在医学微生物学教学中融入医学伦理教育 被引量：4

1

作者 雷迎峰 杨敬 徐志凯 《中国医学伦理学》 2013年第4期454-455,共2页

在医学微生物学课程教学实践中贯彻医学伦理教育和理念,从提高教师医学伦理学素养、将医学伦理学教育融入到教学中的关键环节、联系微生物学研究热点蕴含的医学伦理等几个方面实施医学微生物学的教学改革,对医学生的医学伦理素养养成、... 在医学微生物学课程教学实践中贯彻医学伦理教育和理念,从提高教师医学伦理学素养、将医学伦理学教育融入到教学中的关键环节、联系微生物学研究热点蕴含的医学伦理等几个方面实施医学微生物学的教学改革,对医学生的医学伦理素养养成、对其进入临床实践后加深医学伦理思考并做出独立判断打下坚实的基础。 展开更多

关键词 医学微生物学 医学伦理学 教学 人文素养

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TGF-βRⅡ/Fc融合蛋白的纯化及其生物学活性鉴定 被引量：1

2

作者 李圣青 李焕章 +1 位作者 杨乔欣 倪殿涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期400-402,405,共4页

目的 :用重组Bac TRⅡ杆状病毒表达系统大量表达融合蛋白TGF βRⅡ /Fc,并对其进行纯化及鉴定 ;验证该融合蛋白是否能够阻断细胞因子TGF β1的生物学作用。 方法 :采用病毒空斑形成试验测定病毒滴度 ,并对其进行扩增。采用Pro teinG柱... 目的 :用重组Bac TRⅡ杆状病毒表达系统大量表达融合蛋白TGF βRⅡ /Fc,并对其进行纯化及鉴定 ;验证该融合蛋白是否能够阻断细胞因子TGF β1的生物学作用。 方法 :采用病毒空斑形成试验测定病毒滴度 ,并对其进行扩增。采用Pro teinG柱和快速蛋白质液相层析法 (FPLC)纯化目的蛋白。采用SDS PAGE分析纯化后的目的蛋白 ,并将蛋白电泳条带进行灰度扫描 ,计算目的蛋白的含量。采用Westernblot和夹心ELISA法 ,鉴定目的蛋白是否表达。采用MTT比色法 ,验证融合蛋白TGF βRⅡ /Fc能否阻断TGF β1对小鼠肺成纤维细胞 (L92 9)生长的作用。采用Westernblot技术 ,验证融合蛋白能否阻断TGF β1对L92 9细胞纤维黏连蛋白 (FN)生成的促进作用。结果 :本实验室构建并保存的重组Bac TRⅡ杆状病毒原液内病毒的滴度为 2× 10 12 pfu/L。蛋白电泳后灰度扫描结果表明 ,目的蛋白约占总蛋白的 10 %。夹心ELISA法和Westernblot分析证明目的蛋白已表达。融合蛋白TGF βRⅡ /Fc能够阻断TGF β1对L92 9细胞生长的抑制作用 ,以及对该细胞FN生成的促进作用。结论 :本室构建的重组Bac TRⅡ杆状病毒表达系统 ,能够表达融合蛋白TGF βRⅡ /Fc ,表达水平为 9mg/L。纯化得到的目的蛋白具有一定的生物学活性 ,可阻断TGF β1对L92 9细胞生长的? 展开更多

关键词 转化生长因子—β 肺间质纤维化 融合蛋白

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汉滩病毒M、S基因部分片段在大肠杆菌中的融合表达 被引量：10

3

作者 罗雯 徐志凯 +6 位作者 阎岩 吴兴安 张芳琳 刘勇 赵茜 白文涛 王海涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期115-117,共3页

