新技术、新方法在病理学中的应用 被引量：5

1

作者 王文勇 黄晓峰 +1 位作者 闫庆国 王伯沄 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期909-911,共3页

随着科学技术的发展，新技术、新方法层出不穷，许多新的技术和方法已广泛应用于医学各领域，如用于肿瘤基因表达谱分析的基因芯片技术、分层表达扫描（layeredexpressionscanning，LES）分析技术等。本文简要介绍显色原位杂交和荧光原... 随着科学技术的发展，新技术、新方法层出不穷，许多新的技术和方法已广泛应用于医学各领域，如用于肿瘤基因表达谱分析的基因芯片技术、分层表达扫描（layeredexpressionscanning，LES）分析技术等。本文简要介绍显色原位杂交和荧光原位杂交技术、基因芯片技术、生物信息学技术、多光谱成像技术以及分子成像技术在病理学领域的应用。 展开更多

关键词 病理学 原位杂交 基因芯片 生物信息学 多光谱成 像分子成像

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胃肠道间质瘤KIT及PDGFRA基因突变的检测及分析 被引量：5

2

作者 张秀敏 林慧 +4 位作者 叶菁 郭风 袁媛 隋延仿 李增山 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期660-665,共6页

目的:检测胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GISTs)KIT及PDGFRA基因的突变位点及类型,探讨其在GIST发病机制中的作用。方法:收集西京医院病理科2006年10月至2010年10月胃肠道间质瘤病例38例,男性20例(52.6%),女性18例(47.4... 目的:检测胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GISTs)KIT及PDGFRA基因的突变位点及类型,探讨其在GIST发病机制中的作用。方法:收集西京医院病理科2006年10月至2010年10月胃肠道间质瘤病例38例,男性20例(52.6%),女性18例(47.4%),从福尔马林固定石蜡包埋(formalin-fixed paraffin-embedded,FFPE)组织中提取基因组DNA。通过PCR扩增目的片段后测序,检测38例样本的KIT和PDGFRA基因突变类型。结果:在38例样本中共检测出KIT基因突变34例,其中32例发生在外显子1 1,突变形式有点突变、插入突变与缺失突变;2例发生在外显子9,均为重复性突变。同时还检出PDGFRA基因突变1例,其余3例样本为野生型。结论:大多数GISTs中存在KIT基因的突变,PDGFRA基因突变可见于部分缺乏KIT突变的GIST中。 展开更多

关键词 胃肠道间质瘤 石蜡组织 KIT PDGFRA 基因突变

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shRNA表达载体pWH1的构建及用于HIF1基因的沉默 被引量：4

3

作者 吴元明 张晓楠 +2 位作者 韩者艺 李春英 陈南春 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期115-118,共4页

目的:构建用于RNAi的shRNA(small hairpinRNA)表达载体及检测其对低氧诱导因子-1(Hypoxia-inducibleFactor-1,HIF1)基因的沉默效果。方法:从人血基因组中PCR扩增出H1基因启动子,克隆入酶切处理后的pEGFP-C1载体片段中,此载体命名为pWH1... 目的:构建用于RNAi的shRNA(small hairpinRNA)表达载体及检测其对低氧诱导因子-1(Hypoxia-inducibleFactor-1,HIF1)基因的沉默效果。方法:从人血基因组中PCR扩增出H1基因启动子,克隆入酶切处理后的pEGFP-C1载体片段中,此载体命名为pWH1。以人HIF1cDNA基因为靶标设计引物,退火后克隆入pWH1。新的载体转染SGC7901细胞,然后用RT-PCR和Western blot检测HIF1基因的表达改变。结果:构建的pWH1载体能很好地表达针对HIF1基因的shRNA,RT-PCR和Western blot的结果显示HIF1基因的mRNA和蛋白表达水平均明显下降。结论:成功构建了shRNA表达载体pWH1,这对于基因的功能研究具有重要的意义。 展开更多

关键词 SHRNA 表达载体 RNA干涉 HIF1基因

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白藜芦醇对小鼠原代肝细胞脂滴形态和脂滴表面蛋白表达的影响 被引量：3

4

作者 王超 袁媛 +5 位作者 李乐 张秀敏 李静 胡沛臻 李增山 叶菁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期911-914,共4页

