Notch信号分子于小鼠牙髓干细胞样细胞表达的研究 被引量：5

1

作者 陆群 吴补领 +2 位作者 王冀姝 韩骅 周学东 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期54-56,共3页

目的　研究Notch基因在小鼠牙髓干细胞样细胞表达。方法　采用酶消化培养法获得小鼠的单个牙髓细胞悬液 ,调整细胞密度为 1× 10 4 个 孔细胞 ,干细胞培养液培养 14d,挑选细胞克隆扩增 ,提取细胞的总RNA ,反转录聚合酶联反应 (RT_P... 目的　研究Notch基因在小鼠牙髓干细胞样细胞表达。方法　采用酶消化培养法获得小鼠的单个牙髓细胞悬液 ,调整细胞密度为 1× 10 4 个 孔细胞 ,干细胞培养液培养 14d,挑选细胞克隆扩增 ,提取细胞的总RNA ,反转录聚合酶联反应 (RT_PCR)检测Notch基因的表达。结果　小鼠牙髓细胞呈集落状生长 ,克隆形成率约为 1 6～ 2 5个 10 4 细胞 ,所形成的集落细胞结合紧密 ,细胞胞体小、胞核大 ,RT_PCR结果显示Notch的mRNA在牙髓干细胞样细胞中有表达。结论　培养的集落状生长的小鼠牙髓细胞具有干细胞增殖快的特性 ,Notch基因于牙髓干细胞中表达 。 展开更多

关键词 Notch信号分子 小鼠 牙髓干细胞 细胞表达 牙齿发育 反转录聚合酶联反应

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转化生长因子β1对人牙本质基质蛋白1基因转录活性的影响 被引量：3

2

作者 逄键梁 吴补领 +2 位作者 张亚庆 柯杰 吴纲 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期871-875,共5页

目的:观察具有矿化活性的人牙髓干细胞(human dental pulp stem cell,HDPSC)在重组人转录生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)作用下对牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,Dmp1)表达和Dmp1基因启动子转录活性的... 目的:观察具有矿化活性的人牙髓干细胞(human dental pulp stem cell,HDPSC)在重组人转录生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)作用下对牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,Dmp1)表达和Dmp1基因启动子转录活性的影响。方法:通过建立体外培养的HDPSC矿化诱导模型,经10ng/L重组人TGF-β1刺激后,运用RT-PCR、报告基因检测等方法检测细胞在TGF-β1作用后Dmp1mRNA表达变化以及对pGL3-P-193～+86和pGL3-P-505～+862个启动子片段重组报告基因载体活性的影响。结果:诱导矿化后具有部分成牙本质细胞样细胞特征的HDPSC经TGF-β1刺激后,Dmp1mRNA的表达水平明显下降,并存在时间依赖性。pGL3-P-193～+86和pGL3-P-505～+86相对荧光素酶活性均下降,以pGL3-P-505～+86活性下降更明显,说明TGF-β1具有下调HDPSCDmp1转录活性的作用。计算机分析结果发现,Dmp1基因启动子-505～+86bp区存在多个TGF-β1下游作用分子Smads的结合位点。结论:TGF-β1可下调Dmp1mRNA的表达水平和转录活性,以pGL3-P-505～+86活性下降更明显。启动子-505～-193bp区存在TGF-β1下游作用分子或转录因子的结合位点,从而参与下调Dmp1转录表达过程。 展开更多

关键词 转录生长因子β1 牙本质基质蛋白1 人牙髓干细胞 报告基因 转录活性

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核心结合因子α1对人牙本质基质蛋白1基因转录活性的作用 被引量：2

3

作者 逄键梁 柯杰 +4 位作者 邓天政 朱晓茹 李晓华 张亚庆 吴补领 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期473-476,共4页

