晚期正常妊娠及妊娠高血压综合征患者血浆、脐血和胎盘组织中心钠素水平及其意义 被引量：3

1

作者 杨梦庚 张利朝 +5 位作者 梁国楝 姚元庆 曹光玉 王金声 邱学华 尹国武 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 1993年第2期284-284,251,共2页

为了探讨心钠素(ANP)在正常妊娠及妊娠高血压综合征(简称妊高征)中的病理生理意义,我院进行了临床和实验系列研究,并应用人工固相合成的高活性ANP(24 A.MW=2550 d)治疗妊高征取得显效。

关键词 妊娠 妊娠高血压 心钠素 血液 胎盘

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非小细胞肺癌患者高温射频治疗前、后免疫功能的变化 被引量：13

2

作者 张卫强 程庆书 +3 位作者 王云杰 刘锟 殷缨 付勇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期144-145,148,共3页

目的研究非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者高温射频（ＲＦＡ）治疗前、后机体免疫功能的变化。方法　ＣＴ引导下经皮肺穿刺可伸展锚状电极配合ＲＦ－２０００射频治疗仪高温射频消融，治疗ＮＳＣＬＣ患者３０例。采用流式细胞术及双抗体... 目的研究非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）患者高温射频（ＲＦＡ）治疗前、后机体免疫功能的变化。方法　ＣＴ引导下经皮肺穿刺可伸展锚状电极配合ＲＦ－２０００射频治疗仪高温射频消融，治疗ＮＳＣＬＣ患者３０例。采用流式细胞术及双抗体夹心法，检测治疗前、后外周血Ｔ细胞亚群（ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋）、ＮＫ细胞的百分率及ｓＩＬ－２Ｒ含量的变化。采用ＬＤＨ释放法检测ＮＫ细胞的杀伤活性。结果治疗前ＮＳＣＬＣ患者外周血中ＣＤ３＋、ＣＤ４＋细胞的百分率及ＣＤ４＋／　ＣＤ８＋细胞的比值降低，ＮＫ细胞的百分率和ＮＫ细胞杀伤活性亦降低，与对照组相比较差异显著　（Ｐ＜０．０１）。ＣＤ８＋细胞的百分率及ｓＩＬ－２Ｒ含量明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），提示患者处于免疫抑制状态。治疗后免疫抑制减轻，ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＮＫ细胞的百分率及ＣＤ４＋／ＣＤ８＋细胞的比值明显升高，ＮＫ细胞杀伤活性也升高，而ＣＤ８＋细胞的百分率及ｓＩＬ－２Ｒ的含量明显降低，治疗前、后相比较差别明显　（Ｐ＜０．０１）。结论　锚状电极高温射频消融具有免疫激活作用，可使机体的免疫功能得到一定程度的改善。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 锚状电极 高温射频消融 T细胞亚群 NK细胞 NK细胞杀伤活性 治疗 免疫功能

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恶性肿瘤患者巨噬细胞淋巴细胞及红细胞免疫功能的研究 被引量：11

3

作者 张盈华 殷缨 +4 位作者 张惠中 张利朝 郝晓柯 邹爱民 陶秦渝 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期501-503,共3页

目的:通过对巨噬细胞、T淋巴细胞和红细胞免疫功能的检测,探讨恶性肿瘤患者三类细胞免疫检查的临床意义。方法:应用流式细胞仪检测荧光阳性的巨噬细胞数来测定巨噬细胞吞噬率;应用针对CD系列的单克隆抗体作流式细胞仪分析,检测T细胞亚群... 目的:通过对巨噬细胞、T淋巴细胞和红细胞免疫功能的检测,探讨恶性肿瘤患者三类细胞免疫检查的临床意义。方法:应用流式细胞仪检测荧光阳性的巨噬细胞数来测定巨噬细胞吞噬率;应用针对CD系列的单克隆抗体作流式细胞仪分析,检测T细胞亚群CD4和CD8的百分率及其比值;应用免疫粘附酵母菌花环法检测红细胞免疫功能。结果:肿瘤组的巨噬细胞吞噬率、T淋巴细胞和红细胞免疫功能均显著低于健康对照组,两组间有显蓍性差异(P<0.05)。巨噬细胞吞噬率与CD4/CD8比值、红细胞免疫RBC-C3bRR及RBC-ICR均有显著正相关性,P=0.01。结论:恶性肿瘤患者巨噬细胞、T淋巴细胞和红细胞免疫功能均有显著降低,对于肿瘤患者的诊治有一定的意义。 展开更多