目的在大肠杆菌中融合表达含主要抗原位点的汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与NP片段。方法将汉滩病毒76118株M基因编码G1的片段与S基因编码区5′端约0.7kb的片段连接,克隆入pGEX4T2,构建嵌合基因原核表达载体pGEX4T2G1S0.7,并在大肠杆菌... 目的在大肠杆菌中融合表达含主要抗原位点的汉滩病毒囊膜糖蛋白G1与NP片段。方法将汉滩病毒76118株M基因编码G1的片段与S基因编码区5′端约0.7kb的片段连接,克隆入pGEX4T2,构建嵌合基因原核表达载体pGEX4T2G1S0.7,并在大肠杆菌XL1Blue中,诱导GSTG1S0.7融合蛋白的表达。表达产物用ELISA和Westernblot进行鉴定。结果成功地构建了嵌合原核表达载体pGEX4T2G1S0.7。经IPTG诱导后,ELISA活性测定结果表明,该融合蛋白可与抗汉滩病毒NP及糖蛋白的mAb特异性结合。Westernblot结果显示,诱导出相对分子质量Mr大于1×105的G1S0.7与GST的融合蛋白。结论获得具有特异性结合活性的融合蛋白GSTG1S0.7,为汉滩病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 汉滩病毒 原核表达 融合蛋白 大肠杆菌

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生物技术专业真菌学教学创新改革的实践与思考

4

作者 黎志东 吴兴安 徐志凯 《生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第5期117-119,共3页

根据人才培养目标的要求,生物技术专业的真菌学课程具备"生物技术、医学、军事"三要素相融合的特点。在教学过程中,通过新教材编写及应用、课前准备、课堂教学、考试阅卷等多环节、全方位的创新改革,进一步提高了教学质量,使... 根据人才培养目标的要求,生物技术专业的真菌学课程具备"生物技术、医学、军事"三要素相融合的特点。在教学过程中,通过新教材编写及应用、课前准备、课堂教学、考试阅卷等多环节、全方位的创新改革,进一步提高了教学质量,使学员在熟练掌握基本知识、基本方法和基本技能的基础上,增强运用专业知识解决生产生活、医学实践及军事训练中具体问题的能力,提高创新意识和创新水平。 展开更多

关键词 生物技术专业 真菌学 教学改革

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小鼠肺纤维化模型中基质金属蛋白酶-9及其抑制剂表达水平的变化 被引量：16

5

作者 李圣青 张艰 +2 位作者 黎志东 李焕章 戚好文 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期723-726,共4页

目的 :研究小鼠博来霉素在肺纤维化模型中肺泡巨噬细胞(AM)分泌的基质金属蛋白酶 9(MMP 9)和基质金属蛋白酶抑制剂 1(TIMP 1)的表达随着时间的变化 ,观察肺纤维化中MMP 9和TIMP 1的表达是否存在失衡。方法 :以博来霉素诱导建立小鼠肺... 目的 :研究小鼠博来霉素在肺纤维化模型中肺泡巨噬细胞(AM)分泌的基质金属蛋白酶 9(MMP 9)和基质金属蛋白酶抑制剂 1(TIMP 1)的表达随着时间的变化 ,观察肺纤维化中MMP 9和TIMP 1的表达是否存在失衡。方法 :以博来霉素诱导建立小鼠肺纤维化模型 ,采用HE染色观察肺部胶原沉积状况。选用抗CD6 8mAb ,采用微小免疫磁珠法分离纯化肺泡灌洗液中的AM ,用Hoechst 332 5 8染色AM ,在下光镜高倍视野计数法评估AM的纯度和活性 ,用EIA法检测AM上清液中MMP 9和TIMP 1的表达。结果 :肺组织切片HE染色显示小鼠肺部胶原沉积在 1、3、7、14、2 8d呈逐渐加重趋势。粗分离的AM纯度为 (82 .5± 2 .5 ) %。采用微小免疫磁珠法分离肺泡灌洗液中的AM纯度可达到 (99.3± 0 .7) % (P <0 .0 5 )。纯化后的细胞存活率为 (92 .5± 1.8) % ,与纯化前的 (92 .7± 2 .0 ) % ,相差不大 (P >0 .0 5 )。随着小鼠肺间质纤维化的进展 ,MMP 9的分泌量逐渐减少 ,而TIMP 1的表达量逐渐增加。结论 :在小鼠肺纤维化中AM分泌的MMP 9和TIMP 1之间存在失衡 。 展开更多

