙离子运动及细胞与细胞外基质黏附能力的影响。方法乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)诱导分化THP-1细胞,通过激光共聚焦及结晶紫染色法检测CypA刺激THP-1细胞后细胞内游离钙离子浓度的变化及细... 目的观察细胞亲环素A(CypA)对单核细胞THP-1细胞胞内钙离子运动及细胞与细胞外基质黏附能力的影响。方法乙酸肉豆蔻佛波酯(PMA)诱导分化THP-1细胞,通过激光共聚焦及结晶紫染色法检测CypA刺激THP-1细胞后细胞内游离钙离子浓度的变化及细胞与细胞外基质黏附能力的变化,同时使用CsA、CD147分子拮抗剂AP-9作用细胞,观察CD147分子是否参与了CypA这一调节作用。结果CypA显著促进分化前及分化后的THP-1细胞胞内游离钙离子的运动,同时增强了细胞与细胞外基质的黏附能力(P<0.05),CsA、CD147分子拮抗剂AP-9则可以阻断CypA对细胞钙离子及黏附能力的调节作用。结论CypA通过CD147分子促进细胞钙离子的运动及细胞黏附能力,提示在类风湿关节炎(RA)中CypA可以增强单核/巨噬细胞与滑膜及软骨面的结合及侵袭能力,促进了关节炎的发生发展。 展开更多

关键词 细胞亲环素A CYPA CD147 单核细胞 黏附

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不同免疫方案制备抗HAb18G/CD147胞外区多克隆抗血清的比较 被引量：5

4

作者 张思河 杨向民 +1 位作者 邢金良 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期65-68,共4页

　目的: 制备针对肝癌相关抗原HAb18G/CD147胞外区不同表位的抗血清, 比较不同免疫方案的免疫效果。方法: 以原核表达的GST -HAb18GEF融合蛋白、重组真核表达质粒pcDNA3 /HAb18G及HCC细胞为免疫原, 分别采用蛋白常规免疫、DNA肌肉免疫及... 　目的: 制备针对肝癌相关抗原HAb18G/CD147胞外区不同表位的抗血清, 比较不同免疫方案的免疫效果。方法: 以原核表达的GST -HAb18GEF融合蛋白、重组真核表达质粒pcDNA3 /HAb18G及HCC细胞为免疫原, 分别采用蛋白常规免疫、DNA肌肉免疫及pcDNA3 /HAb18G -HCCbooster(DNA -cellbooster)免疫接种BALB/c小鼠。采用间接ELISA和细胞ELISA, 同时测定免疫血清中抗变性和天然HAb18GEFIgG抗体的滴度和Ig亚类。用Westernblot检测各免疫方案制备的抗血清, 与变性HAb18GEF抗原结合的特异性。用免疫荧光法验证DNA- cellbooster免疫接种法制备的抗血清, 与细胞膜上天然HAb18G抗原的结合特异性。结果:以GST- HAb18GEF常规免疫后, 可诱导高滴度的IgG1抗体产生, 但针对的多为HAb18GEF的变性或线性表位; 以pcD -NA3 /HAb18G肌肉免疫后, 可诱导针对其天然表位的IgG2a抗体产生, 但滴度较低; 以DNA -cellbooster免疫后, 可诱导中等滴度、针对其天然表位的IgG2a和IgG1抗体产生。结论: 不同免疫方案可诱导针对HAb18GEF不同表位、不同滴度的多克隆抗血清, 为淘筛针对其不同表位的多样性抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 HAB18G/CD147 免疫方案 DNA-cell BOOSTER 抗体滴度 Ig亚类

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肝癌相关抗原HAb18G真核表达载体的构建及表达 被引量：6

5

作者 邢金良 陈志南 +2 位作者 黄宝成 王文勇 王贤辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期342-345,共4页