关键词 恶性肿瘤 流式细胞仪 巨噬细胞 淋巴细胞 红细胞

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健康人跑步前后红细胞免疫功能的变化 被引量：11

4

作者 陈渝宁 张盈华 +3 位作者 张利朝 邓贤碧 殷缨 陶秦渝 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期226-227,共2页

观察了短时间跑步对健康人红细胞免疫功能的影响。结果显示：跑步后即刻红细胞C3b受体花环率（BBC－C3bRR）及红细胞免疫复合物花环率（RBC－ICR）显著高于跑步前（P＜0．01），结果表明短时间跑步可提高红细胞免疫粘附能力，对于提高... 观察了短时间跑步对健康人红细胞免疫功能的影响。结果显示：跑步后即刻红细胞C3b受体花环率（BBC－C3bRR）及红细胞免疫复合物花环率（RBC－ICR）显著高于跑步前（P＜0．01），结果表明短时间跑步可提高红细胞免疫粘附能力，对于提高机体免疫功能（红细胞免疫）有其重要的价值。 展开更多

关键词 健康人 跑步 红细胞免疫

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抗人精浆蛋白单链抗体基因的构建及序列分析 被引量：7

5

作者 武国军 郝晓柯 +4 位作者 白玉杰 药立波 张盈华 范金水 季少平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第3期191-194,共4页

目的：构建抗人精浆蛋白的单链抗体基因，可为进一步构建、表达抗人精浆蛋白单链抗体／羧肽酶Ａ融合蛋白，用于前列腺癌的抗体导向酶－前体药物疗法奠定基础。方法：利用加端ＰＣＲ技术，在已克隆的抗人精浆蛋白单克隆抗体ＶＨ和Ｖκ基... 目的：构建抗人精浆蛋白的单链抗体基因，可为进一步构建、表达抗人精浆蛋白单链抗体／羧肽酶Ａ融合蛋白，用于前列腺癌的抗体导向酶－前体药物疗法奠定基础。方法：利用加端ＰＣＲ技术，在已克隆的抗人精浆蛋白单克隆抗体ＶＨ和Ｖκ基因两端加上限制性酶切位点，再分别克隆入载体ｐＵＣ１９－ｌｉｎｋｅｒ中，构建ＶＨ－ｌｉｎｋｅｒ－Ｖκ形式的Ｅ４Ｂ７单链抗体基因。利用全自动荧光测序仪测定其序列，采用ＰＣ／Ｇｅｎｅ软件与已知的ＶＨ和Ｖκ基因进行核苷酸序列的同源性比较，并推导其编码的氨基酸序列。结果：Ｅ４Ｂ７单链抗体基因全长为７４１ｂｐ，为一开放读框，编码２４７个氨基酸，与已知的抗人精浆蛋白单克隆抗体ＶＨ和Ｖκ基因完全同源。ＶＨ和Ｖκ间有４５ｂｐ的ｌｉｎｋｅｒ序列，推导的氨基酸序列为（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３，与设计的序列相符。结论：构建成功序列正确的抗人精浆蛋白单链抗体基因，为构建。 展开更多

关键词 单链抗体 基因克隆 测序 前列腺肿瘤 精浆蛋白

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皮肤病患者IL-2R、T细胞亚群及红细胞免疫功能的测定及分析 被引量：11

6

作者 余春艳 张立朝 +1 位作者 顾群 陶秦瑜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期195-196,共2页

目的研究某些皮肤病中细胞免疫功能改变情况。方法采用双抗体夹心ELISA法检测血清可溶性白细胞介素2受体SIL2R,流式细胞仪测定外周血T淋巴细胞亚群D3+、CD4+、CD8+,及红细胞C3b受体花环RBCC3bRR和红细胞免疫复合物花环RBCICR试验... 目的研究某些皮肤病中细胞免疫功能改变情况。方法采用双抗体夹心ELISA法检测血清可溶性白细胞介素2受体SIL2R,流式细胞仪测定外周血T淋巴细胞亚群D3+、CD4+、CD8+,及红细胞C3b受体花环RBCC3bRR和红细胞免疫复合物花环RBCICR试验。结果皮肤病组SIL2R明显高于正常组P0.01,T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+与正常组比较明显降低P0.01,CD4+/CD8+与正常组比较降低P0.05,RBCC3bRR较正常组明显降低P0.01,RBCICR与正常组比较明显增高P0.01。结论某些皮肤病中存在细胞免疫功能改变。 展开更多