关键词 肺间质纤维化 肺泡巨噬细胞 免疫磁珠 MMP-9 TIMP-1

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Der p2重组胞壁型E.coli-BCG穿梭表达载体的构建和鉴定 被引量：9

6

作者 史皆然 李元 +2 位作者 戚好文 李别虎 范雄林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期132-135,共4页

目的 :构建能够携带外源蛋白屋尘螨抗原 (Derp2 )基因并能在胞壁表达的E .coli BCG穿梭载体。方法 :用PCR技术 ,从结核分支菌毒株H37Rv基因中 ,扩增结核分支杆菌 19kDa抗原的胞壁区及其上游调控元件 (19 ss)基因 ,并克隆入含有Derp2基因... 目的 :构建能够携带外源蛋白屋尘螨抗原 (Derp2 )基因并能在胞壁表达的E .coli BCG穿梭载体。方法 :用PCR技术 ,从结核分支菌毒株H37Rv基因中 ,扩增结核分支杆菌 19kDa抗原的胞壁区及其上游调控元件 (19 ss)基因 ,并克隆入含有Derp2基因的E .coli BCG穿梭载体 pOLYG中。用间接免疫荧光染色法 ,检测该载体能够携带并表达的Derp2基因在牡牛分支杆菌宿主中表达。结果 :经测序证实 ,所克隆的 19 ss基因序列正确。所构建的含有 19 ss基因的E .coli BCG穿梭载体 (pCW )能完成在大肠杆菌和牡牛分支杆菌细胞之间的穿梭 ,并介导抗生素抗性基因表达。经免疫荧光检查 ,外源基因Derp2以脂蛋白的形式表达于分支杆菌宿主的表面。 结论 :成功地构建了以胞壁嵌合形式表达外源蛋白的E .coli 展开更多

关键词 尘螨抗原 E.coli-BCG穿梭表达载体 结核分支杆菌 调控元件基因 脑壁嵌合形式 外源基因

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HBV与HCV融合DNA疫苗的构建及其体液免疫应答 被引量：8

7

作者 尹文 徐志凯 +2 位作者 薛小平 付莉 吕欣 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期234-236,共3页

目的构建含乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原基因(S区基因)与丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原基因(C区基因)的嵌合真核表达载体,观察preS1和preS2基因对HBV表面抗原及HCV核心抗原体液免疫的影响。方法用PCR方法,分别扩增HBVS区基因和HCVC区基因。将... 目的构建含乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原基因(S区基因)与丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原基因(C区基因)的嵌合真核表达载体,观察preS1和preS2基因对HBV表面抗原及HCV核心抗原体液免疫的影响。方法用PCR方法,分别扩增HBVS区基因和HCVC区基因。将S区基因克隆入真核表达载体pcDNA3.1,酶切鉴定后,再将C区基因克隆至S区基因的下游。测序正确后,大量提取质粒并免疫Balb/c小鼠,用ELISA法检测抗HBs和抗HCV抗体。结果成功地扩增出目的基因片段,克隆后酶切鉴定结果正确,序列分析与文献报道相一致。免疫后检测到抗HBs和抗HCV抗体。preS1与preS2基因对构建的融合DNA疫苗的体液免疫应答有一定的抑制作用。抗HBs抗体的产生低于只含S基因的真核表达载体;preS1基因对抗HCV抗体的产生具有抑制作用,而preS2无影响。结论不同长度的HBVS区基因可影响抗HBs和抗HCV抗体的产生。 展开更多

关键词 DNA疫苗 乙型肝炎病毒 丙型肝炎病毒 体液免疫应答

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结核分枝杆菌MPT64抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答 被引量：8