目的:探讨不同浓度白藜芦醇(Res)对小鼠原代肝细胞脂滴形态以及脂滴表面蛋白分子表达水平的影响。方法:采用胶原酶灌注方法,分离培养小鼠原代肝细胞;利用200μmol/L油酸(OA)刺激小鼠原代肝细胞12 h后,加入0、20、50、100μmol/L白藜芦醇... 目的:探讨不同浓度白藜芦醇(Res)对小鼠原代肝细胞脂滴形态以及脂滴表面蛋白分子表达水平的影响。方法:采用胶原酶灌注方法,分离培养小鼠原代肝细胞;利用200μmol/L油酸(OA)刺激小鼠原代肝细胞12 h后,加入0、20、50、100μmol/L白藜芦醇,培养12 h后,采用Bodipy493/503染色,荧光显微镜观察肝细胞内脂滴的形态和数量;采用Folch法抽提细胞内脂类,采用定量试剂盒测定甘油三酯(TG)的含量;采用Western blot法分析脂滴表面蛋白perili-pin、adipophilin、TIP-47的表达水平。结果:与空白对照相比,采用20、50、100μmol/L白藜芦醇处理后均能够降低原代肝细胞内的脂滴大小和数量,定量分析显示细胞内TG含量明显降低,并存在剂量依赖关系,但以50μmol/L浓度效果最为显著。Western blot结果显示,白藜芦醇能够降低原代肝细胞中perilipin、adipophilin和TIP-47的表达水平,其中以perilipin下降最为明显。结论:白藜芦醇能够抑制肝细胞内中性脂肪的储积,以50μmol/L浓度效果最为显著。可能通过调节细胞内脂滴表面蛋白的表达水平,从而影响脂滴的储积。 展开更多

关键词 白藜芦醇 原代肝细胞 油酸 脂滴表面蛋白

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突变型异柠檬酸盐脱氢酶1(IDH1)水平与人脑胶质瘤细胞增殖和血管增生正相关 被引量：3

5

作者 石剑宽 赵元琳 +5 位作者 袁媛 王超 谢忠林 高星 肖黎明 叶菁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期360-363,共4页

目的研究人胶质瘤中异柠檬酸盐脱氢酶1突变体(IDH1R132H)表达水平与肿瘤细胞增殖活性和血管形成之间的关系。方法采用测序法和免疫组织化学染色法检测IDH1突变情况和IDH1(R132H)表达水平,采用免疫组织化学染色法分析胶质瘤Ki-67标记指数... 目的研究人胶质瘤中异柠檬酸盐脱氢酶1突变体(IDH1R132H)表达水平与肿瘤细胞增殖活性和血管形成之间的关系。方法采用测序法和免疫组织化学染色法检测IDH1突变情况和IDH1(R132H)表达水平,采用免疫组织化学染色法分析胶质瘤Ki-67标记指数,采用CD34免疫组织化学染色分析人胶质瘤组织中的血管数量,通过统计学方法,分析胶质瘤中IDH1(R132H)表达水平与肿瘤Ki-67标记指数和血管数量的相关性。结果 IDH1在Ⅱ级、Ⅲ级胶质瘤及继发性胶质母细胞瘤中突变率较高,且IDH1(R132H)表达水平与胶质瘤Ki-67和微血管密度存在明显的正相关。结论 IDH1在Ⅱ、Ⅲ级胶质瘤和继发胶质母细胞瘤中表达水平高,且突变型IDH1(R132H)的表达水平可能在胶质瘤的增殖和血管形成中发挥重要作用。 展开更多

关键词 胶质瘤 IDH1 细胞增殖 血管增生

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阿司匹林对大鼠破骨细胞分化成熟和骨吸收活性的影响 被引量：3

6

作者 张毅 牛二龙 +5 位作者 李阳 梁媛 覃君慧 衣慧 王瑞安 桑宏勋 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期435-440,共6页

目的研究不同浓度阿司匹林对体外培养大鼠破骨细胞(Osteoclast,OC)分化成熟及骨吸收活性的影响。方法建立由核激活因子受体配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(Macrophagecolony stimulating facto... 目的研究不同浓度阿司匹林对体外培养大鼠破骨细胞(Osteoclast,OC)分化成熟及骨吸收活性的影响。方法建立由核激活因子受体配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(Macrophagecolony stimulating factor,M-CSF)共同作用的大鼠破骨细胞骨髓诱导体系,将雌激素(10-6mmol/L)和不同浓度的阿司匹林(0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、1.5 mmol/L)分别作用于破骨细胞。诱导培养后分别对破骨细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(The tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色,观察细胞形态,并计数破骨样细胞数量;将各组破骨细胞接种于骨磨片上,建立破骨细胞-骨磨片活性分析模型,于不同时间点对骨磨片进行光镜和扫描电镜观察,分析计算骨吸收陷窝面积。结果与正常对照组相比,雌激素组破骨细胞数量和骨吸收陷窝面积低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);且随着阿司匹林浓度的增加,阿司匹林组TRAP阳性多核破骨细胞数量、骨吸收陷窝面积逐渐减少直至消失,差异有统计学意义(P<0.05)。与雌激素组相比,低浓度阿司匹林组(0.25mmol/L)没有明显差异;但中、高浓度阿司匹林实验组(0.5mmol/L、1.0mmol/L、1.5mmol/L)破骨细胞数量和骨吸收陷窝面积减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论阿司匹林对破骨细胞的分化成熟及骨吸收功能有抑制作用,且呈剂量依赖性,从而具有抗骨质疏松的作用。 展开更多