目的:观察核心结合因子α1(core binding factorα1,Cbfα1)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)基因转录活性的影响。方法:将pCMV-Osf2瞬时转染至体外矿化诱导的HDPSCs... 目的:观察核心结合因子α1(core binding factorα1,Cbfα1)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,HDPSCs)牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)基因转录活性的影响。方法:将pCMV-Osf2瞬时转染至体外矿化诱导的HDPSCs中,检测转染后不同时间Cbfα1蛋白的表达变化。将不同长度的DMP1基因启动子片段重组报告基因载体与pCMV-Osf2分别共转染至细胞中,报告基因检测系统检测荧光素酶活性。结果:诱导后的HDPSCs中少量表达Cbfα1,在瞬时转染Cbfα1后,蛋白主要表达于细胞胞质中,并且在转染48 h后表达量达到最高值;Cbfα1可明显增强6个不同长度的DMP1基因启动子片段重组报告基因载体的荧光素酶活性,以pGL3-P-505～+86启动子活性增强最为明显(P<0.05)。计算机分析结果发现,DMP1基因启动子-505～+86 bp区存在Cbfα1的结合位点。结论:Cbfα1可上调人DMP1基因转录活性,是HDPSCs向成牙本质细胞方向分化重要的调节因子之一,DMP1基因启动子序列-199～-185 bp区可能是Cbfα1结合位点。 展开更多

关键词 核心结合因子Α1 牙本质基质蛋白1 人牙髓干细胞 报告基因 转录活性

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几种牙髓治疗药物的抗菌作用 被引量：4

4

作者 文玲英 徐修理 丁振若 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1990年第4期254-256,共3页

本研究采用多种方法检验与评价几种牙髓治疗药物的抗菌作用,结果证实FC、愈创木酚等对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、绿脓杆菌及产黑色素类杆菌、消化链球菌的作用最有效,而2.5%戊二醛的杀菌作用远不如FC和愈创木酚,依据实验结果,本文... 本研究采用多种方法检验与评价几种牙髓治疗药物的抗菌作用,结果证实FC、愈创木酚等对金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、绿脓杆菌及产黑色素类杆菌、消化链球菌的作用最有效,而2.5%戊二醛的杀菌作用远不如FC和愈创木酚,依据实验结果,本文提出了这些药物的临床应用适宜剂量。 展开更多

关键词 牙髓治疗 抗菌作用 口腔科药

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细胞内信号转导分子——Smad7在人牙胚发育中的表达和意义 被引量：2

5

作者 包柳郁 牛忠英 +1 位作者 史俊南 汪平 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期438-440,共3页

目的　探讨Smad7在TGF_β调节牙胚发育过程中的作用。方法　采用免疫组化ABC法观察Smad7在人牙胚发育各个时期的表达分布及其变化情况。结果　人牙胚发育各个时期均表达Smad7,但各期分布模式有所不同。Smad7在不同发育时期牙胚中的分布... 目的　探讨Smad7在TGF_β调节牙胚发育过程中的作用。方法　采用免疫组化ABC法观察Smad7在人牙胚发育各个时期的表达分布及其变化情况。结果　人牙胚发育各个时期均表达Smad7,但各期分布模式有所不同。Smad7在不同发育时期牙胚中的分布与TGF_β及其特异的信号转导分子Smad2、3有相似之处。 结论　Smad7可能在TGF_β调节成釉细胞和成牙本质细胞分化的信号转导通路中起一定的作用。 展开更多

关键词 细胞内 信号转导分子 SMAD7 人牙胚发育 表达 免疫组织化学

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牙本质涎磷蛋白反义核酸对牙胚超微结构的影响 被引量：2

6

作者 张蓉 肖明振 +3 位作者 赵守亮 徐平西 张春宝 汪平 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期281-283,共3页

目的　探讨牙本质涎磷蛋白 (DSPP)在牙胚发育和矿化中的作用及其机制。方法　胎龄为 17dBalb C胎鼠上颌第一磨牙 ,分为 2组 ,对照组牙胚置于无血清BGJb半固定培养基中培养 ;DSPP反义核酸组牙胚置于含有30 μmol L ,长 15bp的DSPP反义寡... 目的　探讨牙本质涎磷蛋白 (DSPP)在牙胚发育和矿化中的作用及其机制。方法　胎龄为 17dBalb C胎鼠上颌第一磨牙 ,分为 2组 ,对照组牙胚置于无血清BGJb半固定培养基中培养 ;DSPP反义核酸组牙胚置于含有30 μmol L ,长 15bp的DSPP反义寡核苷酸的半固体培养基中培养。牙胚体外培养 10d后 ,进行透射电镜观察。 结果　 2组牙胚牙尖处成牙本质细胞中均含有大量的细胞器 ,线粒体肿胀 ,粗面内质网扩张 ,且DSPP反义核酸组成牙本质细胞中粗面内质网扩张更为明显 ;胞外基质超微结构显示 :对照组胶原纤维聚集成束 ,排列具有一定的方向 ,牙尖基质带平均厚度为 3μm ;DSPP反义核酸组胶原纤维粗细不等 ,排列紊乱 ,牙尖基质带平均厚度为 2 5 μm。 结论　DSPP可能通过控制成牙本质细胞正常的分泌功能、胶原纤维的正常形态和排列在牙胚生长、矿化中起重要作用。 展开更多

