目的:构建miR-21的真核表达载体,并使其在骨肉瘤MG63细胞中表达,为研究miR-21对骨肉瘤细胞MG63的作用打下基础。方法:根据miRNA的成熟序列以及附近约200多碱基共433个碱基序列,设计PCR引物,PCR扩增,退火后用T4连接到线性化的pcDNA3.1(+...目的:构建miR-21的真核表达载体,并使其在骨肉瘤MG63细胞中表达,为研究miR-21对骨肉瘤细胞MG63的作用打下基础。方法:根据miRNA的成熟序列以及附近约200多碱基共433个碱基序列,设计PCR引物,PCR扩增,退火后用T4连接到线性化的pcDNA3.1(+)质粒中,并对重组质粒进行双酶切、菌落PCR及测序分析,鉴定完全正确的重组质粒转染骨肉瘤细胞MG63,G418(400 mg/L)筛选4周获得miR-21稳定表达细胞系,用Northern blot及real time RT-RCR法鉴定pcDNA3.1(+)-miR-21可在真核细胞中过表达。结果:成功构建了miR-21的真核表达载体,并获得稳定转染重组质粒的细胞系。结论:miR-21的真核表达载体在骨肉瘤细胞MG63中稳定高表达,为进一步研究miR-21在骨肉瘤MG63中的功能及基因调控机制奠定了实验基础。展开更多
随着骨肿瘤保肢技术的不断提高,处理肿瘤术后骨缺损以防病理性骨折的发生已越来越受到重视.为使骨缺损修复材料既具有较好的生物力学性能及组织相容性,又具备骨诱导和骨引导能力,我院骨肿瘤研究所经过大量的实验研究,将异体脱钙骨基质骨...随着骨肿瘤保肢技术的不断提高,处理肿瘤术后骨缺损以防病理性骨折的发生已越来越受到重视.为使骨缺损修复材料既具有较好的生物力学性能及组织相容性,又具备骨诱导和骨引导能力,我院骨肿瘤研究所经过大量的实验研究,将异体脱钙骨基质骨粒(decalcified bone matrix,DBM)和骨水泥(bone cement,BC)复合制成生物性骨缺损修复材料,用于骨缺损修复重建.经过临床应用发现,病理性骨折及并发症极少发生,而且异体脱钙骨基质骨粒复合骨水泥材料具有结构合理及良好的赋行性和组织相容性,制备简单,成本较低等优点,可为修复部位提供较为坚固的生物力学支持,是进行骨缺损修复的可行途径[1,2].展开更多
文摘目的:构建miR-21的真核表达载体,并使其在骨肉瘤MG63细胞中表达,为研究miR-21对骨肉瘤细胞MG63的作用打下基础。方法:根据miRNA的成熟序列以及附近约200多碱基共433个碱基序列,设计PCR引物,PCR扩增,退火后用T4连接到线性化的pcDNA3.1(+)质粒中,并对重组质粒进行双酶切、菌落PCR及测序分析,鉴定完全正确的重组质粒转染骨肉瘤细胞MG63,G418(400 mg/L)筛选4周获得miR-21稳定表达细胞系,用Northern blot及real time RT-RCR法鉴定pcDNA3.1(+)-miR-21可在真核细胞中过表达。结果:成功构建了miR-21的真核表达载体,并获得稳定转染重组质粒的细胞系。结论:miR-21的真核表达载体在骨肉瘤细胞MG63中稳定高表达,为进一步研究miR-21在骨肉瘤MG63中的功能及基因调控机制奠定了实验基础。
文摘随着骨肿瘤保肢技术的不断提高,处理肿瘤术后骨缺损以防病理性骨折的发生已越来越受到重视.为使骨缺损修复材料既具有较好的生物力学性能及组织相容性,又具备骨诱导和骨引导能力,我院骨肿瘤研究所经过大量的实验研究,将异体脱钙骨基质骨粒(decalcified bone matrix,DBM)和骨水泥(bone cement,BC)复合制成生物性骨缺损修复材料,用于骨缺损修复重建.经过临床应用发现,病理性骨折及并发症极少发生,而且异体脱钙骨基质骨粒复合骨水泥材料具有结构合理及良好的赋行性和组织相容性,制备简单,成本较低等优点,可为修复部位提供较为坚固的生物力学支持,是进行骨缺损修复的可行途径[1,2].