关键词 阿司匹林 破骨细胞 骨吸收 骨质疏松

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爆炸冲击波致肝组织超微结构改变 被引量：3

7

作者 马晓艳 黄晓峰 +5 位作者 任东青 尹文 王文勇 王爽 李勇强 于华 《医学研究生学报》 CAS 2009年第5期469-471,I0004,共4页

目的：鉴于应激反应与器官损伤的重要关系,文章通过观察三硝基甲苯（TNT）爆炸致伤后羊肝组织超微结构的病理变化特征,为爆炸伤的临床救治提供依据。方法：将25只羊布放在离爆心5~30 m的距离上用电启动引爆TNT致伤,伤后取肝组织用30 mg/... 目的：鉴于应激反应与器官损伤的重要关系,文章通过观察三硝基甲苯（TNT）爆炸致伤后羊肝组织超微结构的病理变化特征,为爆炸伤的临床救治提供依据。方法：将25只羊布放在离爆心5~30 m的距离上用电启动引爆TNT致伤,伤后取肝组织用30 mg/L戊二醛固定,进行常规透射电镜标本制备,观察其超微结构病理改变。结果：电镜下肝组织超微结构的病变表现为肝血窦内淤血明显,枯否细胞增生,可见中性粒细胞、淋巴细胞浸润。肝细胞溶酶体增生,髓鞘样膜结构形成,线粒体肿胀、畸形、嵴模糊不清,内质网扩张。在5 m处存活率为0,10、15和20m处分别为40%、60%和80%,25m、30m处动物存活率为100%。结论：爆炸伤后动物存在应激性肝细胞损伤。动物存活率随动物距爆心距离增加而上升。 展开更多

关键词 三硝基甲苯 爆炸伤 肝细胞 应激 透射电镜

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肿瘤特异性转移因子在消化系统肿瘤治疗中的应用 被引量：3

8

作者 范林妮 尹志勇 王文勇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1270-1271,共2页

转移因子（transfer factor，TF）最早由Lawrence于1949年发现，作者从对某一特定抗原有明显皮肤反应的供体采集白细胞并制备白细胞抽提液，然后将抽提液注入无皮肤反应或免疫抑制的受试者，而受试者随即出现强烈的皮肤反应，这一实验... 转移因子（transfer factor，TF）最早由Lawrence于1949年发现，作者从对某一特定抗原有明显皮肤反应的供体采集白细胞并制备白细胞抽提液，然后将抽提液注入无皮肤反应或免疫抑制的受试者，而受试者随即出现强烈的皮肤反应，这一实验结果很有力的证明了个体间的全身性和特异性免疫可以发生转移， 展开更多

关键词 肿瘤特异性转移因子 消化道肿瘤 肿瘤治疗

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鱼藤酮诱导的多巴胺能神经细胞死亡与免疫 被引量：1

9

作者 黄晓峰 尹文 王文勇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1059-1061,共3页

帕金森病多巴胺(DA)神经元死亡有多种机制,鱼藤酮(RT)是DA能神经元死亡原因之一,但目前还没有一种能用于研究DA能神经元死亡方式的理想模型。我们研究初步证实在昆明小鼠经RT注射后可在黑质神经元出现明显Lewy小体样结构。细胞免疫和体... 帕金森病多巴胺(DA)神经元死亡有多种机制,鱼藤酮(RT)是DA能神经元死亡原因之一,但目前还没有一种能用于研究DA能神经元死亡方式的理想模型。我们研究初步证实在昆明小鼠经RT注射后可在黑质神经元出现明显Lewy小体样结构。细胞免疫和体液免疫虽然在帕金森病的发病过程中可能有一定作用,但与RT所致DA能神经细胞死亡的关系还不清楚。本文中简要阐述了RT与DA能神经元死亡方式及其与免疫之间相互关系。 展开更多