目的在真核细胞中高效表达肝癌相关抗原HAb18G。方法构建含有肝癌相关抗原HAb18G基因的真核表达载体 ,并经限制性酶切及部分序列分析证明插入是否正确。用阳离子脂质体介导转染COS 7细胞和CHO细胞 ,并分别进行瞬时及稳定表达 ;通过间接... 目的在真核细胞中高效表达肝癌相关抗原HAb18G。方法构建含有肝癌相关抗原HAb18G基因的真核表达载体 ,并经限制性酶切及部分序列分析证明插入是否正确。用阳离子脂质体介导转染COS 7细胞和CHO细胞 ,并分别进行瞬时及稳定表达 ;通过间接免疫荧光染色和流式细胞仪检测蛋白的表达情况。结果成功地构建了真核表达载体 pcDNA 3/HAb18G ,并经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确。间接免疫荧光染色证实 ,HAb18G高效表达于转染细胞的胞膜上。流式细胞仪分析显示 ,COS 7细胞的转染率约为7.5 % ,平均荧光强度为7.36 ,从CHO细胞获得的单个阳性克隆的平均荧光强度为2.17。结论以上结果为大量获得表达的HAb18G蛋白分子用于其生物学功能的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 肝癌 膜蛋白 表达载体 基因转染 肝癌相关抗原

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用导向选择链更替技术建立抗肝癌抗原HAb18G的人源性Fab基因库 被引量：2

6

作者 包国强 马庆久 +2 位作者 邢金良 杨向民 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期437-440,共4页

目的 :在嵌合HAb18 Fab抗体的基础上 ,利用载体pComb3X ,采用导向选择链更替技术建立全人源性Fab基因库。方法 :用RT PCR自肝癌患者外周血单个核细胞 (PBMC)中 ,扩增全套人抗体Fd基因片段和L链基因。首先 ,将Fd基因克隆入已含嵌合L链基... 目的 :在嵌合HAb18 Fab抗体的基础上 ,利用载体pComb3X ,采用导向选择链更替技术建立全人源性Fab基因库。方法 :用RT PCR自肝癌患者外周血单个核细胞 (PBMC)中 ,扩增全套人抗体Fd基因片段和L链基因。首先 ,将Fd基因克隆入已含嵌合L链基因的展示载体pComb3X/CL中 ,建立人 -鼠杂合的Fab基因库 ,以原核表达的非融合HAb18G的胞外区片段为抗原 ,筛选杂合的Fab基因 ,以得到人Fd基因。然后应用筛选出的Fd基因与人L链基因库配对 ,建立全为人Fab的基因库 ,并筛选全人Fab基因。将IPTG诱导的表达菌裂解 ,取其上清对pⅢ Fab融合蛋白的功能进行分析 ,并对其编码基因进行测序。结果 :建立了库容为 2× 10 7的杂合Fab基因库 ,经 6轮筛选后得到 7株杂合Fab基因。利用筛选的人Fd基因建立了库容为 0 .8× 10 7的全人Fab基因库 ,经 4轮筛选得到 2株亲和力较高、特异性强的人Fab基因。测序结果显示 ,2株Fab基因具有相同的Fd基因序列 ,与亲本抗体同属IgG2亚类 ;L链基因为κ型 ,可变区均属于Vκ3家族。结论 :利用导向选择链更替技术 ,筛选出特异性较强、完全人源化的抗肝癌抗原HAb18G的Fab抗体 ,为进一步的工作打下了基础。 展开更多

关键词 抗体基因库 人源化 肝癌 pComb3X 导向选择 链更替

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抗迟缓爱德华菌独特型单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列分析 被引量：2

7

作者 秦红 黄威权 +2 位作者 杨向民 温伟红 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期155-156,共2页

目的克隆并分析迟缓爱德华菌抗独特型单克隆抗体(mAb)VH基因。方法从分泌迟缓爱德华菌抗独特型mAb的杂交瘤细胞株(1E11)中提取总RNA,利用RT-PCR技术,扩增迟缓爱德华菌抗独特型抗体VH基因,并将其克隆到PBS-Tvector中进行序列分析。结果V... 目的克隆并分析迟缓爱德华菌抗独特型单克隆抗体(mAb)VH基因。方法从分泌迟缓爱德华菌抗独特型mAb的杂交瘤细胞株(1E11)中提取总RNA,利用RT-PCR技术,扩增迟缓爱德华菌抗独特型抗体VH基因,并将其克隆到PBS-Tvector中进行序列分析。结果VH基因的全长序列为339bp,编码113个氨基酸。通过NCBI/BLAST/N和IMGT数据库(Lefrance,2001)分析表明,VH基因符合小鼠IgGV区基因的特征含有4个框架区(FR),3个抗原互补决定区(CDR)及两个抗体特征性的半胱氨酸。结论成功地克隆了迟缓爱德华菌抗独特型mAbVH基因,为进一步构建迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 迟缓爱德华菌 抗独特型抗体 基因克隆 序列分析