关键词 皮肤病 白细胞介素2受体 T细胞亚群 红细胞免疫

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乳腺癌组织中孕激素受体与雌激素受体DNA结合功能关系的研究 被引量：10

7

作者 杨红斌 付京 +3 位作者 张盈华 郝新保 邱福海 张利朝 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 1999年第10期743-746,共4页

目的：观察３６ 例（Ｅ２ ＋ ） 乳腺癌患者组织ＰＲ 和ＥＲ ＤＮＡ 结合功能的关系，进而探讨（Ｅ２ ＋ ／ＰＲ＋ ） 表型内分泌治疗无反应的分子机制。方法：用激素结合法和迁移率改变法。结果：１） 用含有ＥＲ 的ＭＣＦ－ ７ 细胞... 目的：观察３６ 例（Ｅ２ ＋ ） 乳腺癌患者组织ＰＲ 和ＥＲ ＤＮＡ 结合功能的关系，进而探讨（Ｅ２ ＋ ／ＰＲ＋ ） 表型内分泌治疗无反应的分子机制。方法：用激素结合法和迁移率改变法。结果：１） 用含有ＥＲ 的ＭＣＦ－ ７ 细胞株作为阳性对照，２２ ℃Ｍｇ２ ＋ 存在条件下，迁移率改变法中ＥＲ－ ＥＲＥ 复合物的形成是激素依赖性的，证实了ＥＲ－ ＥＲＥ 复合物的特性。２） 激素结合法和迁移率改变法检测结果显示，３６ 例（Ｅ２ ＋ ） 乳腺癌中有２５ 例相一致，其中两种方法都是阳性者（ＰＲ＋ ／ＥＲＥ＋ ）１７ 例，都是阴性者（ＰＲ－ ／ＥＲＥ－ ）８ 例。３ 例肿瘤，激素结合法阳性而迁移率改变法阴性（ＰＲ＋ ／ＥＲＥ－ ） 。８ 例肿瘤，激素结合法阴性而迁移率改变法阳性（ＰＲ－ ／ＥＲＥ＋ ） 。结论：乳腺癌组织中依赖ＥＲ 的ＰＲ 表达还有其它途径（ＰＲ＋ ／ＥＲＥ－ ） ，且ＰＲ 阴性不能表示ＥＲ ＤＮＡ 结合功能状态有缺陷（ＰＲ－ ／ＥＲＥ＋ ） ，利用ＰＲ 评估ＥＲ ＤＮＡ 结合功能状态以指导乳腺癌的内分泌治疗存在约３０ ％ （１１／３６） 的误差率。因此，传统的激素结合法检测结果（Ｅ２ 、ＰＲ） 同迁移率改变法检测结果（ＥＲＥ） 相结合，能更准确地反应ＥＲ 展开更多

关键词 乳腺癌 孕激素受体 雌激素受体 DNA结合结构域

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恶性肿瘤和带状疱疹患者红细胞的免疫功能 被引量：11

8

作者 余春艳 张立朝 +1 位作者 顾群 陶秦瑜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期69-69,共1页

关键词 恶性肿瘤 带状疱疹 红细胞免疫

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窒息对新生鼠红细胞免疫功能和LPO的影响 被引量：9

9

作者 王玲 王为农 +1 位作者 陶秦渝 鱼绥和 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期300-300,共1页

关键词 新生儿窒息 红细胞免疫功能 脂质过氧化

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抗人精浆蛋白单抗κ链基因的克隆及其在HeLa细胞的表达 被引量：3

10

作者 杨洁 郝晓柯 +6 位作者 张盈华 孙脊峰 赵晶 许彦鸣 金明 王成济 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期110-112,共3页

