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人骨髓间质干细胞作为骨、软骨组织工程种子细胞的实验研究 被引量:25
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作者 庞永刚 崔鹏程 +1 位作者 陈文弦 曹云新 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期306-309,共4页
目的 :探讨经体外扩增、诱导分化的人骨髓间质干细胞(humanbonemarrowmesenchymalstemcells,hMSC)作为组织工程化骨、软骨种子细胞的可行性。方法 :体外分离、培养、扩增hMSC ,以流式细胞仪检测hMSC的表面抗原。诱导hMSC向成骨细胞、软... 目的 :探讨经体外扩增、诱导分化的人骨髓间质干细胞(humanbonemarrowmesenchymalstemcells,hMSC)作为组织工程化骨、软骨种子细胞的可行性。方法 :体外分离、培养、扩增hMSC ,以流式细胞仪检测hMSC的表面抗原。诱导hMSC向成骨细胞、软骨细胞分化。以倒置显微镜和电子显微镜观察细胞的形态 ;以组织化学、免疫组织化学和RT PCR ,检测成骨细胞、软骨细胞的特异性标志物。结果 :分离得到的细胞可表达hMSC的特异抗原 ,在体外扩增 15代以上 ,其形态及表面抗原保持不变。成骨诱导培养的细胞上清液中ALP的含量高于对照组 (P <0 .0 5 )。成骨及成软骨诱导的细胞形态均由成纤维样梭形向多边形转变。透射电镜观察可见大量扩张的粗面内质网、高尔基体及线粒体。扫描电镜观察可见经成骨诱导后的细胞表面有钙盐沉积 ,成软骨诱导的细胞表面有胶原样突起。成骨诱导培养后 ,可见碱性磷酸酶 (ALP)染色、Ca结节染色、胶原 Ⅰ (COL Ⅰ )及骨钙素 (osteocalcin ,OC)免疫组化染色阳性 ,同时RT PCR检测COL Ⅰ、OCmRNA表达阳性。成软骨诱导后 ,甲苯胺蓝染色见细胞周围有大量的异染性基质 ,免疫组化和RT PCR检测COL Ⅱ表达阳性。结论 :hMSC在体外可大量扩增。在特定培养液诱导下 ,可向成骨细胞及软骨细胞转化 ,可作为骨。 展开更多
关键词 间质干细胞 成骨细胞 软骨细胞 骨髓 组织工程
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HSV-tk/GCV自杀基因系统对喉癌细胞杀伤作用的体外研究 被引量:3
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作者 刘志 成诗银 鱼兵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期582-585,共4页
目的 研究逆转录病毒介导的HSV tk/GCV系统对人喉癌细胞的体外杀伤作用。方法 构建携带HSV tk基因的逆转录病毒载体 ,并以该重组逆转录病毒感染人喉癌细胞Hep 2。以G4 18筛选的抗性克隆 (命名为Hep 2 /tk) ,用MTT比色法观察GCV在体外... 目的 研究逆转录病毒介导的HSV tk/GCV系统对人喉癌细胞的体外杀伤作用。方法 构建携带HSV tk基因的逆转录病毒载体 ,并以该重组逆转录病毒感染人喉癌细胞Hep 2。以G4 18筛选的抗性克隆 (命名为Hep 2 /tk) ,用MTT比色法观察GCV在体外对Hep 2 /tk细胞的杀伤作用。结果 Hep 2 /tk细胞与未转染tk基因的Hep 2 /0、Hep 2细胞相比较 ,三者的生长速度无明显差别。Hep 2 /tk细胞对GCV高度敏感 ,即低浓度GCV(0~ 1mg/L)处理Hep 2 /tk细胞 7d,可将其大部分细胞杀死 ,增加GCV的浓度 (>1mg/L)不能显著增强其对Hep 2 /tk细胞的杀伤作用。 结论 人喉癌细胞Hep 2对HSV tk/GCV系统高度敏感 。 展开更多
关键词 HSV-TK/GCV自杀基因系统 喉癌 细胞杀伤作用 体外研究 基因治疗 更昔洛韦
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人端粒酶催化亚基基因启动子调控的表达载体的构建 被引量:4
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作者 韩明鲲 张惠中 成诗银 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期384-386,共3页
目的:构建人端粒酶催化亚基(humantelomerase reversetranscriptase,hTERT)基因的核心启动子调控的荧光素酶报告载体,检测其在肿瘤细胞及正常细胞中表达的差异。方法:提取人HeLa细胞的基因组,利用PCR技术克隆hTERT基因的核心启动子。将... 目的:构建人端粒酶催化亚基(humantelomerase reversetranscriptase,hTERT)基因的核心启动子调控的荧光素酶报告载体,检测其在肿瘤细胞及正常细胞中表达的差异。方法:提取人HeLa细胞的基因组,利用PCR技术克隆hTERT基因的核心启动子。将其插入荧光素酶报告载体中,经SacI和HindIII酶切和PCR鉴定后,转染肿瘤细胞及正常细胞,观察两种细胞中荧光素酶基因表达的差异。结果:hTERT基因的启动子调控的表达载体在肿瘤细胞中呈高效表达;而在正常细胞中的表达极低。结论:hTERT基因的启动子具有肿瘤特异性,有可能解决肿瘤基因治疗中的靶向性问题。 展开更多
