免疫介质与肝纤维化 被引量：7

1

作者 高锋 孔宪涛 《临床肝胆病杂志》 CAS 1993年第2期59-61,共3页

肝纤维化是肝硬化前期组织学改变,为病理学上的一种形态诊断。肝纤维化的发病机制至今不明,研究表明免疫调节在其中起重要的作用。免疫介质也称细胞因子,是一类由单核巨噬细胞、淋巴细胞等分泌的多肽物质。

关键词 免疫介质 肝纤维化 肝硬变

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IL－2和TNF特异性基因治疗后肝癌组织病理及免疫组化分析 被引量：1

2

作者 曹广文 余永伟 +4 位作者 沈茜 杜平 杨文国 孔宪涛 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第6期509-512,共4页

目的：探讨ＴＮＦ和ＩＬ－２基因治疗后实验性肝癌瘤体内细胞水平的改变。方法：应用病理检查和免疫组化分析对ＩＬ－２和ＴＮＦ转基因治疗后的实验性肝癌病理改变及免疫细胞浸润进行分析。结果：发现受白蛋白增强子／启动子转录调控的... 目的：探讨ＴＮＦ和ＩＬ－２基因治疗后实验性肝癌瘤体内细胞水平的改变。方法：应用病理检查和免疫组化分析对ＩＬ－２和ＴＮＦ转基因治疗后的实验性肝癌病理改变及免疫细胞浸润进行分析。结果：发现受白蛋白增强子／启动子转录调控的ＩＬ－２和ＴＮＦ基因在原位感染实验性肝癌可使肝癌逐渐缩小。ＴＮＦ基因可使肝癌组织内广泛出血坏死，Ｍａｃ－１＋炎细胞浸润为主；ＩＬ－２基因可使肝癌组织内大片坏死，Ｌｙｔ２＋炎细胞浸润，两组治疗后期均出现明显的纤维化。结论：ＩＬ－２或ＴＮＦ肝癌特异性原位基因治疗介导免疫抗肿瘤反应，但机理有所不同。 展开更多

关键词 肝肿瘤 基因治疗 肿瘤坏死因子 白细胞介素2

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层粘蛋白与肝硬化的动物实验研究 被引量：27

3

作者 高锋 孔宪涛 +3 位作者 谢映华 王笑利 徐淑琴 王岚 《临床肝胆病杂志》 CAS 1995年第1期34-36,共3页

对四氯化碳诱导的肝硬化大鼠作不同期肝组织匀浆和血清中层粘蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ，ＬＮ）含量的动态分析，并用免疫组化法观察ＬＮ在肝内的分布。结果发现，血清ＬＮ含量在大鼠肝脏受损后早期即开始升高，并与肝脏组织学改变及肝功能... 对四氯化碳诱导的肝硬化大鼠作不同期肝组织匀浆和血清中层粘蛋白（Ｌａｍｉｎｉｎ，ＬＮ）含量的动态分析，并用免疫组化法观察ＬＮ在肝内的分布。结果发现，血清ＬＮ含量在大鼠肝脏受损后早期即开始升高，并与肝脏组织学改变及肝功能变化相平行。肝匀浆ＬＮ含量在肝硬化晚期才升高，免疫组化也显示ＬＮ在肝硬化晚期沉着加深。本文提示，血清ＬＮ变化能反映早期肝脏损伤和肝组织病变的活动进程，对早期诊断肝硬化有价值。肝组织内ＬＮ大量增多，预示慢性肝病发展到晚期肝硬化。 展开更多

关键词 层粘蛋白 肝硬变 ELISA 动物模型

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葵样细胞:凋亡的特征性形态改变 被引量：6

4

作者 鲍一笑 孔宪涛 +3 位作者 叶挺军 李莉 张玲珍 张登海 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期273-276,F003,共5页

目的：观察雷公藤红素诱导人肥大细胞系（ＨＭＣ－１）细胞凋亡过程中细胞形态的变化，并探讨其意义。方法：在ＨＭＣ－１细胞培养体系中加入雷公藤红素，用光镜、电镜观察细胞的形态变化，用ＴＵＮＥＬ和流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞... 目的：观察雷公藤红素诱导人肥大细胞系（ＨＭＣ－１）细胞凋亡过程中细胞形态的变化，并探讨其意义。方法：在ＨＭＣ－１细胞培养体系中加入雷公藤红素，用光镜、电镜观察细胞的形态变化，用ＴＵＮＥＬ和流式细胞术（ＦＣＭ）检测细胞凋亡。结果：细胞在雷公藤红素作用下呈葵样改变：细胞母体居中，周边围以形成或正在形成的凋亡小体。葵样细胞（ｓｕｎｆｌｏｗｅｒ－ｌｉｋｅｃｅｌ，ＳＬＣ）对锥虫蓝拒染，可伴有核染色质浓缩和着边，药物作用２０ｍｉｎ即可形成，持续数小时后完全裂解为凋亡小体，或凋亡小体游离，残留细胞母体，最后崩溃；ＳＬＣ的形成具有时间和药物浓度依赖性；在８ｈ内与ＴＵＮＥＬ标记和碘化丙啶染色／ＦＣＭ检测的凋亡结果有显著相关性；ＳＬＣ清晰易辨，个体内和个体间计数重复性良好。结论：ＳＬＣ是凋亡细胞的特征性形态改变，可作为检测ＨＭＣ－１细胞凋亡的定性和定量指标。 展开更多