8

作者 柏银兰 薛莹 +5 位作者 王丽梅 樊爱琳 张薇 康健 何俊杰 徐志凯 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期418-421,494,共5页

目的研究结核分枝杆菌MPT64抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答。方法用表达MPT64的真核表达质粒pcDNA-M免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度和抗体亚类。分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,检测淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-12... 目的研究结核分枝杆菌MPT64抗原DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答。方法用表达MPT64的真核表达质粒pcDNA-M免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测免疫小鼠的特异性抗体滴度和抗体亚类。分离免疫小鼠的脾淋巴细胞,检测淋巴细胞增殖、IFN-γ和IL-12产生水平、流式细胞仪计CD4+细胞和CD8+细胞数、脾淋巴细胞特异性CTL杀伤效应。结果MPT64基因免疫可诱导小鼠高水平的体液免疫应答,免疫小鼠脾淋巴增殖显著,IFN-γ和IL-12含量增加,CD4+细胞和CD8+细胞百分比明显增加,CTL杀伤效应明显。结论MPT64 DNA疫苗可诱导小鼠有效的体液和细胞免疫应答,有可能作为新型TB疫苗的组分。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 MPT64 DNA 免疫应答

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抗藤黄微球菌Rpf结构域单克隆抗体的制备与特性鉴定 被引量：9

9

作者 樊爱琳 师长宏 +5 位作者 苏明权 马静 柏银兰 程晓东 徐志凯 郝晓柯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期484-487,共4页

目的:克隆、表达藤黄微球菌Rpf结构域多肽,并制备针对该多肽的单克隆抗体(mAb)。方法:采用聚合酶链反应(PCR)藤黄微球菌基因组中扩增出藤黄微球菌Rpf结构域基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合... 目的:克隆、表达藤黄微球菌Rpf结构域多肽,并制备针对该多肽的单克隆抗体(mAb)。方法:采用聚合酶链反应(PCR)藤黄微球菌基因组中扩增出藤黄微球菌Rpf结构域基因,用限制性内切酶消化后插入到pUC-19克隆载体中,测序正确后,再亚克隆到融合表达载体pPro-EXHT中,转化大肠杆菌DH5α,目的基因经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的Rpf结构域基因多肽,在变性条件下纯化目的蛋白。用纯化的目的蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,进行细胞融合、克隆化制备抗Rpf domain单抗(mAb),用ELISA法初步鉴定其特异性和相对亲和力。结果:在变性条件下用Ni2+-NTA亲和色谱柱纯化目的融合蛋白,纯化获得的蛋白纯度大于90%。用该融合蛋白免疫小鼠后,获得了3株抗Rpfdomain mAb,这3株mAb均特异性识别Rpf domain多肽。结论:所获得的抗Rpfdomain mAb特异性强、效价高,对进一步研究Rpf domain在结核病免疫预防中的作用提供了有力的工具。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 藤黄微球菌 Rpf DOMAIN MAB

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Th1型细胞因子基因对结核分枝杆菌基因疫苗诱导BALB/c小鼠产生抗CFP10抗体水平的影响 被引量：6

10

作者 范雄林 王丽梅 +5 位作者 王福祥 师长宏 李元 薛莹 柏银兰 徐志凯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期260-262,共3页