目的　　获得鼠抗人精浆蛋白单抗（ｍＡｂ）κ链基因，并将其转染到ＨｅＬａ细胞进行表达。方法　从分泌抗人精浆蛋白ｍＡｂ的杂交瘤细胞系Ｅ４Ｂ７中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ法获取κ链ｃＤＮＡ。将其克隆入真核表达载体ｐｃＤＮ... 目的　　获得鼠抗人精浆蛋白单抗（ｍＡｂ）κ链基因，并将其转染到ＨｅＬａ细胞进行表达。方法　从分泌抗人精浆蛋白ｍＡｂ的杂交瘤细胞系Ｅ４Ｂ７中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ法获取κ链ｃＤＮＡ。将其克隆入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３，用脂质体转染法转染ＨｅＬａ细胞，并用免疫荧光染色法检测κ链的表达。结果从分泌抗人精浆蛋白的鼠ｍＡｂ杂交瘤细胞系Ｅ４Ｂ７中克隆了κ链基因。序列测定表明，Ｖκ属于鼠免疫球蛋白ⅩⅢ家族。以含κ链基因的真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－Ｅ４Ｂ７κ转染ＨｅＬａ细胞后，在ＨｅＬａ细胞中检测到了κ链的表达。结论　获得了序列正确的κ链基因，并在ＨｅＬａ细胞中成功地表达，为进一步构建和表达Ｆａｂ段打下了良好基础。 展开更多

关键词 抗人精浆蛋白单克隆抗体 κ链基因 克隆 HELA细胞 基因表达

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前体药物甲氨喋呤-α-肽对前列腺癌动物模型治疗的研究 被引量：3

11

作者 郝晓柯 施溥涛 +2 位作者 张盈华 殷缨 韩云龙 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2000年第3期195-198,共4页

目的 :研究前列腺癌的导向酶 前体药物疗法 (ADEPT) ,在体内观察前体药物甲氨喋呤 α 肽对前列腺癌的作用。方法 :用前体药物甲氨喋呤 α 苯丙氨酸 (MTX α Phe )和甲氨喋呤 α 精氨酸 (MTX α Arg)对前列腺癌荷瘤裸鼠模型行肿瘤生长... 目的 :研究前列腺癌的导向酶 前体药物疗法 (ADEPT) ,在体内观察前体药物甲氨喋呤 α 肽对前列腺癌的作用。方法 :用前体药物甲氨喋呤 α 苯丙氨酸 (MTX α Phe )和甲氨喋呤 α 精氨酸 (MTX α Arg)对前列腺癌荷瘤裸鼠模型行肿瘤生长抑制及药物动力学的观察。结果 :经抗人精浆蛋白单克隆抗体导向的羧肽酶 A MTX α Phe动物模型体内试验 ,ADEPT治疗组肿瘤生长明显抑制 ,裸鼠生存时间延长 ,生活质量优于单用MTX组。药物动力学显示 ,抗人精浆蛋白单克隆抗体 羧肽酶A注入72h后 ,给于MTX α Phe治疗效果最佳。结论 :MTX α Phe +CP 展开更多

关键词 前体药物 前列腺肿瘤 导向治疗 甲氨喋呤-α-肽

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survivin启动子的克隆及在HeLa细胞中的特异生物活性 被引量：3

12

作者 吴冰 王燕 +3 位作者 任继鸿 赵辉 张利潮 张惠中 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2005年第2期116-119,共4页

目的:构建带有survivin启动子的pGL3Basic真核表达载体,探讨survivin启动子在HeLa细胞中的特异表达活性。方法:采用PCR技术扩增survivin启动子,插入pGL3Basic载体,构建携带survivin启动子的pGL3Basic真核表达载体(pGL3Basic/Surp)。纯化... 目的:构建带有survivin启动子的pGL3Basic真核表达载体,探讨survivin启动子在HeLa细胞中的特异表达活性。方法:采用PCR技术扩增survivin启动子,插入pGL3Basic载体,构建携带survivin启动子的pGL3Basic真核表达载体(pGL3Basic/Surp)。纯化pGL3Basic/Surp质粒,用脂质体法转染HeLa细胞和正常血管内皮细胞ECV304,48h后收集转染细胞与荧光素酶底物反应,检测荧光素酶活性。结果:成功克隆1kbsurvivin基因启动子,并构建了携带有survivin基因启动子的pGL3Basic真核表达载体,转染后的Hela细胞荧光素酶活性为2074.2±78.5,而ECV304荧光素酶活性为9.7±1.1。结论:成功克隆的survivin启动子在HeLa细胞中表现出较高的肿瘤特异性活性,为进一步开发肿瘤的靶向基因治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 SURVIVIN基因 启动子 基因治疗 HELA细胞

