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p75NTR敲除对小鼠股骨矿化发育的抑制作用 被引量：5
1
作者 王莹莹 储庆 +5 位作者 杨琨 温秀杰 李刚 刘骏宇 刘畅 刘鲁川 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1245-1250,共6页
目的对比野生型和p75 neurotrophin receptor(p75NTR)敲除小鼠股骨骨质的改变,探讨p75NTR敲除对小鼠股骨矿化发育的影响。方法取同窝p75NTR^(+/+)(野生型)和p75NTR^(-/-)(敲除型)雄性小鼠,出生后8周龄时行股骨Micro-CT扫描,检测股骨松... 目的对比野生型和p75 neurotrophin receptor(p75NTR)敲除小鼠股骨骨质的改变,探讨p75NTR敲除对小鼠股骨矿化发育的影响。方法取同窝p75NTR^(+/+)(野生型)和p75NTR^(-/-)(敲除型)雄性小鼠,出生后8周龄时行股骨Micro-CT扫描,检测股骨松质骨的骨量(BV)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数(Tb.N)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨表面积/骨量(BS/BV)、骨小梁分离度(Tb.Sp)和皮质骨的骨量(Ct.BV)、骨皮质厚度(Ct.Tb Th)、骨皮质的骨表面积/骨量(Ct.BS/BV);出生后40 d分别取同窝两种基因型雄性小鼠行钙黄绿素荧光双标实验,以检测股骨的矿化沉积速率;提取4周龄大小鼠股骨总RNA及蛋白质,RT-PCR和Western blot检测ALP、Runx2的表达。结果 Micro-CT结果显示:p75NTR^(-/-)小鼠股骨的BV、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Ct.BV、Ct.Tb Th明显低于同窝p75NTR~(^(+/+))小鼠(P<0.05),同时,p75NTR^(-/-)小鼠的BS/BV、Tb.Sp、Ct.BS/BV明显高于p75NTR^(+/+)小鼠(P<0.01);钙黄绿素荧光双标检测结果显示:p75NTR^(-/-)小鼠股骨的矿化速率明显低于同窝p75NTR^(+/+)小鼠(P<0.01);RT-PCR及Western blot结果显示:p75NTR~(^(-/-))小鼠的ALP、Runx2表达均明显低于p75NTR~(^(+/+))小鼠(P<0.01)。结论 p75NTR敲除对小鼠股骨的矿化发育有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 神经生长因子受体 股骨 矿化 小鼠
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人转化生长因子-β1基因转染对人牙龈成纤维细胞成骨特性的影响 被引量：9
2
作者 储庆 吴织芬 +3 位作者 王勤涛 何海丽 万玲 刘玲侠 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期264-267,共4页
目的观察并评价基因转染后牙龈成纤维细胞(GF)表达外源目的基因人转化生长因子-β1(hTGF-β1)对其分化、成骨特性的影响。方法采用碱性磷酸酶(ALP)活性检测方法检测转染对GFALP活性的影响,免疫组化染色及图像分析评价基因转染后骨钙素(... 目的观察并评价基因转染后牙龈成纤维细胞(GF)表达外源目的基因人转化生长因子-β1(hTGF-β1)对其分化、成骨特性的影响。方法采用碱性磷酸酶(ALP)活性检测方法检测转染对GFALP活性的影响,免疫组化染色及图像分析评价基因转染后骨钙素(OC)、骨桥素(OPN)、骨涎蛋白(BSP)、骨结合素(ON)含量的变化,体外矿化结节形成实验检测转染后细胞成骨特性的变化。结果转染后GF的ALP活性较未转染组有显著的提高(P<0.05),并且与牙周膜成纤维细胞(PDLCs)的ALP活性接近(P>0.05)。OC含量检测显示转染后GF的OC含量与未转染组和PDLCs组相比,其差异均无统计学意义(P>0.05)。免疫组化染色后,转染组GF所表达的OPN、ON、BSP含量均高于未转染组GF(P<0.05),而与PDLCs间差异无统计学意义(P>0.05)。第21天和第24天时,在矿化液作用下PDLCs及转染GF在倒置显微镜下可见致密的结节形成,von Kossa染色可见紫色的矿化结节形成。未转染GF未见结节形成。而转染GF在未经矿化液诱导情况下,虽出现显著的细胞聚集,但von Kossa染色未见紫色矿化结节形成。结论转染pcDNA3-hTGF-β1后的GF可表达一定的成骨细胞特性,但这种成骨特性有限。 展开更多
关键词 人转化生长因子-β1 基因转染 牙龈成纤维细胞 成骨
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p75NTR在大鼠外胚间充质干细胞不同融合状态中的表达差异与矿化相关性研究
3
作者 肖勇 李刚 +5 位作者 王莹莹 赵茜 杨苹珠 朱林 储庆 温秀杰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期753-760,共8页
目的探讨不同融合状态对p75 neurotrophin receptor(p75 NTR)在外胚间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSCs)中的表达影响。方法用酶消化法获取SD大鼠胚胎12.5 d(E12.5d)EMSCs,以不同细胞密度铺板,贴壁后即获得4种融合状态:半... 目的探讨不同融合状态对p75 neurotrophin receptor(p75 NTR)在外胚间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSCs)中的表达影响。方法用酶消化法获取SD大鼠胚胎12.5 d(E12.5d)EMSCs,以不同细胞密度铺板,贴壁后即获得4种融合状态:半融合状态(1.0×10~4/cm^2)、融合前状态(1.5×10~4/cm^2)、融合状态(2.5×10~4/cm^2)、融合后状态(3.5×10~4/cm^2)。检测4种融合状态细胞矿化诱导前后p75NTR、Runt相关转录因子2(Runx2)和碱性磷酸酶(ALP)、Ⅰ型胶原蛋白(Col1)在mRNA水平和蛋白水平的表达,茜素红染色检测钙盐沉积情况。结果矿化诱导0 d时,p75NTR mRNA和蛋白在融合状态组表达最高,Runx2、ALP、Col1在4种融合状态表达水平无明显差异。矿化诱导3、7 d时,融合状态组p75NTR、Runx2、ALP mRNA表达水平均显著高于其他3组(P<0.05);同时融合状态组p75NTR、Runx2、Col1蛋白表达水平最高,差异具有统计学意义(P<0.05)。矿化诱导21 d时,融合状态组钙盐沉积量高于其他3组(P<0.01)。结论不同融合状态p75NTR表达差异显著,在融合状态组p75NTR表达最高,此时细胞矿化能力最强,表明p75NTR的表达与矿化呈正相关。 展开更多
关键词 神经营养因子受体 Runt相关转录因子2 间充质干细胞 细胞密度 大鼠
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