目的 :研究分别表达含IL 12和IL 18基因的质粒 ,对结核分枝杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis,MTB)H3 7Rv 株CFP10基因疫苗诱导免疫应答的影响。方法 :从正常人外周血单个核细胞 (PMBCs)中提取RNA ,用RT PCR扩增IL 18cDNA ,并克隆入载体 ... 目的 :研究分别表达含IL 12和IL 18基因的质粒 ,对结核分枝杆菌 (Mycobacteriumtuberculosis,MTB)H3 7Rv 株CFP10基因疫苗诱导免疫应答的影响。方法 :从正常人外周血单个核细胞 (PMBCs)中提取RNA ,用RT PCR扩增IL 18cDNA ,并克隆入载体 pGEM Teasy中。测序证实后 ,亚克隆至真核表达载体 pcDNA3.1的BamHI和EcoRI酶切位点。将分别表达小鼠IL 12和人IL 18基因的真核表达质粒pcmIL12和pcIL18,与MTBCFP10基因疫苗联合肌注免疫BALB/c小鼠 ,共免疫 3次 ,每次间隔 2wk。每次免疫后 2wk采血、分离血清 ,用ELISA检测小鼠血清抗CFP10抗体的滴度。结果 :用RT PCR成功地从人PMBC的RNA中扩增出IL 18cDNA ,测序结果正确。用BamHI和EcoRI酶切鉴定证实 ,目的基因已插入载体 pcDNA3.1中 ,阳性克隆命名为pcIL18。pc CFP10组第 1次免疫后 ,血清抗CFP10抗体的平均滴度为 1∶6 0 0 ,末次免疫后的滴度为 1∶4 0 0 0。pcIL18+pcCFP10组联合免疫后 ,血清抗CFP10抗体的滴度高于 pcCFP10组 ,最终达 1∶80 0 0。而pcmIL12 + pcCFP10组联合免疫后滴度仅为 1∶2 0 0。结论 :pcIL18与CFP10基因疫苗联合免疫 ,可增强CFP10抗原的特异性体液免疫应答 ;pcmIL12则可使CFP10基因疫苗产生的抗体水平降低。pcIL18+ pcCFP10基因联合免疫是否具有? 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 CFP10 基因疫苗 IL—12 IL—18

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针对Survivin基因的短发卡RNA诱导U251细胞凋亡 被引量：7

11

作者 甄海宁 章翔 +6 位作者 白文涛 杨彤涛 付洛安 章薇 高大宽 胡世颉 潘灏 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期186-189,共4页

目的:观察针对Survivin基因的短发卡RNA(shRNA)对人脑胶质母细胞瘤U251细胞在体外凋亡的影响。方法:对U251细胞,稳定转染Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1-SR的U251-SR细胞,以及稳定转染空载体pWH1的U251-P细胞,分别采用相差显微镜、H... 目的:观察针对Survivin基因的短发卡RNA(shRNA)对人脑胶质母细胞瘤U251细胞在体外凋亡的影响。方法:对U251细胞,稳定转染Survivin基因shRNA真核表达载体pWH1-SR的U251-SR细胞,以及稳定转染空载体pWH1的U251-P细胞,分别采用相差显微镜、HE染色、Hoechst染色、TUNEL染色以及透射电镜观察各组细胞的形态学特征;采用流式细胞术(FCM)定量测定各组细胞的凋亡细胞数量。结果:相差显微镜、HE染色、Hoechst染色、TUNEL染色以及透射电镜观察显示,U251-SR凋亡细胞明显增多,并呈现典型的细胞凋亡形态学改变;FCM定量分析凋亡细胞数量显示,与U251(2.1%)和U251-P(2.7%)相比,U251-SR凋亡细胞增加约6倍,达14.4%。结论:针对Survivin基因的shRNA能够在体外诱导U251细胞发生大量凋亡。 展开更多

关键词 SURVIVIN 短发卡RNA RNA干涉 胶质瘤

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结核分枝杆菌esat-6基因疫苗的构建和免疫原性的研究 被引量：7

12

作者 王丽梅 范雄林 +4 位作者 师长宏 李元 柏银兰 薛莹 徐志凯 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第5期369-370,378,共3页