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抗体导向酶──前药疗法的研究和应用进展 被引量：3

13

作者 王智 武国军 +1 位作者 刘智广 郝晓柯 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2000年第1期73-75,共3页

抗体导向酶──前药疗法（ａｎｔｉｂｄｙ－ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ｅｎｚｙｍｅ ｐｒｏｄｒｕｇ　ｔｈｅｒａｐｙ，ＡＤＥＰＴ）是利用抗体作为载体将前药的专一性活化酶选择性地结合于肿瘤部位，使无毒性的前药可以区域特异性地在肿瘤组... 抗体导向酶──前药疗法（ａｎｔｉｂｄｙ－ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ｅｎｚｙｍｅ ｐｒｏｄｒｕｇ　ｔｈｅｒａｐｙ，ＡＤＥＰＴ）是利用抗体作为载体将前药的专一性活化酶选择性地结合于肿瘤部位，使无毒性的前药可以区域特异性地在肿瘤组织内转化为活性细胞毒分子，杀伤肿瘤。利用不同的活化酶／前药对已建立了多种ＡＤＥＰＴ系统，羧肽酶Ｇ２／ＭＭＣ１系统已用于临床Ⅰ期试验。本文就ＡＤＥＰＴ研究和应用的最新进展作一综述。 展开更多

关键词 单克隆抗体 抗体导向酶 前药疗法 肿瘤 ADEPT

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缺氧诱导的肝癌靶向性基因治疗载体的构建和检测 被引量：3

14

作者 禄韶英 王燕 +2 位作者 孙学军 白纪刚 张伟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2006年第1期59-62,共4页

目的:构建缺氧诱导的AFP基因启动子(HRE-AFPp)调控的基因表达载体,并检测该调控元件的特异性和对缺氧诱导的反应性。方法:用PCR方法从人类基因组中扩增VEGF基因缺氧反应元件(HRE)和AFP基因启动子(AFPp),将上述片段与含有报告基因(强化... 目的:构建缺氧诱导的AFP基因启动子(HRE-AFPp)调控的基因表达载体,并检测该调控元件的特异性和对缺氧诱导的反应性。方法:用PCR方法从人类基因组中扩增VEGF基因缺氧反应元件(HRE)和AFP基因启动子(AFPp),将上述片段与含有报告基因(强化绿色荧光蛋白基因)载体pEGFP-1的多克隆位点连接,构建成为缺氧诱导的AFP基因启动子调控的基因表达载体(pEGFP-[HRE]AFPp)。用脂质体法将表达载体转染表达或不表达AFP的细胞系,G418筛选阳性克隆,荧光显微镜观测重组AFPp的活性,并用流式细胞术检测缺氧诱导是否对其有调控作用。结果:成功地将HRE、AFPp克隆到报告基因载体pWGFP-1的多克隆位点,酶切鉴定和DNA序列分析无误,荧光显微镜观测证实EGFP能在AFP阳性肝癌细胞特异性表达,流式细胞术检测证实,16 h缺氧诱导能增强EGFP的表达(P<0．01)。结论:缺氧诱导的AFP顺式作用元件修饰的基因治疗载体,在基因转录水平特异性调控目的基因的表达,为下一步将其作为肝癌基因治疗载体奠定了基础。 展开更多

关键词 甲胎蛋白基因 缺氧反应元件 肝细胞癌

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miR-141-3p靶向调控前列腺癌LNCaP细胞雄激素受体的表达 被引量：3

15

作者 王琛 欧阳永日 +2 位作者 路蔓 卫军霞 张惠中 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期736-739,共4页

目的检测LNCa P细胞内miR-141-3p对雄激素受体(AR)基因靶向调控作用,明确AR是否为miR-141-3p的靶基因。方法将miR-141-3p mimics转染LNCa P细胞后,利用反转录PCR和Western blot法分别检测LNCa P细胞中AR的mRNA和蛋白表达。采用PCR方法... 目的检测LNCa P细胞内miR-141-3p对雄激素受体(AR)基因靶向调控作用,明确AR是否为miR-141-3p的靶基因。方法将miR-141-3p mimics转染LNCa P细胞后,利用反转录PCR和Western blot法分别检测LNCa P细胞中AR的mRNA和蛋白表达。采用PCR方法扩增得到含有miR-141-3p结合位点的AR mRNA 3'非翻译区(3'UTR)片段,并插入到pmiR-report载体萤光素酶基因的3'下游区,并将所构建载体命名为pmiR-AR-3'UTR;萤光素酶报告基因检测试剂盒检测miR-141-3p对pmiR-AR-3'UTR靶向抑制效果。结果转染miR-141-3p mimics可降低LNCa P细胞内源AR的mRNA和蛋白水平;萤光素酶活性检测结果显示:与对照组相比,miR-141-3p可明显抑制pmiR-AR-3'UTR萤光素酶活性。结论 AR是miR-141-3p的靶基因。 展开更多

