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尖锐湿疣和寻常疣患者外周血T细胞亚群及细胞因子水平的检测 被引量:20
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作者 顾群 孙脊峰 +5 位作者 余春艳 王莉 柴青焕 王惠萍 刘娟 卫峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期397-397,共1页
关键词 尖锐湿疣 寻常疣 T细胞亚群 白细胞介素-2受体 肿瘤坏死因子-α
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提高尿毒症维持性血液透析患者生活质量初探 被引量:20
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作者 王莉 杨洁 +3 位作者 孙脊峰 李占亭 王惠萍 柴青焕 《解放军护理杂志》 2003年第8期90-91,共2页
血液透析是尿毒症患者重要的肾脏替代疗法,在血液透析时医护人员全面系统的健康教育,家庭社会充分理解和支持,患者积极参与社会活动是提高患者生活质量的有效途径。
关键词 尿毒症 维持性血液透析 生活质量 肾脏替代疗法 健康教育 心理指导 用药指导
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抗人精浆蛋白单抗κ链基因的克隆及其在HeLa细胞的表达 被引量:3
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作者 杨洁 郝晓柯 +6 位作者 张盈华 孙脊峰 赵晶 许彦鸣 金明 王成济 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期110-112,共3页
目的  获得鼠抗人精浆蛋白单抗(mAb)κ链基因,并将其转染到HeLa细胞进行表达。方法 从分泌抗人精浆蛋白mAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA,用RT-PCR法获取κ链cDNA。将其克隆入真核表达载体pcDN... 目的  获得鼠抗人精浆蛋白单抗(mAb)κ链基因,并将其转染到HeLa细胞进行表达。方法 从分泌抗人精浆蛋白mAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA,用RT-PCR法获取κ链cDNA。将其克隆入真核表达载体pcDNA3,用脂质体转染法转染HeLa细胞,并用免疫荧光染色法检测κ链的表达。结果从分泌抗人精浆蛋白的鼠mAb杂交瘤细胞系E4B7中克隆了κ链基因。序列测定表明,Vκ属于鼠免疫球蛋白ⅩⅢ家族。以含κ链基因的真核表达载体pcDNA3-E4B7κ转染HeLa细胞后,在HeLa细胞中检测到了κ链的表达。结论 获得了序列正确的κ链基因,并在HeLa细胞中成功地表达,为进一步构建和表达Fab段打下了良好基础。 展开更多
关键词 抗人精浆蛋白单克隆抗体 κ链基因 克隆 HELA细胞 基因表达
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慢性肾衰血透患者TTV检测及其与细胞免疫功能的关系 被引量:2
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作者 孙脊峰 傅恩清 +4 位作者 焦凯 李占亭 王莉 王惠萍 李光荫 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期242-245,共4页
目的 观察慢性肾衰 (CRF)血液透析 (HD)患者中 ,输血传播病毒 (TTV)的感染与患者细胞免疫功能的关系。方法 应用巢式逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR) ,双抗体夹心ELISA法及流式细胞仪 ,分别检测了 90例CRF血透患者和 12 8例对照组血清T... 目的 观察慢性肾衰 (CRF)血液透析 (HD)患者中 ,输血传播病毒 (TTV)的感染与患者细胞免疫功能的关系。方法 应用巢式逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR) ,双抗体夹心ELISA法及流式细胞仪 ,分别检测了 90例CRF血透患者和 12 8例对照组血清TTV DNA ,可溶性白细胞介素 2受体 (sIL 2R)和外周血T淋巴细胞亚群。并随机选择对其中1株TTV的部分基因序列进行测定 ,分析TTV与细胞免疫功能、输血次数、HD时间和肝功能的关系。结果 ⑴ 90例CRF血透患者中 ,TTV DNA阳性率为 46 6 7% ,明显高于正常对照组 (P <0 0 0 1) ,与日本报道的TTV DNA序列(AB0 0 8394)相应片段的同源性为 98 5 %。⑵CRF血透患者血清中 ,sIL 2R水平明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ;CD3+,CD4+和CD4+/CD8+T细胞比例明显降低 (P <0 0 1)。⑶TTV DNA阳性率与sIL 2R、输血次数及HD时间呈显著的正相关 (r =0 486 ,P <0 0 1;r =0 .5 86 ,P <0 0 0 1;r =0 492 ,P <0 0 1) ,与CD+,CD4+和CD4+/CD8+T细胞比例呈负相关 (r = 0 476 ,P <0 0 1;r = 0 483,P <0 0 1;r= 0 496 ,P <0 0 1) ,而与年龄、性别及手术史均无显著的差别和相关性。结论 CRF血透患者有严重的TTV感染 ; 展开更多
关键词 慢性肾功能衰竭 TTV 细胞免疫功能 血液透析
