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携带可诱导共刺激分子基因的重组腺病毒载体构建及其在小鼠间充质干细胞中的表达
被引量：
4
1
作者
王利平
包晓辰
+4 位作者
魏玮
陈洁
邵宇
王健民
钱其军
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2012年第9期909-914,共6页
目的阻断可诱导共刺激途径协同骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可能能增强急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)的防治作用。文中旨在构建携带小鼠可诱导共刺激分子(inducible costimula-tor,ICOS...
目的阻断可诱导共刺激途径协同骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可能能增强急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)的防治作用。文中旨在构建携带小鼠可诱导共刺激分子(inducible costimula-tor,ICOS)基因的重组腺病毒载体,转染小鼠骨髓MSCs,为转基因治疗提供实验基础。方法设计含有EcoRⅠ、SalⅠ酶切位点的引物,PCR扩增ICOS,将扩增产物克隆到穿梭质粒PDC318上,筛选阳性克隆,测序鉴定正确,将其与含有5型腺病毒右臂的质粒pPE3-F11B-EGFP在293细胞中同源重组,筛选获得含有ICOS基因的重组腺病毒质粒,行PCR鉴定。重组腺病毒质粒转染293细胞,扩增后用氯化铯密度梯度离心纯化病毒,用50%组织培养感染剂量法测定病毒滴度,并转染小鼠MSCs。结果重组腺病毒质粒经鉴定,证实含有ICOS基因,病毒滴度为6.54×109pfu/ml。转染小鼠MSCs,荧光显微镜下可见较多绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪检测ICOS表达率为90.16%。结论成功构建了携带小鼠ICOS基因的重组腺病毒载体,并获得高滴度的病毒,能高效转染小鼠MSCs,为后续研究奠定了基础。
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关键词
腺病毒载体
可诱导共刺激分子
间充质干细胞
基因治疗
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职称材料
题名
携带可诱导共刺激分子基因的重组腺病毒载体构建及其在小鼠间充质干细胞中的表达
被引量：
4
1
作者
王利平
包晓辰
魏玮
陈洁
邵宇
王健民
钱其军
机构
第二军医大学
附属
长海
医院
血液科
中国人民解放军
第二军医大学附属东方肝胆外科医院病毒与基因治疗实验室
出处
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2012年第9期909-914,共6页
基金
国家自然科学基金(30871100)
文摘
目的阻断可诱导共刺激途径协同骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可能能增强急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease,aGVHD)的防治作用。文中旨在构建携带小鼠可诱导共刺激分子(inducible costimula-tor,ICOS)基因的重组腺病毒载体,转染小鼠骨髓MSCs,为转基因治疗提供实验基础。方法设计含有EcoRⅠ、SalⅠ酶切位点的引物,PCR扩增ICOS,将扩增产物克隆到穿梭质粒PDC318上,筛选阳性克隆,测序鉴定正确,将其与含有5型腺病毒右臂的质粒pPE3-F11B-EGFP在293细胞中同源重组,筛选获得含有ICOS基因的重组腺病毒质粒,行PCR鉴定。重组腺病毒质粒转染293细胞,扩增后用氯化铯密度梯度离心纯化病毒,用50%组织培养感染剂量法测定病毒滴度,并转染小鼠MSCs。结果重组腺病毒质粒经鉴定,证实含有ICOS基因,病毒滴度为6.54×109pfu/ml。转染小鼠MSCs,荧光显微镜下可见较多绿色荧光蛋白表达,流式细胞仪检测ICOS表达率为90.16%。结论成功构建了携带小鼠ICOS基因的重组腺病毒载体,并获得高滴度的病毒,能高效转染小鼠MSCs,为后续研究奠定了基础。
关键词
腺病毒载体
可诱导共刺激分子
间充质干细胞
基因治疗
Keywords
Adenovirus vector
Inducible costimulator
Mesenchymal stem cell
Gene therapy
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
携带可诱导共刺激分子基因的重组腺病毒载体构建及其在小鼠间充质干细胞中的表达
王利平
包晓辰
魏玮
陈洁
邵宇
王健民
钱其军
《医学研究生学报》
CAS
北大核心
2012
4
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