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结核分枝杆菌ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠免疫应答及其保护力 被引量:12
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作者 张海 师长宏 +3 位作者 薛莹 柏银兰 王丽梅 徐志凯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期443-446,共4页
目的:研究结核分枝杆菌(MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护能力。方法:用预先转移到硝酸纤维素膜条的ES-AT6-CFP10融合蛋白采用皮下包埋的方法免疫小鼠。用MTB培养上清滤液蛋白(CFP)作为抗原... 目的:研究结核分枝杆菌(MTB)ESAT6-CFP10融合蛋白诱导的小鼠体液和细胞免疫应答以及对MTB感染小鼠的保护能力。方法:用预先转移到硝酸纤维素膜条的ES-AT6-CFP10融合蛋白采用皮下包埋的方法免疫小鼠。用MTB培养上清滤液蛋白(CFP)作为抗原,用ELISA法测定免疫小鼠血清特异性抗体的滴度。末次免疫后,取部分免疫小鼠脾淋巴细胞,体外用ESAT6-CFP10融合蛋白刺激后,以MTT比色法检测淋巴细胞增殖反应,同时检测免疫小鼠IFN-γ和IL-2水平及脾细胞杀伤效应。另一部分免疫的BALB/c小鼠经尾静脉感染MTB毒株H37Rv,4周后计数脾脏中的细菌数。结果:ESAT6-CFP10融合蛋白免疫小鼠血清特异性抗体的滴度为1∶6400。淋巴细胞刺激增殖指数为1.90±0.15,明显高于生理盐水组(0.90±0.15);IFN-γ和IL-2的含量分别为1.792±19ng/L和0.211±11ng/L,显著高于生理盐水对照组,但不及BCG免疫组;同时融合蛋白诱导的脾细胞杀伤率为36%。与生理盐水免疫组(细菌负荷6.51±0.13)相比较,融和蛋白免疫的BALB/c小鼠,对攻击感染后MTB在脾脏中增殖有显著作用(细菌负荷为5.24±0.15,P<0.05),但与BCG免疫组相比脾脏中细菌负荷减少甚微。结论:ESAT6-CFP10融合蛋白可作为新型结核疫苗的候选组分。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 疫苗 ESAT6 CFP10 重组融合蛋白
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扩增鼠源性mAb和人源性抗体κ轻链基因中引物的作用
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作者 白文涛 阎岩 +6 位作者 徐志凯 吴兴安 王海涛 尹文 赵茜 罗雯 张芳琳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期477-478,共2页
目的比较扩增鼠源性mAb和人源性抗体Vκ基因中引物的作用。方法从5株抗HFRS病毒鼠源性mAb杂交瘤细胞系和人PBL中提取细胞总RNA。逆转录后,用不同的引物进行PCR扩增,克隆后测定核苷酸序列并比较不同引物的作用。结果5株mAb杂交瘤细胞的V... 目的比较扩增鼠源性mAb和人源性抗体Vκ基因中引物的作用。方法从5株抗HFRS病毒鼠源性mAb杂交瘤细胞系和人PBL中提取细胞总RNA。逆转录后,用不同的引物进行PCR扩增,克隆后测定核苷酸序列并比较不同引物的作用。结果5株mAb杂交瘤细胞的Vκ基因及人源性抗体的Vκ基因,需采用不同的引物组合才可得到。结论5'端引物在PCR扩增抗体Vκ基因中起重要作用。 展开更多
关键词 k轻链 基因 聚合酶链反应 抗体 引物
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表达丙型肝炎病毒核心蛋白的人肝癌稳定转染细胞株的建立与鉴定 被引量:2
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作者 乔卿华 吕欣 +7 位作者 雷迎峰 杨敬 姚敏 韩佩君 党品香 赵海卫 翁代慧 尹文 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1137-1141,共5页
目的建立能表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)的人肝癌细胞SMMC-7721的稳定转染细胞株。方法构建含目的基因HCV core的重组质粒,转染HEK293T细胞,包装获得含ZsGreen和HCV core基因的慢病毒后,感染SMMC-7721人肝癌细胞,采用实时荧光定... 目的建立能表达丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV core)的人肝癌细胞SMMC-7721的稳定转染细胞株。方法构建含目的基因HCV core的重组质粒,转染HEK293T细胞,包装获得含ZsGreen和HCV core基因的慢病毒后,感染SMMC-7721人肝癌细胞,采用实时荧光定量PCR检测HCV core mRNA表达,采用免疫荧光细胞化学染色和Western blot法检测HCV core蛋白表达,筛选稳定表达HCV core的细胞株。结果质粒酶切和序列测定证实重组载体构建正确;慢病毒包装48 h后可见清晰ZsGreen表达,感染SMMC-7721细胞后筛选获得稳定转染的细胞株,实时荧光定量PCR检测到HCV core mRNA,免疫荧光细胞化学染色和Western blot法均检测出HCV core蛋白表达。结论成功构建了表达HCV core蛋白的SMMC-7721人肝癌细胞的稳定转染细胞株。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 肝癌细胞株 慢病毒 稳定表达
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Herceptin与卡铂联合应用对宫颈癌细胞的抑制及其机制 被引量:1
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作者 王巍 辛哓燕 +2 位作者 刘玉 李璞媛 丁烨 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2007年第1期47-52,共6页
目的:探讨Herceptin(Her)对宫颈腺癌HeLa、鳞癌SiHa细胞的抑制差异,以及与卡铂(carboplatin,CBP)的协同作用及其机制。方法:以Her5、10、20、40、80μg/ml和CBP0.5、1、2、4、8μg/ml分别组成单药组和Her+CBP联合用药组[(10+1)、(20+2)... 目的:探讨Herceptin(Her)对宫颈腺癌HeLa、鳞癌SiHa细胞的抑制差异,以及与卡铂(carboplatin,CBP)的协同作用及其机制。方法:以Her5、10、20、40、80μg/ml和CBP0.5、1、2、4、8μg/ml分别组成单药组和Her+CBP联合用药组[(10+1)、(20+2)、(40+4)μg/ml],另设不加药对照组,分别作用于HeLa和SiHa细胞。MTT法检测Her对HeLa、SiHa细胞增殖的抑制作用及与CBP的协同作用,透射电镜观察肿瘤细胞的超微结构改变,流式细胞术检测用药后的细胞凋亡率及细胞周期,RT-PCR法检测细胞用药后her-2/neu和rasmRNA的表达,Westernblotting和免疫组化方法检测HER-2/neu和Ras蛋白的表达。结果:Her能明显抑制宫颈癌细胞生长,与CBP联合具有协同作用或相加作用(P<0.05,P<0.01)。Her能诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G1期;与CBP联合作用后凋亡率更高,使细胞周期进一步阻滞于G2期,同时降低S期比例。用药后her-2/neu和rasmRNA及其蛋白的表达也显著降低(P<0.05)。药物的抑制作用在宫颈腺癌Hela细胞中更明显些。结论:Her单药或与CBP联合应用能明显抑制宫颈癌HeLa、SiHa细胞生长,Her与CBP的协同作用与细胞周期的双重阻滞有关,且在腺癌HeLa细胞中更明显;Her通过抑制Ras/MAPK通路抑制宫颈癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 HERCEPTIN HER-2/NEU RAS 卡铂 宫颈癌细胞
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