关键词 肥大细胞 葵样细胞 细胞凋亡 雷公藤公素

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一步亲和纯化制备基因工程人源抗HBs单克隆抗体Fab片段 被引量：6

5

作者 胡栋平 韩焕兴 +2 位作者 尤长宣 罗荣城 毛庆民 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期50-52,共3页

目的：探索亲和纯化人源单克隆抗体片段的简便实用方法。方法：应用自制的抗人免疫球蛋白片段抗体（Ａｎｔｉ－Ｆａｂ）与链球菌蛋白Ｇ亲和胶（Ｇａｍ ｍ ａ Ｂｉｎｄ）交联制备亲和层析柱，用一步法从工程菌培养上清中纯化人源抗ＨＢ... 目的：探索亲和纯化人源单克隆抗体片段的简便实用方法。方法：应用自制的抗人免疫球蛋白片段抗体（Ａｎｔｉ－Ｆａｂ）与链球菌蛋白Ｇ亲和胶（Ｇａｍ ｍ ａ Ｂｉｎｄ）交联制备亲和层析柱，用一步法从工程菌培养上清中纯化人源抗ＨＢｓ单克隆Ｆａｂ 片段。经依沙吖啶沉淀、离子交换、分子筛纯化人混合血清提取ＩｇＧ组分，木瓜酶处理后分离、纯化出Ｆａｂ，免疫绵羊制备高效价抗血清。用Ｇａｍ ｍ ａＢｉｎｄ 一步纯化出抗血清中的ＩｇＧ组分，再将该ＩｇＧ经交联剂与Ｇａｍ ｍ ａ Ｂｉｎｄ 交联后制成亲和胶。人源抗ＨＢｓ阳性菌培养上清与亲和胶共育后装柱，ＰＢＳ洗去非特异结合蛋白，再用５ ｍ ｏｌ／Ｌ氯化锂洗脱特异Ｆａｂ。结果：聚丙烯酰胺电泳纯化产物显示，纯化后的抗体片段在电泳中形成单一区带，达到电泳纯；用酶标抗Ｆａｂ 抗体免疫印迹结果证明，电泳显示的单一区带为Ｆａｂ 蛋白区带；抗原特异Ｄｏｔｂｌｏｔ检测表明，该法制备出的Ｆａｂ 保持了抗原结合活性。结论：本实验建立的一步亲和纯化法具操作简便、纯化快速和高效的特点，是人源性单克隆抗体Ｆａｂ 展开更多

关键词 乙型肝炎 抗HBS 单克隆抗体 FAB片段

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自身抗原Ro-60 cDNA克隆构建及表达 被引量：4

6

作者 邓安梅 仲人前 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期20-22,共3页

目的：采用基因工程方法克隆并表达自身抗原Ｒｏ－６０融合蛋白。方法：用ＰＣＲ法克隆Ｒｏ－６０多肽分子的ｃＤＮＡ，经测序证实后定向插入表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ，并经酶切电泳鉴定。进而导入大肠杆菌ＪＭ１０９中表达重组融合蛋白... 目的：采用基因工程方法克隆并表达自身抗原Ｒｏ－６０融合蛋白。方法：用ＰＣＲ法克隆Ｒｏ－６０多肽分子的ｃＤＮＡ，经测序证实后定向插入表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ，并经酶切电泳鉴定。进而导入大肠杆菌ＪＭ１０９中表达重组融合蛋白。结果：经蛋白印迹证实，重组融合蛋白具有Ｒｏ抗原性。结论：重组融合蛋白可用于对Ｒｏ抗原表位的精确定位，分析特定抗原表位与疾病的相关性及制备重组抗原用于临床检测。 展开更多

关键词 自身抗原 聚合酶链反应 CDNA Ro-60抗原 克隆

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子宫内膜异位症患者外周血及腹腔液中自然杀伤细胞的测定 被引量：3

7

作者 李文 杨帆 +3 位作者 杨云纺 金志军 张玲珍 李立 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期133-134,共2页