关键词 端粒酶催化亚基 启动子 荧光素酶基因表达载体
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鼻及鼻窦内翻性乳头状瘤临床表现和人乳头状瘤病毒基因分析研究 被引量:5
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作者 陈勇挺 陈文弦 《实用医学杂志》 CAS 2005年第2期144-145,共2页
目的:回顾分析鼻及鼻窦内翻性乳头状瘤治疗经验和研究人乳头状瘤病毒基因(HPVDNA)与乳头状瘤预后关系。方法:总结我院15年来30例鼻及鼻窦内翻性乳头状瘤的临床资料。用PCR方法检测其中21例石蜡包埋组织中HPVDNA。结果:30例鼻及鼻窦内翻... 目的:回顾分析鼻及鼻窦内翻性乳头状瘤治疗经验和研究人乳头状瘤病毒基因(HPVDNA)与乳头状瘤预后关系。方法:总结我院15年来30例鼻及鼻窦内翻性乳头状瘤的临床资料。用PCR方法检测其中21例石蜡包埋组织中HPVDNA。结果:30例鼻及鼻窦内翻性乳头状瘤中11例(36.6%)为复发性乳头状瘤,9例(30%)乳头状瘤癌变,全部采用手术治疗,癌变者配合放疗,随访1~3年11例未见复发,2例复发后再次手术,3例术后3个月至2年复发后癌变。3例癌变3年仍存活,2例全身转移死亡。21例HPVDNA阳性15例,其中HPV16阳性6例,癌变中HPV阳性5例,全部HPV16型,3例复发癌变者癌变前后HPV16皆为阳性。结论:鼻及鼻窦内翻性乳头状瘤应彻底手术切除以减少复发及癌变。HPV感染与鼻及鼻窦乳头状瘤发病有关,HPV16与恶性转化有密切关系。 展开更多
关键词 癌变 鼻窦内翻性乳头状瘤 阳性 复发 HPVDNA 人乳头状瘤病毒 HPV16 基因分析 PCR方法 存活
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浅谈护士长的人际关系技巧 被引量:3
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作者 戴辉娟 伍军姣 张燕 《解放军护理杂志》 2002年第4期59-59,共1页
科护士长作为医院中的基层领导者,起着承上启下的关键作用.她接触广泛,工作繁杂,在工作中担任各种角色.从某种程度上讲,护士长的工作即是协调好人际关系,保证各部门密切合作,以提高护理质量.笔者从事护士长工作10年来,在人际关系方面,... 科护士长作为医院中的基层领导者,起着承上启下的关键作用.她接触广泛,工作繁杂,在工作中担任各种角色.从某种程度上讲,护士长的工作即是协调好人际关系,保证各部门密切合作,以提高护理质量.笔者从事护士长工作10年来,在人际关系方面,试着将科学的管理理论运用其中,取得了一些成功经验.现仅就工作中主要的三种人际关系浅谈如下: 展开更多
关键词 护理管理 管理技巧 护士长 人际关系
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HSV-tk、重组人IL-2、TNF-α融合基因对喉癌细胞Hep-2杀伤作用的体外研究 被引量:1
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作者 成诗银 张惠中 鱼兵 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第2期85-89,共5页
目的:观察自杀基因HSV-tk与不同细胞因子基因(IL-2、TNF-α)构建的不同融合基因表达产物对喉癌细胞系的体外杀伤作用。方法:分别构建不同融合基因逆转录表达载体PL(TI)SN,PL(N)SN,PL(TK)SN,在LipofectAMINETM2000介导下转染PA317包装细... 目的:观察自杀基因HSV-tk与不同细胞因子基因(IL-2、TNF-α)构建的不同融合基因表达产物对喉癌细胞系的体外杀伤作用。方法:分别构建不同融合基因逆转录表达载体PL(TI)SN,PL(N)SN,PL(TK)SN,在LipofectAMINETM2000介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,用NIH3T3测定病毒滴度,将各重组病毒分别感染人喉癌细胞系Hep-2,G418筛选出抗性克隆,分别命名为Hep/TI,Hep/TT,Hep/TK,以RT-PCR及Southern blot检测各融合基因的整合及表达。通过观察各基因修饰细胞生长状况及GCV杀伤实验鉴定融合基因的表达及杀伤效应。结果:RT-PCR及South-ern blot分析证明各重组外源基因在人喉癌细胞系Hep-2中均有整合及表达。Hep/TI,HeP/TK生长速度无明显差别,Hep/TT细胞增殖速度受到抑制。在GCV杀伤试验中,Hep/TI,Hep/TT,Hep/TK均显示出对GCV的高敏感性,其中GCV对Hep/TT的杀伤作用最为明显,各基因修饰细胞与不同比例亲本细胞混合,均显示出明显旁观者效应。结论:自杀基因与细胞因子基因共表达体系对喉癌细胞系Hep-2体外杀伤具有协同作用,并且有明显的旁观者效应,可望成为肿瘤基因治疗的新途径。 展开更多