关键词 前列腺癌 雄激素受体 miR-141-3p

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糖皮质激素对α-晶状体蛋白分子伴侣功能的影响 被引量：4

16

作者 严宏 刘兵 +1 位作者 俞兰 王为农 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2005年第1期37-39,共3页

　目的　研究糖皮质激素对α 晶状体蛋白分子伴侣功能的影响。 方法　凝胶过滤层析分离αL和βL 晶状体蛋白,αL 晶状体蛋白与 25mmol/L泼尼松龙 21 半琥珀酸(P 21 H)孵育 20d(37℃),分别于 0、2、4、10和 20d应用βL 晶状体蛋白热聚集... 　目的　研究糖皮质激素对α 晶状体蛋白分子伴侣功能的影响。 方法　凝胶过滤层析分离αL和βL 晶状体蛋白,αL 晶状体蛋白与 25mmol/L泼尼松龙 21 半琥珀酸(P 21 H)孵育 20d(37℃),分别于 0、2、4、10和 20d应用βL 晶状体蛋白热聚集法测定分子伴侣活性,采用PerkinElmerLB50B荧光光度仪观察色氨酸和非色氨酸荧光值,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳监测蛋白质交联程度。 结果　被P 21 H修饰后的αL 晶状体蛋白分子伴侣功能显著降低。P 21 H可导致αL 晶状体蛋白色氨酸荧光强度明显降低,非色氨酸荧光强度向较长波长移位和增强,提示形成新的荧光色素物。孵育第 10d,伴侣活性已降低至约 3 3%,色氨酸荧光强度殆尽,约在激发波长 412nm出现新的非色氨酸荧光强度。SDS PAGE显示糖皮质激素导致αL 晶状体蛋白明显凝聚。 结论　糖皮质激素对α 晶状体蛋白的修饰和伴侣活性的降低可能参与糖皮质激素诱导白内障的形成。 展开更多

关键词 Α-晶状体蛋白 翻译后修饰 糖皮质激素 分子伴侣 白内障

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抗人γ-精浆蛋白V_H单域抗体基因的构建、表达及空间构象分析 被引量：4

17

作者 袁建林 王智 +3 位作者 武国军 王禾 王栋 郝晓柯 《西安医科大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第3期197-200,共4页

目的　扩增出抗人γ 精浆蛋白 (γ Sm)单克隆抗体 (mAb)的重链可变区 (VH)单域抗体基因 ,并进行原核表达及空间构象分析。方法　从分泌抗γ SmmAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA ,经RT PCR扩增VH 单域抗体基因 ,将其克隆到融合蛋白表达... 目的　扩增出抗人γ 精浆蛋白 (γ Sm)单克隆抗体 (mAb)的重链可变区 (VH)单域抗体基因 ,并进行原核表达及空间构象分析。方法　从分泌抗γ SmmAb的杂交瘤细胞系E4B7中提取总RNA ,经RT PCR扩增VH 单域抗体基因 ,将其克隆到融合蛋白表达载体 pGEX 4T 1中进行表达 ,并利用计算机软件对表达产物进行空间构象分析。结果　VH 单域抗体基因全长 363bp ,含起始码和终止码。将其克隆到 pGEX 4T 1内 ,转化大肠杆菌DH5α ,获得高效表达 ,表达量占全菌总蛋白质的 38% ,以包涵体形式存在。经初步纯化和复性后 ,用谷胱甘肽 (GST)亲和色谱纯化 ,再经凝血酶水解获得抗γ SmVH 单域抗体。竞争结合抑制实验证明 ,该表达产物具有前列腺癌细胞亲和活性。空间构象分析结果显示 ,该抗体具有完整的抗原结合位点。结论　构建成功抗γ Sm的VH 单域抗体 ,为进一步临床应用奠定基础。 展开更多