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抗人肝癌单克隆抗体嵌合Fab在巴氏毕赤酵母中的高效分泌表达 被引量：1

8

作者 董红霖 邢金良 +4 位作者 安家泽 杨向民 姚西英 窦科峰 陈志南 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期342-346,共5页

目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段。方法:将抗人肝癌mAbcFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPI... 目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段。方法:将抗人肝癌mAbcFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd并测序鉴定。将重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418和Zeocin筛选高拷贝的转化子及鉴定Mut表型后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达。结果:成功地表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab,表达水平为26mg/L。Westernblot鉴定证实,表达产物具有良好的与HAb18结合的活性和特异性。结论:cFab/HAb18在巴氏毕赤酵母获得表达,为对其进一步大规模的生产和临床应用奠定了基础。 展开更多

关键词 肝癌 单克隆抗体 cFab 毕赤酵母 分泌表达

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抗γ-精浆蛋白人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库的构建及导向筛选 被引量：1

9

作者 张青 张思河 +3 位作者 苏明权 杨洁 沈建军 郝晓柯 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第1期32-36,共5页

目的:建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库,筛选抗γ-精浆蛋白(γ-sm)人源性抗体轻链。方法:PCR扩增前列腺癌患者外周血淋巴细胞人抗体全套轻链基因,克隆人含鼠源抗γ-sm抗体Fd基因的pComb3X噬粒中,建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库。通过稀释滴... 目的:建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库,筛选抗γ-精浆蛋白(γ-sm)人源性抗体轻链。方法:PCR扩增前列腺癌患者外周血淋巴细胞人抗体全套轻链基因,克隆人含鼠源抗γ-sm抗体Fd基因的pComb3X噬粒中,建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库。通过稀释滴定、限制性酶切等分别对库容、基因重组率和多样性进行鉴定。以M13K07辅助噬菌体超感染,利用纯化的γ-sm对杂合库进行筛选,对筛出的阳性克隆进行功能检测。结果:构建了库容量为1．2×107CFU、重组率为90％、多样性好的人-鼠杂合噬菌体抗体库。ELISA检测出2个强阳性克隆,Western blot确证为抗γ--sm的人-鼠杂合Fab,竞争ELISA显示其表观亲和力约为亲本鼠抗体亲和力的71．8％。DNA测序显示筛到的人源轻链可变区基因属IGKV4-1*01胚系家族。结论:成功得到人源性抗γ-sm抗体轻链,为进一步获得全人源化抗体奠定了基础。 展开更多

关键词 噬菌体抗体库 导向筛选 前列腺癌 人源化

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抗鳗弧菌独特型单克隆抗体重链可变区基因的克隆及序列测定 被引量：1

10

作者 夏永娟 黄宝成 +2 位作者 温伟红 黄威权 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期176-177,共2页

关键词 鱼鳗弧菌感染 单克隆抗体 重链可变区 基因克隆 基因测序

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抗人肝癌mAb HAb18F(ab′)_2半成品的制备与质量控制 被引量：1

11

作者 余晓玲 米力 +1 位作者 陈志南 冯强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期161-163,共3页

目的制备符合人用标准的抗人肝癌mAbHAb18F(ab′)2 片段。方法用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体 ,然后在快速蛋白液相色谱(FPLC)上用Phenyl SepharoseHP疏水柱纯化并进行质检。结果经Phenyl SepharoseHP疏水柱纯化后 ,F(ab′)2 片... 目的制备符合人用标准的抗人肝癌mAbHAb18F(ab′)2 片段。方法用胃蛋白酶消化经硫酸铵盐析的腹水抗体 ,然后在快速蛋白液相色谱(FPLC)上用Phenyl SepharoseHP疏水柱纯化并进行质检。结果经Phenyl SepharoseHP疏水柱纯化后 ,F(ab′)2 片段的纯度可达98.8% ;回收率大于50 % ;免疫活性为1∶8000;细菌、热原质检测均呈阴性。结论本制备工艺周期短、易于质控 ,适宜进行中试放大及半成品生产。 展开更多

关键词 抗人肝癌 单克隆抗体 片段抗体 制备 质量控制

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以鼠源重链Fd片段为模板导向筛选人源性抗γ-精浆蛋白抗体轻链 被引量：1

12

作者 张青 张思河 +3 位作者 易静 苏明权 包国强 郝晓柯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期196-199,共4页