关键词 帕金森病 细胞死亡 LEWY小体 鱼藤酮

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肾综合征出血热发病中不溶性免疫复合物的作用

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作者 黄晓峰 刘彦仿 +3 位作者 尹文 王爽 亢君君 李永强 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期548-555,共8页

目的:为确定肾综合征出血热(HFRS)不溶性免疫复合物(IC)在发病中的作用。方法:本研究采用HFRS病毒抗原和相应抗体在体外制备成特异性的不溶性IC,经尾静脉注射入小鼠体内,而后应用免疫荧光组织化学方法结合激光扫描共聚焦显微镜和电子显... 目的:为确定肾综合征出血热(HFRS)不溶性免疫复合物(IC)在发病中的作用。方法:本研究采用HFRS病毒抗原和相应抗体在体外制备成特异性的不溶性IC,经尾静脉注射入小鼠体内,而后应用免疫荧光组织化学方法结合激光扫描共聚焦显微镜和电子显微镜观察了病毒抗原及IC在各主要脏器的分布及其致病变作用。结果:IC注射后24h,主要见于血管系统如肝血窦和肾小球毛细血管之中。IC注射72h后,IC主要存在于肾小球基底膜部位以及血管系膜中,呈细小或粗大的颗粒状。肾小球毛细血管中红细胞明确阳性。某些血管腔中仍充满荧光物质,有些荧光物质位于足细胞的胞质内。在肾小球周围的部分肾小管上皮细胞可有IC,包括抗原和C3。不溶性IC注射后168h(7d),大多数肾小球结构接近正常,几乎看不到特异性的荧光。电镜观察发现病变以肾小球为主,发现系膜细胞伸出明显的胞质突起,并延伸至内皮和基膜之间。系膜细胞也有增生,可见沿细胞膜分布的中等数量的吞饮小泡以及胞浆中小的溶酶体颗粒。免疫沉积物可出现在肾小球系膜基质区,为不规则形,常聚集成团块状,呈散在分布,有时可见于内皮下、上皮下和/或基膜内。肾小球基膜呈不规则延伸、增厚,呈花斑状,并形成裂隙。IC注射后24h,某些毛细血管袢管腔中有血小板聚集。注射后72h,血小板聚集已不明显。某些毛细血管内皮细胞损伤严重,内皮细胞肿胀,部分区域内皮细胞突起脱落,基膜裸露。内皮细胞伸出许多绒毛状突起,互相交织融合形成拱状结构。胞浆中游离核糖体和粗面内质网增多。有些内皮细胞的胞质形成泡状结构。毛细血管管腔中充满一些电子致密的沉积物,并且这些电子致密物可通过内皮缺损与肾小球毛细血管基膜物质相连。肾小球囊壁层基膜外侧裸露,有胶原纤维形成。足细胞肿胀,突起融合,胞质中有溶酶体和吞饮(吞噬)小泡,吞饮小泡中含有电子致密物。肾小球病变虽然比较明显,但肾小管病变相对较轻,仅肾小球周围的部分肾小管(主要是近曲小管)可出现溶酶体增生。所有对照动物未见发病,组织学检查未见明显病变。免疫荧光组织化学染色对照为阴性,单纯注射PAP的动物,经显色后,发现阳性反应都位于血管系统之中,各器官实质细胞未见阳性反应。说明出血热IC引起的致病变作用是特异性的。结论:不溶性IC主要沉积于肾小球的内皮下、基膜内、上皮下和毛细血管系膜内。HFRS的发病中,肾小球肾炎的改变可能是不溶性IC引起的。 展开更多

关键词 肾综合征出血热 免疫复合物 免疫组织化学 激光扫描共聚焦显微镜技术 超微结构

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脂肪分化相关蛋白在巨噬细胞和泡沫细胞中的表达 被引量：3

11

作者 宋越 李航 +2 位作者 张丽英 叶菁 李青 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期309-311,共3页

目的:观察脂肪分化相关蛋白(ADRP)在单核细胞向巨噬细胞和泡沫细胞分化过程中的表达变化。方法:体外诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞和泡沫细胞,应用RealtimeRT-PCR和Western blot测定ADRP在基因水平和蛋白水平的表达。结果:单核细胞... 目的:观察脂肪分化相关蛋白(ADRP)在单核细胞向巨噬细胞和泡沫细胞分化过程中的表达变化。方法:体外诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞和泡沫细胞,应用RealtimeRT-PCR和Western blot测定ADRP在基因水平和蛋白水平的表达。结果:单核细胞分化为巨噬细胞时ADRP的表达水平无明显变化,当进一步分化为泡沫细胞时,ADRP的mR-NA和蛋白表达水平均显著增加。结论:单核细胞向巨噬细胞分化时对ADRP的表达无影响,而由巨噬细胞进一步向泡沫细胞分化时ADRP的表达升高。 展开更多