关键词 HEP-2 杀伤作用 喉癌 HSV-TK基因 细胞因子 基因治疗
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Survivin基因的克隆及其反义核酸对人喉癌细胞系的作用 被引量:1
7
作者 郭万宏 李津樱 +1 位作者 何端军 陈文弦 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第7期1030-1032,共3页
目的:克隆survivin基因并鉴定,初步探讨survivin基因反义核酸(AS-ODN)对人喉癌细胞系的生长抑制作用。方法:从培养的人喉癌Hep-2细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得survivin基因;将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,进行测序鉴定。以高表达surv... 目的:克隆survivin基因并鉴定,初步探讨survivin基因反义核酸(AS-ODN)对人喉癌细胞系的生长抑制作用。方法:从培养的人喉癌Hep-2细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得survivin基因;将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,进行测序鉴定。以高表达survivin基因的人喉癌细胞系Hep-2为靶细胞、survivin基因AS-ODN为阻断剂,通过MTT试验观察AS-ODN对喉癌细胞的生长抑制作用,RT-PCR分析survivin基因AS-ODN对survivin基因表达的影响。结果:DNA测序结果证明,获得了survivin基因,其序列与GenBank中报道序列完全一致;MTT试验及RT-PCR分析表明,Hep-2在AS-ODN作用下,细胞数量明显减少,survivin基因AS-ODN明显抑制了喉癌细胞Hep-2的生长及其survivin基因的表达(P<0.05)。结论:Survivin基因的克隆获得了成功,为进一步探讨survivin基因在喉癌及其他恶性肿瘤诊断和治疗中的应用奠定了基础。Survivin基因AS-ODN对人喉癌细胞的生长可能起十分重要的抑制作用,有望成为喉癌基因治疗的新靶点。 展开更多
关键词 喉肿瘤 SURVIVIN基因 RT—PCR 反义核酸 细胞系
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肾上腺素鼓室注射佐治分泌性中耳炎疗效观察 被引量:1
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作者 赵映秋 李术芹 +1 位作者 张丽 张燕 《护理学杂志》 2005年第8期41-42,共2页
目的观察肾上腺素鼓室注射佐治分泌性中耳炎的疗效。方法将130例(216耳)分泌性中耳炎患者随机分为治疗组88例(144耳)和对照组42例(72耳)。治疗组采用地塞米松、α糜蛋白酶、肾上腺素混合液行鼓室内注射;对照组仅采用地塞米松、α糜蛋白... 目的观察肾上腺素鼓室注射佐治分泌性中耳炎的疗效。方法将130例(216耳)分泌性中耳炎患者随机分为治疗组88例(144耳)和对照组42例(72耳)。治疗组采用地塞米松、α糜蛋白酶、肾上腺素混合液行鼓室内注射;对照组仅采用地塞米松、α糜蛋白酶混合液进行鼓室内注射。治疗1 个月、6 个月后观察疗效。结果治疗1 个月后有效率治疗组为93.06%,对照组为69.44%,均未发现不良反应。两组治疗1 个月、6 个月后总有效率比较,差异有显著性意义(均P<0.01)。结论地塞米松、α糜蛋白酶、肾上腺素三药联合行鼓室注射可提高分泌性中耳炎的治愈率,且安全可靠。 展开更多
关键词 分泌性中耳炎 鼓室注射 疗效观察 佐治 Α-糜蛋白酶 肾上腺素混合液 鼓室内注射 地塞米松 对照组 治疗组 观察疗效 不良反应 安全可靠 有效率 未发现 显著性 治愈率
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黏膜免疫在中耳炎及其防治中的作用
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作者 任晓勇 崔鹏程 许珉 《医学研究生学报》 CAS 2004年第11期1027-1030,共4页
中耳系统感染引起的炎症病理过程受到多种因素的影响 ,其中中耳黏膜的免疫功能在这一过程中扮演了重要角色。作者就黏膜免疫、细胞因子在中耳炎病理变化中的作用机制以及在中耳炎防治中的应用作一综述。
关键词 中耳炎 黏膜免疫 细胞因子
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