目的　构建以结核分枝杆菌H3 7Rvesat - 6基因为基础的基因疫苗 ,并研究其免疫原性。方法　采用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切含有esat- 6目的基因的质粒pGEM -Teasy -esat6 ,10 g L-1琼脂糖凝胶电泳回收约 30 0bp大小片段 ,以亚克隆法构建于真... 目的　构建以结核分枝杆菌H3 7Rvesat - 6基因为基础的基因疫苗 ,并研究其免疫原性。方法　采用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切含有esat- 6目的基因的质粒pGEM -Teasy -esat6 ,10 g L-1琼脂糖凝胶电泳回收约 30 0bp大小片段 ,以亚克隆法构建于真核表达载体 pcDNA3 1的相应酶切位点阳性克隆经酶切鉴定证实。重组表达质粒肌注免疫BALB/c小鼠三次 ,每次间隔 2周 ,ELISA检测小鼠血清中产生抗体的水平。结果　用BamHⅠ和EcoRⅠ酶切鉴定证实目的基因正确插入载体 ,命名为pcDE6 ,重组质粒免疫小鼠体内产生特异性抗体。结论　所构建的重组真核表达质粒pcDE6能引起免疫动物的特异性体液免疫反应 ,应进一步研究其刺激机体的细胞免疫应答 ,以用于结核病 (TB) 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 基因疫苗 免疫原性 ESAT-6

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抗人μ链单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用 被引量：5

13

作者 杨敬 丁天兵 +2 位作者 任君萍 宋建华 马文煜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期325-327,共3页

目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株... 目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株。mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)采用ELISA及Westernblot法鉴定。以纯化的mAb包被建立ELISA捕捉法,并用于可疑乙脑患者标本中特异性IgM抗体的检测。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人μ链mAb的细胞株2E5。mAb腹水的ELISA效价为1×10-6,Ig亚类(型)为IgG1(κ),相对亲和力为1×10-5。Westernblot结果显示mAb2E5仅与IgM的μ链结合,Mr为75000。以辛酸硫酸铵法纯化的mAb2E5包被,建立了ELISA捕捉法,用于30份乙脑患者血清IgM的检测,敏感性及特异性良好。结论:成功地制备1株抗人μ链mAb2E5,建立了可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。 展开更多

关键词 单克隆抗体 μ链 杂交瘤 ELISA

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抗鳗弧菌单克隆抗体的研制及鉴定 被引量：6

14

作者 夏永娟 黄威权 +4 位作者 李元 黄宝成 李别虎 金晓航 张荣庆 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期81-81,共1页

关键词 鳗弧菌 单克隆抗体 杂交瘤 研制鉴定

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NK细胞的活化及其介导的抗病毒作用 被引量：6

15

作者 王平忠 黎志东 +1 位作者 于海涛 白雪帆 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期330-332,共3页

NK细胞是一类独特的淋巴细胞亚群,占人外周血淋巴细胞的10%～15%,其表面标志为CD3-CD19-CD16＋CD56＋。根据CD56分子的表面密度,将NK细胞分为：CD56bright和CD56dim两个亚群,前者以分泌细胞因子为主,后者以杀伤功能为主。NK细胞不表达T... NK细胞是一类独特的淋巴细胞亚群,占人外周血淋巴细胞的10%～15%,其表面标志为CD3-CD19-CD16＋CD56＋。根据CD56分子的表面密度,将NK细胞分为：CD56bright和CD56dim两个亚群,前者以分泌细胞因子为主,后者以杀伤功能为主。NK细胞不表达T细胞的表型（CD3或TCR）,也不表达B细胞的表型（CD19或BCR）。NK细胞具有如下特点：①强大的细胞毒活性。它对刺激因素产生的应答十分迅速,而且免疫应答强度高。②杀伤活性无需抗原刺激,也不受MHC分子的限制。 展开更多

关键词 NK细胞 NK细胞受体 抗病毒作用

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汉滩病毒G_2重组腺病毒的表达及其基因免疫的研究 被引量：3

16

作者 吴兴安 于澜 +4 位作者 胡刚 张芳琳 白文涛 史梦远 徐志凯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期415-417,共3页