关键词 脂肪分化相关蛋白 脂滴 巨噬细胞 泡沫细胞 动脉粥样硬化

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阿司匹林通过抑制大鼠破骨细胞RANK表达抑制骨质吸收 被引量：2

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作者 张毅 匡红英 +5 位作者 牛二龙 李阳 梁媛 覃君慧 王瑞安 桑宏勋 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1219-1223,共5页

目的研究不同浓度阿司匹林对体外培养大鼠破骨细胞(Osteoclast,OC)RANK(receptor activator of nuclear factor-κB,核因子κB受体活化因子)表达的影响。方法采用RANKL和M-CSF诱导大鼠骨髓单核巨噬细胞破骨分化模型,给予不同浓度的阿司... 目的研究不同浓度阿司匹林对体外培养大鼠破骨细胞(Osteoclast,OC)RANK(receptor activator of nuclear factor-κB,核因子κB受体活化因子)表达的影响。方法采用RANKL和M-CSF诱导大鼠骨髓单核巨噬细胞破骨分化模型,给予不同浓度的阿司匹林(0.25 mmol/L、0.5 mmol/L、1.0 mmol/L、1.5 mmol/L)和雌激素(雌二醇10-6mmol/L)处理,而后进行抗酒石酸酸性磷酸酶(The tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色观察细胞形态特征,扫描电镜观察骨磨片破骨细胞骨吸收陷窝,RT-PCR技术检测破骨细胞表面RANK基因的表达,ELISA法检测RANK蛋白的表达。结果阿司匹林和雌激素都可以使大鼠破骨细胞成熟分化程度和骨吸收活性降低,抑制破骨细胞RANK基因和蛋白的表达,且阿司匹林的抑制作用具有剂量依赖性。结论阿司匹林对大鼠破骨细胞RANK的表达有抑制作用且呈剂量依赖性,从而抑制破骨细胞的成熟分化及骨吸收功能。 展开更多

关键词 骨质疏松 阿司匹林 破骨细胞 RANK 大鼠

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氧气葡萄糖剥夺诱导原代培养的星形胶质细胞释放谷氨酸 被引量：3

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作者 刘伟 江山 +3 位作者 刘毅 潘华将 陈雷 肖建新 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期569-572,共4页

目的观察氧气葡萄糖剥夺(OGD)对原代培养的星形胶质细胞谷氨酸释放的影响,并探讨其释放机制。方法原代培养SD大鼠海马区星形胶质细胞,将其分为OGD组和对照组。OGD组的细胞置于不含糖和氧的培养基,37℃,950 mL/L N2和50 mL/L CO2,饱和湿... 目的观察氧气葡萄糖剥夺(OGD)对原代培养的星形胶质细胞谷氨酸释放的影响,并探讨其释放机制。方法原代培养SD大鼠海马区星形胶质细胞,将其分为OGD组和对照组。OGD组的细胞置于不含糖和氧的培养基,37℃,950 mL/L N2和50 mL/L CO2,饱和湿度的培养环境下培养,而对照组细胞则正常培养。缺糖缺氧刺激时长分别为0、15、30、60、90、120 min,采用高效液相色谱,测定细胞外液的谷氨酸浓度。分别选用连接子蛋白43(Cx43)特异性反义寡核苷酸(Cx43-ASODN)和Cx43半通道的阻断剂Gap26预处理星形胶质细胞,采用高效液相色谱,测定细胞外液谷氨酸浓度,观察OGD对其谷氨酸释放的影响。结果与对照组相比较,OGD刺激后,细胞外液谷氨酸浓度升高,并在刺激90 min后,达到峰值,为(5.00±0.30)nmol/mL,显著高于对照组的(2.36±0.15)nmol/mL(P<0.05);而OGD条件下,Cx43-ASODN或Cx43半通道阻断剂均可抑制细胞外液谷氨酸浓度的升高,刺激90 min后,细胞外液谷氨酸浓度分别为(4.02±0.18)nmol/mL和(3.93±0.32)nmol/mL,显著低于单纯OGD刺激组(P<0.05)。结论 OGD可以诱导星形胶质细胞通过Cx43半通道释放谷氨酸。 展开更多

关键词 氧气葡萄糖剥夺 星形胶质细胞 谷氨酸 连接子蛋白43

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