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单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因部分缺失重组质粒的构建及序列分析
1
作者 甄荣芬 喻启桂 +2 位作者 陈伟 樊荣 薛采芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期88-90,共3页
目的：构建ＨＳＶ１ 型胸苷激酶基因部分缺失的重组质粒并进行序列测定。方法：以ｐ ＵＣ１８／ ＴＫ 重组质粒ＤＮＡ 为模板，用ＰＣＲ 方法扩增ＴＫ５′端５０３ｂｐ 基因片段，并将扩增的片段克隆入载体ｐ ＵＣ１８ 中（ｐ ＵＣ１... 目的：构建ＨＳＶ１ 型胸苷激酶基因部分缺失的重组质粒并进行序列测定。方法：以ｐ ＵＣ１８／ ＴＫ 重组质粒ＤＮＡ 为模板，用ＰＣＲ 方法扩增ＴＫ５′端５０３ｂｐ 基因片段，并将扩增的片段克隆入载体ｐ ＵＣ１８ 中（ｐ ＵＣ１８／ＴＫ１） ；用Ｐｓｔ Ｉ 和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切ｐＵＣ１８／ ＴＫ， 获得ＴＫ３′端３８３ｂｐ 片段， 将此酶切片段克隆入ｐＵＣ１８／ ＴＫ１ 中， 并进行测序。结果： 构建成重组质粒ｐＵＣ１８／ ＴＫ－ 。经酶切鉴定获得１ 条约９００ ｂｐ 的基因片段； 序列测定证实， ＨＳＶ１１７ｓｙｎ ＋ ＴＫ 基因缺失了第４９３ ～７４４ 位２５１ 对碱基。结论：成功地构建了部分缺失的ＨＳＶ１／ＴＫ－ 基因重组质粒，为研制其突变株奠定了基础。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 基因缺失 序列分析
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pLTRNL介导HSV-1 TK基因长期稳定转染人肝癌细胞系的建立 被引量：1
2
作者 陈伟 喻启桂 +2 位作者 樊荣 甄荣芬 薛采芳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期26-28,共3页
以脂质体基因转移技术，将含ＨＳＶ１ＴＫ基因的重组逆转录病毒载体ｐＬＴＲＮＬ转染人肝癌细胞系ｈＨＣＣ。经抗生素Ｇ４１８选择，筛选出ＨＳＶ１ＴＫ基因转染的ｈＨＣＣ，再进行克隆化和亚克隆化后扩大培养。应用ＰＣＲ，ＲＴ... 以脂质体基因转移技术，将含ＨＳＶ１ＴＫ基因的重组逆转录病毒载体ｐＬＴＲＮＬ转染人肝癌细胞系ｈＨＣＣ。经抗生素Ｇ４１８选择，筛选出ＨＳＶ１ＴＫ基因转染的ｈＨＣＣ，再进行克隆化和亚克隆化后扩大培养。应用ＰＣＲ，ＲＴＰＣＲ及ｓｌｏｔｂｌｏｔ狭槽印迹等方法，对转染细胞基因组ＤＮＡ和总ＲＮＡ进行了鉴定。结果表明，ＨＳＶ１ＴＫ基因已整合入ｈＨＣＣ细胞基因组中，且有ＴＫ基因的ｍＲＮＡ转录。ＨＳＶ１ＴＫ基因稳定转染的ｈＨＣＣ的建立，为在体外和动物模型上对肝癌进行基因治疗奠定了实验基础。 展开更多
关键词 肝肿瘤 基因治疗 胸苷激酶 HSV-1 pLTRNL
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单纯疱疹病毒I型胸苷激酶基因在大肠杆菌中的融合表达 被引量：1
3
作者 陈伟 喻启桂 +2 位作者 薛采芳 甄荣芬 樊荣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第2期91-93,共3页
用ＥｃｏＲ Ⅰ和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切已构建的含单纯疱疹病毒Ｉ 型胸苷激酶（ ＨＳＶ１ ＴＫ） 基因的ｐ ＵＣ１８／ＴＫ 质粒，将切出的ＴＫ 基因片段克隆入原核表达载体ｐ ＷＲ４５０１ 中，构建成ＨＳＶ１ ＴＫ 基因重组表达质粒... 用ＥｃｏＲ Ⅰ和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切已构建的含单纯疱疹病毒Ｉ 型胸苷激酶（ ＨＳＶ１ ＴＫ） 基因的ｐ ＵＣ１８／ＴＫ 质粒，将切出的ＴＫ 基因片段克隆入原核表达载体ｐ ＷＲ４５０１ 中，构建成ＨＳＶ１ ＴＫ 基因重组表达质粒ｐ ＷＲ４５０１／ＴＫ。以ＨＳＶ１ ＴＫ 特异性引物ＴＫ１ Ｆｏｒ 和ＴＫ２ Ｒｅｖ 进行ＰＣＲ 鉴定可扩增出预期的５０３ ｂｐ 的ＴＫ 基因编码区部分序列；ＥｃｏＲ Ⅰ和Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切质粒ｐ ＷＲ４５０１／ ＴＫ， 可切出约１１５０ｂｐ 的ＤＮＡ 片段， 表明重组质粒中已插入ＨＳＶ１ ＴＫ基因片段。用ＩＰＴＧ 诱导ｐ ＷＲ４５０１／ＴＫ／ＪＭ１０９ ，表达出相对分子质量（ Ｍｒ） 约为９７ ０００ 的ＴＫ 和β半乳糖苷酶（ Ｍｒ５５ ０００） 融合蛋白。薄层扫描显示，该融合蛋白含量占菌体蛋白总量的２７ ．４７ ％ 。 展开更多
关键词 单纯疱疹病毒 胸苷激酶 融合表达 大肠杆菌
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