目的:在VeroE6细胞中表达汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白G2重组腺病毒(AdenoG2),并探讨其诱导免疫应答特性。方法:以HTNVAdenoG2病毒原种(滴度约1×1013pfu/L)感染VeroE6细胞,用IFA法检测其表达产物。以表达产物免疫BALB/c小鼠后,用ELIS... 目的:在VeroE6细胞中表达汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白G2重组腺病毒(AdenoG2),并探讨其诱导免疫应答特性。方法:以HTNVAdenoG2病毒原种(滴度约1×1013pfu/L)感染VeroE6细胞,用IFA法检测其表达产物。以表达产物免疫BALB/c小鼠后,用ELISA、微量细胞培养中和试验及淋巴细胞增殖试验检测体液及细胞免疫应答。结果:用HTNVAdenoG2感染VeroE6细胞后,可检测到HTNV糖蛋白G2的表达。用HTNVAdenoG2免疫小鼠后,可诱导产生抗HTNV糖蛋白G2的特异性抗体,抗体效价为1∶40。微量细胞培养中和试验的结果表明,HTNVAdenoG2还可刺激小鼠产生低水平的中和抗体;但淋巴细胞的增殖反应不明显。结论:在VeroE6细胞中成功地表达了HTNV糖蛋白G2。以HTNVAdenoG2免疫小鼠后,主要刺激小鼠产生特异性的抗HTNV体液免疫应答,而特异性的细胞免疫应答不明显。本研究结果为HTNV基因工程疫苗的研制提供了实验依据。 展开更多

关键词 汉滩病毒 糖蛋白G2 重组腺病毒 免疫

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抗汉滩病毒NP抗原mAb的ScFv-C_κ基因真核和原核表达载体的构建及鉴定 被引量：2

17

作者 阎岩 徐志凯 +6 位作者 胡刚 白文涛 罗雯 吴兴安 张芳琳 刘勇 王海涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期171-174,共4页

目的构建抗汉滩病毒HTNVNP抗原mAb的ScFvCκ基因原核和真核表达载体。方法将鼠源性抗HTNVmAb1A8的ScFv基因和人Cκ基因连接,分别克隆入原核表达载体pComb3和真核表达载体pCIneo中,并用间接免疫荧光和Westernblot检测其原核表达产... 目的构建抗汉滩病毒HTNVNP抗原mAb的ScFvCκ基因原核和真核表达载体。方法将鼠源性抗HTNVmAb1A8的ScFv基因和人Cκ基因连接,分别克隆入原核表达载体pComb3和真核表达载体pCIneo中,并用间接免疫荧光和Westernblot检测其原核表达产物的活性。结果成功地构建了重组1A8ScFvCκ基因并克隆入原核和真核表达载体。间接免疫荧光和Westernblot分析表明,该基因在E.coliTG1中的表达产物可与HTNVNP抗原特异性结合。结论抗NP抗原mAb的ScFvCκ原核和真核表达载体的构建,为进一步研究细胞内抗体的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 单链抗体 单克隆抗体 汉滩病毒 NP抗原 真核表达 原核表达 载体构建

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RNA干扰技术抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达 被引量：4

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作者 侯开波 姚元庆 +4 位作者 雷迎峰 王晓红 赵宏喜 尹文 朱晓明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期255-257,共3页

目的:以人类白细胞抗原G基因(HLA-G)为靶基因,采用RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达。方法:针对HLA-G基因设计一段小干扰RNA(siRNA),由Ambion公司化学合成,用脂质体lipofectamine2000将该siRNA转染JEG-3细胞,采用RT... 目的:以人类白细胞抗原G基因(HLA-G)为靶基因,采用RNA干扰(RNAi)技术特异性地抑制JEG-3细胞中HLA-G的表达。方法:针对HLA-G基因设计一段小干扰RNA(siRNA),由Ambion公司化学合成,用脂质体lipofectamine2000将该siRNA转染JEG-3细胞,采用RT-PCR、流式细胞术和Westernblot分别从mRNA和蛋白质水平检测该siRNA对HLA-G表达的影响。结果:针对HLA-G的siRNA能够明显下调JEG-3细胞中HLA-G的表达水平,并具有良好的特异性。结论:在JEG-3细胞系中采用RNAi技术特异性下调了HLA-G基因的表达,为进一步研究HLA-G在人类的母胎免疫耐受、正常妊娠的维持及助孕技术应用等方面的作用奠定了实验基础。 展开更多