关键词 牙本质涎磷蛋白 反义核酸 牙胚 超微结构 影响

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不同根管预备方法对热塑牙胶充填根管微渗漏的影响 被引量：1

7

作者 张丽萍 吴补领 朱文忠 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2005年第3期345-345,共1页

关键词 根管预备 热塑牙胶 充填根管 微渗漏

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人牙本质基质蛋白1基因启动子在不同细胞中的活性比较和分析 被引量：7

8

作者 逄键梁 吴补领 +2 位作者 张亚庆 赵红萍 刘艳丽 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期148-152,共5页

目的观察并比较不同长度的人牙本质基质蛋白1(Dmp1)基因上游启动子片段在人牙髓干细胞(HDPSC)、成骨细胞(OC)和子宫颈癌上皮细胞株Hela中的启动子活性,为进一步研究Dmp1基因在矿化组织中的特异性转录调控特点和作用机制奠定基础。方法... 目的观察并比较不同长度的人牙本质基质蛋白1(Dmp1)基因上游启动子片段在人牙髓干细胞(HDPSC)、成骨细胞(OC)和子宫颈癌上皮细胞株Hela中的启动子活性,为进一步研究Dmp1基因在矿化组织中的特异性转录调控特点和作用机制奠定基础。方法以获得正确序列的2 195 bp Dmp1基因上游启动子重组T载体为模板,通过 PCR方法获得不同长度的Dmp1基因上游启动子片段,将其构建至报告基因载体pGL3-Basic中,瞬时转染至HDP- SC、OC和Hela细胞,荧光素酶检测这些细胞中启动子活性并进行分析。结果成功地获得了6段不同长度的Dmp1 启动子目的片段。酶切鉴定表明不同长度启动子报告基因载体构建成功,不同片段的Dmp1启动子在不同细胞中活性不同,在HDPSC和OC中活性较强,而在Hela细胞中活性最低。在-505--193 bp区和-935--505 bp区可能分别存在HDPSC和OC较为特异的转录调控作用区域点,该区可能包含Dmp1表达的基础调控元件。结论成功克隆了不同长度的Dmp1上游启动子的序列,不同启动子片段在牙髓干细胞和成骨细胞等矿化性细胞中活性较强,并初步确定了Dmp1启动子在矿化性细胞中的基本启动子区域,而在非矿化性细胞Hela细胞中活性较低。 展开更多

关键词 牙本质基质蛋白1 人牙髓干细胞 成骨细胞

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变形链球菌高毒力株特异DNA片段的序列测定及生物信息学分析 被引量：4