关键词 人γ-精浆蛋白 单域抗体 克隆 表达 前列腺癌

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人源性羧肽酶A突变体基因的构建及表达 被引量：3

18

作者 董轲 郝晓柯 +2 位作者 刘新平 张盈华 季少平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期106-108,122,共4页

目的从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变。方法从人正常肺组织中提取RNA,并进行逆转录得到人羧肽酶AhCPA。以计算机模拟hCPA的结构,寻找合适的突变位点。用PCR重叠延伸法,对羧肽酶A进行定点突变并在大肠杆菌中表达。结果序... 目的从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变。方法从人正常肺组织中提取RNA,并进行逆转录得到人羧肽酶AhCPA。以计算机模拟hCPA的结构,寻找合适的突变位点。用PCR重叠延伸法,对羧肽酶A进行定点突变并在大肠杆菌中表达。结果序列分析表明,所获hCPA的核苷酸序列为1251bp,编码417个氨基酸。hCPA突变体mhCPA基因的1126位核苷酸由G变为A,其余核苷酸序列均未发生变化,相应的此突变体蛋白质的376位核苷酸残基由丙氨酸突变为苏氨酸。将mhC-PA基因在E.coli中诱导表达3h后表达量高达30%左右。结论成功地构建并表达了mhCPA基因,为hCPA在肿瘤的“抗体导向酶前药疗法”ADEPT中的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 人源性羧肽酸A 基因突变 基因克隆 基因表达

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Stathmin蛋白的研究进展 被引量：4

19

作者 吴冰 张立潮 张惠中 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2005年第1期71-73,共3页

Stathmin蛋白由于其特有的微管解聚活性,在细胞的增殖和分化及肿瘤发生中有十分重要的作用。抑制Stathmin蛋白的表达已经成为肿瘤基因治疗的新的靶点,并且已经证实Stathmin蛋白能够影响某些作用于微管的化疗药物的疗效,对于指导临床用... Stathmin蛋白由于其特有的微管解聚活性,在细胞的增殖和分化及肿瘤发生中有十分重要的作用。抑制Stathmin蛋白的表达已经成为肿瘤基因治疗的新的靶点,并且已经证实Stathmin蛋白能够影响某些作用于微管的化疗药物的疗效,对于指导临床用药有一定的意义。Stathmin蛋白还能够促进神经系统的发育,因此受到更多的关注。 展开更多

关键词 STATHMIN 神经系统 肿瘤 细胞周期

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截短型转位肽重组抗体/颗粒酶B基因的构建及表达 被引量：2

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作者 张莉 赵晶 +4 位作者 王智 温伟红 张盈华 王成济 杨安钢 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期434-436,共3页

目的 :构建携带截短型转位肽重组抗体 /颗粒酶B基因的真核表达载体 ,并将其在HER2阳性SKBR 3肿瘤细胞及HER2阴性Hela肿瘤细胞中表达。方法 :用PCR法获得截短型转位肽重组抗体 /颗粒酶B基因片段 ,并克隆构建真核表达载体 ,以脂质体法转染... 目的 :构建携带截短型转位肽重组抗体 /颗粒酶B基因的真核表达载体 ,并将其在HER2阳性SKBR 3肿瘤细胞及HER2阴性Hela肿瘤细胞中表达。方法 :用PCR法获得截短型转位肽重组抗体 /颗粒酶B基因片段 ,并克隆构建真核表达载体 ,以脂质体法转染SKBR 3细胞及Hela细胞 ,用免疫细胞化学染色检测其在不同细胞中的表达及对细胞形态的影响。结果 :成功构建了编码截短型转位肽重组抗体 /颗粒酶B基因的真核表达载体pCMV e2 3sFv FSD GrB ,用免疫细胞化学检测发现 ,绝大多数Hela细胞可高表达e2 3sFv FSD GrB蛋白 ,且细胞形态正常 ,而表达e2 3sFv FSD GrB蛋白的SKBR 3细胞形态发生变化 ,出现固缩细胞。结论 :截短型转位肽重组抗体 /颗粒酶B基因真核表达体系的建立 ,为确定PE转位肽的最小转位功能区段奠定了基础。 展开更多

关键词 绿脓杆菌外毒素转位肽 颗粒酶B 截短型转位肽重组抗体 基因表达 基因构建

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