关键词 HLA-G RNA干扰 JEG-3细胞

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天花粉蛋白突变体的构建及其在原核系统中的表达 被引量：3

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作者 安群星 穆士杰 +6 位作者 张献清 陈蕤 吴原茹 夏爱军 雷迎峰 黎志东 徐志凯 《医学研究生学报》 CAS 2007年第4期357-359,365,I0003,共5页

目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体,并将其在原核系统内进行表达及纯化。方法:借助计算机预测TCS可能的抗原决定簇(YFF81-83)并设计出适当的突变引物。以栝楼基因组DNA为模板,利用重组PCR技术扩增TCS突变体全长基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶... 目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体,并将其在原核系统内进行表达及纯化。方法:借助计算机预测TCS可能的抗原决定簇(YFF81-83)并设计出适当的突变引物。以栝楼基因组DNA为模板,利用重组PCR技术扩增TCS突变体全长基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态E.coliDH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序。将所获阳性重组质粒转化感受态E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行W estern b lot鉴定。最后用N i-NTA亲和层析柱对所获突变体蛋白进行纯化。结果:成功构建了TCS突变体(TCSYFF81-83ACS),并获得了突变体蛋白在大肠杆菌内的可溶性高效表达,经N i-NTA亲和层析柱纯化后,产生出大量均一的TCS突变体蛋白。结论:TCS的定点突变及其在原核系统内的表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径。 展开更多

关键词 天花粉蛋白 人类免疫缺陷病毒 定点突变 原核表达 纯化

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鼠源性抗人HAAH mAb可变区基因克隆及单链抗体的构建和表达 被引量：2

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作者 汪桦 薛小平 +4 位作者 雷迎峰 宋凯 呼延霆 王伟 杨慧 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期467-470,共4页

目的:从分泌抗人类天冬氨酰基β-羟化酶(HAAH)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞G3/F11中,克隆出鼠源an-ti-HAAH mAb重、轻链可变区基因,构建Anti-HAAH的单链抗体(scFv),并进行scFv基因的蛋白表达。方法:提取杂交瘤细胞G3/F11的总RNA,通过RT-... 目的:从分泌抗人类天冬氨酰基β-羟化酶(HAAH)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞G3/F11中,克隆出鼠源an-ti-HAAH mAb重、轻链可变区基因,构建Anti-HAAH的单链抗体(scFv),并进行scFv基因的蛋白表达。方法:提取杂交瘤细胞G3/F11的总RNA,通过RT-PCR扩增出VH和VL基因;再利用重叠延伸PCR(SOE-PCR),通过设计在引物上的linker序列,将VH和VL拼接为完整anti-HAAHscFv基因。将测序正确的scFv基因克隆入pHEN1载体,并利用E.coliHB2151进行蛋白表达;通过SDS-PAGE,Western blot分析其表达状况,ELISA鉴定其抗原结合活性。结果:测序结果显示,本实验成功地构建出鼠源anti-HAAHVH-linker-VLscFv基因,且VH、VL均具有完整正确的小鼠抗体骨架区和互补决定区结构,所得的scFv基因片段全长744bp,编码248个氨基酸。SDS-PAGE和Westernblot分析表明,pHEN1-anti-HAAH在E.coliHB2151可表达为Mr约27000的可溶性scFv蛋白,表达量为7.8%。间接ELISA检测显示,可溶性鼠源anti-HAAHscFv蛋白具有较高的抗原结合活性。结论:成功扩增出的鼠源anti-HAAHmAbVH区和VL区基因,并构建为anti-HAAHscFv基因。然后,利用pHEN1载体对anti-HAAHscFv基因进行成功表达,为进一步研究其生物活性及应用奠定了基础。 展开更多

关键词 人类天冬氨酰基β-羟化酶 单链抗体 抗体可变区 单克隆抗体 蛋白表达

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