9

作者 郭丽宏 史俊南 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期541-545,共5页

目的将筛选得到的变形链球菌高毒力株特异的DNA片段序列与数据库中已知序列进行对比,发现高毒力株特异的新基因或已知基因的新功能,推测、鉴定基因所编码蛋白质的功能。方法对筛选得到的c血清型变形链球菌高毒力株特异的31个DNA片段进... 目的将筛选得到的变形链球菌高毒力株特异的DNA片段序列与数据库中已知序列进行对比,发现高毒力株特异的新基因或已知基因的新功能,推测、鉴定基因所编码蛋白质的功能。方法对筛选得到的c血清型变形链球菌高毒力株特异的31个DNA片段进行序列测定,利用BLAST2.2.6程序进行核苷酸和含6相位阅读框架编码的氨基酸的相似性检索。结果变形链球菌高毒力株特异的31个DNA片段中,2个为重复克隆,片段大小在113～776bp之间,平均G+C含量为38.59%,与已完成测序的变形链球菌UA159基因编码区的G+C含量相近。发现了5个新的基因片段,其余的片段均与变形链球菌UA159基因组中的基因有高度的同源性。依据推测的功能,高毒力株特异的DNA片段主要与信号转导及转录调节、修复应激损伤、生化代谢、外膜蛋白合成及粘附以及目前功能仍未知或不确定的假想蛋白有关。结论利用生物信息学相关软件及数据库进行c血清型变形链球菌高毒力株特异DNA片段的基因分析、识别及功能预测,发现了5个新的基因片段以及高毒力株特异的DNA片段的主要功能,为进一步的基因功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 变形链球菌 测序 生物信息学 相似性检索

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利用抑制消减杂交技术构建变形链球菌高毒力株特异的基因文库 被引量：2

10

作者 郭丽宏 史俊南 张莹 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期524-528,共5页

目的构建c血清型变形链球菌高毒力株特异的基因文库,为变形链球菌毒力基因的筛选奠定基础.方法从一对c血清型变形链球菌高、低毒力株中提取基因组DNA,用四碱基限制性内切酶酶切,以高毒力株的DNA酶切产物为tester DNA,低毒力株的DNA酶切... 目的构建c血清型变形链球菌高毒力株特异的基因文库,为变形链球菌毒力基因的筛选奠定基础.方法从一对c血清型变形链球菌高、低毒力株中提取基因组DNA,用四碱基限制性内切酶酶切,以高毒力株的DNA酶切产物为tester DNA,低毒力株的DNA酶切产物为driver DNA,tester DNA连接接头后与driver DNA进行抑制消减杂交,并检测连接效率与消减效率.将获得的消减PCR产物与pCR2.1载体连接,转化E.coliTOP10F'感受态细胞,进行蓝白筛选.结果从识别四碱基序列的限制性内切酶中,筛选出Alu工,用于制备变形链球菌基因组DNA的代表性片段,产生的酶切产物位于0.1～2.0kb.testerDNA与接头的连接效率大于25%,抑制消减杂交后消减效率检测显示,同时存在于tester与driver DNA中的23S rRNA基因在消减组中出现时间较未消减组晚6个循环,将消减PCR产物克隆后,挑取96个转化子,构建高毒力株特异的基因文库.结论利用抑制消减杂交技术,进行c血清型变形链球菌高、低毒力株之间基因组DNA的比较,初次构建了高毒力株特异的基因文库. 展开更多

关键词 变形链球菌 抑制消减杂交 基因组DNA

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变形链球菌葡聚糖结合蛋白A真核表达质粒pcDNA3.1/GBD在哺乳动物细胞中的表达 被引量：1

11

作者 苏凌云 吴补领 +1 位作者 李福洋 陆群 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期10-12,共3页

目的　观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(GbpA)的葡聚糖结合区 (GBD)真核表达质粒pcDNA3 1 GBD在哺乳动物细胞COS_7的表达情况。方法　通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3 1 GBD ,通过脂质体转染法将其转染至COS_7细胞 ,通过免疫组化... 目的　观察变形链球菌葡聚糖结合蛋白A(GbpA)的葡聚糖结合区 (GBD)真核表达质粒pcDNA3 1 GBD在哺乳动物细胞COS_7的表达情况。方法　通过基因重组技术构建真核表达质粒pcDNA3 1 GBD ,通过脂质体转染法将其转染至COS_7细胞 ,通过免疫组化SABC法检测其在COS_7细胞的表达。结果　pcDAN3 1 GBD质粒转染的细胞质呈棕黄色染色 ,胞核无着色 ,pcDAN3 1空载体转染的细胞质及胞核无着色 ,空白对照组也无着色。结论　质粒pcDAN3 1 GBD转染COS_7后能够在细胞内翻译、表达 ,表达的蛋白质位于细胞质中 ,可与抗GbpA抗体特异性结合 ,具有抗原性 。 展开更多

关键词 变形链球菌 葡聚糖结合蛋白A GbpA 真核表达 质粒 哺乳动物 基因表达

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