目的:以鼠源抗γ-sm抗体重链Fd片段为模板,筛选人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链。方法:利用RT-PCR从前列腺癌患者外周血淋巴细胞扩增出全套的人抗体轻链基因,克隆入含鼠源性抗γ-sm抗体重链Fd片段的噬粒载体pComb3X/mFd中,电转化大肠杆菌... 目的:以鼠源抗γ-sm抗体重链Fd片段为模板,筛选人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链。方法:利用RT-PCR从前列腺癌患者外周血淋巴细胞扩增出全套的人抗体轻链基因,克隆入含鼠源性抗γ-sm抗体重链Fd片段的噬粒载体pComb3X/mFd中,电转化大肠杆菌XL1-Blue后建立人-鼠杂合的Fab抗体库。通过稀释滴定、限制性酶切和随机测序,对所建杂合库的库容、重组率和多样性分别进行鉴定,以M13K07辅助噬菌体超感染,利用亲和纯化的γ-sm为抗原,对挽救展示的噬菌体抗体库进行3轮淘筛和克隆鉴定。最后对筛选出的杂合抗体进行初步的功能检测。结果:构建成功1.2×107CFU、重组率为90%、多样性好的杂合人-鼠噬菌体抗体库。利用纯化的γ-sm3轮亲和淘筛后,5个克隆成功诱导表达特异性的pIII融合抗体。ELISA进一步检测表明,5个克隆均呈特异性阳性反应,其中2个克隆亲和力较高,测序显示其所含轻链基因序列完全相同,可变区来源于IGKV4-101胚系基因家族。结论:利用鼠源Fd片段为模板,导向筛选杂合噬菌体库,成功筛选到人源性抗人γ-精浆蛋白抗体轻链。 展开更多

关键词 噬菌体抗体库 导向筛选 前列腺癌

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嵌合轻链为模板导向筛选人源性抗肝癌抗体重链Fd片段

13

作者 包国强 马庆久 +2 位作者 邢金良 杨向民 陈志南 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第3期161-165,共5页

目的:利用噬菌体抗体库和导向选择技术,以抗HAb18G嵌合抗体轻链为模板,筛选人源性抗肝癌抗体Fd片段。 方法:利用RT-PCR自肝癌患者外周血淋巴细胞中扩增全套人抗体重链Fd基因片段,克隆入含嵌合L链的展示载体 pComb3X,建立人-鼠杂合Fab噬... 目的:利用噬菌体抗体库和导向选择技术,以抗HAb18G嵌合抗体轻链为模板,筛选人源性抗肝癌抗体Fd片段。 方法:利用RT-PCR自肝癌患者外周血淋巴细胞中扩增全套人抗体重链Fd基因片段,克隆入含嵌合L链的展示载体 pComb3X,建立人-鼠杂合Fab噬菌体抗体库。然后,利用大肠杆菌表达的非融合HAb18GE为抗原进行亲和筛选,利用pⅢ 融合抗体的形式进行克隆鉴定,并对筛选出的杂合抗体进行初步的功能检测。结果:构建成功库容量为2×107PFU的杂合 人-鼠噬菌体抗体库,利用非融合表达的HAb18GE进行6轮筛选。ELISA及流式细胞仪检测,其中7个克隆呈特异性阳性反 应。其中克隆AP6-2和AP6-7亲和力较高,测序显示其基因序列相同,且与亲本抗体恒定区序列相同,属IgG2亚类,可变区属 VH3家族。结论:通过本实验,利用嵌合轻链为模板,进行Fd片段替换,成功筛选到人源性抗体Fd片段。 展开更多

关键词 噬菌体抗体库 杂合 轻链 肝癌 重链 HA 筛选 人源性 片段 嵌合

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抗人HAb18G分子单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中的分泌表达

14

作者 邢金良 杨向民 +2 位作者 王永庆 姚西英 陈志南 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期479-482,共4页