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抗人精浆蛋白抗体Fab片段在大肠杆菌中表达及活性鉴定 被引量:1
5
作者 孙脊峰 杨洁 +5 位作者 郝晓柯 赵晶 温伟红 金明 王成济 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期483-485,共3页
目的 :构建编码抗人精浆蛋白抗体Fab基因的表达载体 ,并在大肠杆菌中进行表达。方法 :从克隆载体pUC19 К和pBluescriptKS(M13 ) Fd中 ,酶切获得抗人精浆蛋白单克隆抗体 (mAb)Fd基因和К链基因。然后将Fd和К链基因重组到Fab表达载体pC... 目的 :构建编码抗人精浆蛋白抗体Fab基因的表达载体 ,并在大肠杆菌中进行表达。方法 :从克隆载体pUC19 К和pBluescriptKS(M13 ) Fd中 ,酶切获得抗人精浆蛋白单克隆抗体 (mAb)Fd基因和К链基因。然后将Fd和К链基因重组到Fab表达载体pComb3中 ,构建抗人精浆蛋白Fab基因的重组表达载体pComb3 Fab ,并在XL1 Blue菌中表达。结果 :经重组表达载体转化的XL1 Blue菌株可表达Fab基因。Westernblot和免疫细胞化学分析表明 ,表达产物Fab具有特异性结合精浆蛋白的活性。结论 :抗人精浆蛋白Fab基因成功地获得 ,为进一步将其与抗肿瘤药物偶联用于前列腺癌的导向治疗创造了条件。表达为构建其它基因工程抗体提供了基础。 展开更多
关键词 单克隆抗体 FAB 人精浆蛋白 大肠杆菌 活性鉴定
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r-HuEPO对慢性肾衰患者红细胞免疫功能的影响 被引量:1
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作者 孙脊峰 刘存亮 +4 位作者 杨吉亮 舒启银 欧阳国义 李家寨 伍瑞红 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期266-266,共1页
关键词 慢性肾功能衰竭 红细胞免疫功能 基因重组人类红细胞生成素
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Raf-1磷脂酸结合结构域(Raf-1-PABD)融合蛋白的表达及其对细胞内磷脂酸的示踪作用
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作者 杨峰 孙文娟 +3 位作者 李占亭 杜德伟 张永平 孙脊峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1256-1260,共5页
目的构建示踪细胞内磷脂酸的工具。方法人Raf-1基因磷脂酸结合结构域(Raf-1-PABD)能特异性结合磷脂酸,通过PCR和酶切Raf-1-PABD序列,并连接至带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签的载体,测序鉴定正确后,细胞转染pc DNA3.0-mito PLD-HA质... 目的构建示踪细胞内磷脂酸的工具。方法人Raf-1基因磷脂酸结合结构域(Raf-1-PABD)能特异性结合磷脂酸,通过PCR和酶切Raf-1-PABD序列,并连接至带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签的载体,测序鉴定正确后,细胞转染pc DNA3.0-mito PLD-HA质粒表达线粒体磷脂酶D(mito PLD)产生大量磷脂酸,同时以Raf-1-PABD-EGFP融合蛋白结合产生的磷脂酸以示踪细胞内磷脂酸的量以及细胞内磷脂酸的改变。结果重组工具载体p EGFP-C1-Raf-1-PABD(磷脂酸结合蛋白)构建并成功表达,可示踪线粒体融合过程中磷脂酸的改变。结论成功构建了示踪细胞内磷脂酸水平的p EGFP-C1-Raf-1-PABD的载体,将其转染NIH3T3细胞进行表达,可用于细胞内线粒体中磷脂酸的示踪。 展开更多
关键词 RAF-1 磷脂酸 急性肾损伤 败血症
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HRE/CMV启动子的克隆和缺氧调控活性的测定
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作者 杨洁 杜德伟 +5 位作者 李占亭 贾林涛 赵晶 许彦鸣 杨安钢 孙脊峰 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期2432-2435,共4页
目的:将具有缺氧调控作用的多种缺氧反应元件(HRE)与CMV启动子组合,以获得缺氧应答启动子。将荧光素酶报告基因置于缺氧应答启动子的下游,通过检测荧光素酶活性的方法,方便地研究缺氧应答启动子缺氧诱导的作用。方法:合成多种HRE核苷酸... 目的:将具有缺氧调控作用的多种缺氧反应元件(HRE)与CMV启动子组合,以获得缺氧应答启动子。将荧光素酶报告基因置于缺氧应答启动子的下游,通过检测荧光素酶活性的方法,方便地研究缺氧应答启动子缺氧诱导的作用。方法:合成多种HRE核苷酸序列,并设立HRE突变对照,克隆入pCI-neo中,构建HRE/CMV启动子。扩增HRE/CMV序列,定向亚克隆入pGL3-Basic中,获得HRE/CMV荧光素酶报告载体。瞬时转染HeLa细胞,在0.1%O2环境下培养细胞,并设立正常氧分压环境对照。检测荧光素酶的相对活性。结果:成功构建了HRE/CMV荧光素酶报告载体,其中mPGK-HRE/CMV载体表现出很好的缺氧诱导作用和高水平的表达。结论:mPGK-HRE/CMV启动子能够有效地进行缺氧诱导和调控工作。 展开更多
关键词 缺氧反应元件 荧光素酶 基因 报告
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