目的 :构建抗人HAb18G分子单链抗体基因 ,并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法 :通过连接肽 (Gly4Ser) 3基因序列将已成功克隆的抗人肝癌单抗HAb18轻、重链可变区基因拼接成单链抗体 (ScFv)基因 ,并在 5′和 3′端引入相应的酶切位点 ,克... 目的 :构建抗人HAb18G分子单链抗体基因 ,并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法 :通过连接肽 (Gly4Ser) 3基因序列将已成功克隆的抗人肝癌单抗HAb18轻、重链可变区基因拼接成单链抗体 (ScFv)基因 ,并在 5′和 3′端引入相应的酶切位点 ,克隆至改造的分泌性表达载体pCANTAB 5His之中 ,转化到E coliHB2 15 1中进行诱导表达。亲和层析纯化表达蛋白后 ,以SDS PAGE电泳、Westernblot及ELISA等方法分析检测表达产物。结果 :经限制性酶切鉴定及DNA测序分析 ,证实基因构建正确。SDS PAGE电泳和Westernblot分析表明ScFv基因在大肠杆菌中成功表达。表达产物的相对分子质量 (Mr)为 31kD ,与理论预期值相符 ,并且可与相应的抗原特异结合。结论 :成功实现了抗人HAb18G分子单链抗体的原核分泌表达 ,为其在人肝癌诊治中的进一步应用奠定了基础。 展开更多

关键词 抗人HAbl8G分子 单链抗体 基因 大肠杆菌 分泌表达

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天然溶瘤新城疫病毒Italien株HN基因真核表达载体的构建和表达 被引量：1

15

作者 张华 边惠洁 +3 位作者 尉丁 李亚琳 杨滨 陈志南 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期100-103,共4页

目的构建天然溶瘤型新城疫病毒(NDV)Italien株血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的真核表达载体并进行产物表达。方法采用RT-PCR法从病毒RNA中克隆HNcDNA,并构建HN的真核表达载体pcDNA3.1-HN,脂质体法转染CHO-K1,G418筛选稳定表达克隆。用Weste... 目的构建天然溶瘤型新城疫病毒(NDV)Italien株血凝素-神经氨酸酶(HN)基因的真核表达载体并进行产物表达。方法采用RT-PCR法从病毒RNA中克隆HNcDNA,并构建HN的真核表达载体pcDNA3.1-HN,脂质体法转染CHO-K1,G418筛选稳定表达克隆。用Westernblot、免疫荧光法检测HN蛋白的表达。结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析,证实真核表达载体pcDNA3.1-HN构建正确。Westernblot和免疫荧光分析表明HN基因在CHO-K1中成功表达。结论天然溶瘤型NDVItalien株的HNcDNA被成功克隆,所构建的真核表达载体pcDNA3.1-HN可以在CHO-K1细胞中稳定表达。 展开更多

关键词 新城疫病毒 血凝素-神经氨酸酶基因 转染 基因表达

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HAb18G/CD147真核荧光蛋白的表达及鉴定

16

作者 库晓明 田蓉 +4 位作者 杨向民 李郁 谬成功 姚西英 陈志南 《科学技术与工程》 2006年第14期2024-2027,共4页

构建肝癌相关抗原HAb18G/CD147全长及缺失片段E51(第22—50位氨基酸缺失)的真核荧光蛋白表达载体,进一步研究该基因在肝细胞肝癌发生中的作用。通过PCR及OverlappingPCR的方法获得目的基因,与荧光载体pEGFP-N1双酶切、连接、转化E.coliJ... 构建肝癌相关抗原HAb18G/CD147全长及缺失片段E51(第22—50位氨基酸缺失)的真核荧光蛋白表达载体,进一步研究该基因在肝细胞肝癌发生中的作用。通过PCR及OverlappingPCR的方法获得目的基因,与荧光载体pEGFP-N1双酶切、连接、转化E.coliJM109,构建含有肝癌相关抗原HAb18G/CD147全长及E51的真核荧光蛋白表达载体。并经限制性酶切及序列分析证明插入是否正确。用阳离子脂质体介导转染COS-7细胞,进行瞬时表达;荧光显微镜观察EGFP表达,通过流式细胞术检测蛋白的表达情况,明胶酶谱法鉴定其功能。成功地构建了真核荧光蛋白表达载体pEGFP-N1/HAb18G、pEGFP-N1/E51,并经限制性酶切及序列分析证明外源基因插入正确;流式细胞术鉴定该蛋白表达正确;功能实验证实缺失片段E51不具有诱导成纤维细胞分泌MMPs的功能。结果显示HAb18G/CD147基因第22—50位氨基酸与其刺激成纤细胞分泌MMP和功能有密切关系。实验结果为HAb18G蛋白分子的生物学功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 HAB18G/CD147 EGFP 肝密相关抗原

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