很多证据表明子宫内膜异位症（ＥＭ）与免疫机能的改变有着密切的关系。自然杀伤（ＮＫ）细胞是人体免疫的第一线防御细胞，在体内多种生理及病理过程中均发挥着重要作用。本研究对ＥＭ患者外周血及腹腔液ＮＫ细胞活性及数量进行检测，... 很多证据表明子宫内膜异位症（ＥＭ）与免疫机能的改变有着密切的关系。自然杀伤（ＮＫ）细胞是人体免疫的第一线防御细胞，在体内多种生理及病理过程中均发挥着重要作用。本研究对ＥＭ患者外周血及腹腔液ＮＫ细胞活性及数量进行检测，以探讨ＮＫ细胞在ＥＭ发病机制中的作... 展开更多

关键词 子宫内膜异位 外周血 腹腔液 自然杀伤细胞

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生物工程技术制备人源抗-HBs Fab片段 被引量：4

8

作者 安峰 陈玉川 +1 位作者 陆慧琦 韩焕兴 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期74-76,共3页

目的:用生物工程技术制备人源性抗-HBs F-ah。方法:将从抗体文库中筛选出的人源抗-HBs Fab基因克隆人pBAD/gⅢA载体,进而转化Top10大肠杆菌。对重组质粒菌发酵表达后,利用Ni-NTA-Agarose螯合层析柱纯化周质腔可溶性Fab 蛋白。对所得包... 目的:用生物工程技术制备人源性抗-HBs F-ah。方法:将从抗体文库中筛选出的人源抗-HBs Fab基因克隆人pBAD/gⅢA载体,进而转化Top10大肠杆菌。对重组质粒菌发酵表达后,利用Ni-NTA-Agarose螯合层析柱纯化周质腔可溶性Fab 蛋白。对所得包涵体依次变性、溶解、纯化后,利用透析进行复性。用Western blot检测Fab蛋白的特异性,Dot blot测定其生物学活性。结果:经Ni-NTA-Agarose柱纯化的周质腔可溶性Fab蛋白,有较好的生物学活性,并且总量达到80mg/L。对所获包涵体进行透析复性后,也可得到少量有活性的蛋白,但比例很小。结论:用pBAD/gⅢA-Top10表达系统表达人源抗-HBs Fab片段,发酵培养后,经有效纯化可得到生物学活性较好的可溶性蛋白,为人源抗-HBs Fab片段的大量制备提供了有效手段。 展开更多

关键词 FAB片段 六聚组氨酸尾 亲和层析 生物工程技术

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四氯化碳诱发大鼠肝硬变过程中血清和肝组织透明质酸含量的变化 被引量：4

9

作者 高锋 曹曼林 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期333-335,共3页

用四氯化碳诱发大鼠出现肝脏纤维化，采用ＥＬＩＳＡ方法检测大鼠血清和肝组织匀浆中透明质酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ，ＨＡ）的含量，并分析ＨＡ与肝组织病理改变之间的关系。结果发现，血清ＨＡ含量在大鼠肝脏受损后早期即增加，并... 用四氯化碳诱发大鼠出现肝脏纤维化，采用ＥＬＩＳＡ方法检测大鼠血清和肝组织匀浆中透明质酸（Ｈｙａｌｕｒｏｎａｔｅ，ＨＡ）的含量，并分析ＨＡ与肝组织病理改变之间的关系。结果发现，血清ＨＡ含量在大鼠肝脏受损后早期即增加，并随肝组织损伤程度的加重而升高。肝组织内ＨＡ含量在肝硬变完全形成期时才明显高于正常组，与肝组织病理改变没有明显相关性。提示血清ＨＡ含量是早期判断肝细胞损伤和肝纤维化程度的有用指标。 展开更多

关键词 四氯化碳 透明质酸 肝硬变 大鼠

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人源性抗HBsAg单克隆抗体Fab片段的制备及其纯化 被引量：2

10

作者 范列英 韩焕兴 +1 位作者 胡东平 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期334-336,共3页

目的：制备人源性重组ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段。方法：采用固相ＨＢｓＡｇ，从已建立的人源性抗体组合文库中筛选针对ＨＢｓＡｇ的抗体子文库，并转入大肠杆菌中表达。反复冻融细菌，获得可溶性Ｆａｂ片段。制备羊抗人ＩｇＧＦａｂ抗... 目的：制备人源性重组ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段。方法：采用固相ＨＢｓＡｇ，从已建立的人源性抗体组合文库中筛选针对ＨＢｓＡｇ的抗体子文库，并转入大肠杆菌中表达。反复冻融细菌，获得可溶性Ｆａｂ片段。制备羊抗人ＩｇＧＦａｂ抗体亲和层析柱、纯化Ｆａｂ片段。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及点印迹法分析鉴定纯化后Ｆａｂ片段的纯度及结合ＨＢｓＡｇ的能力。结果：蛋白印迹显示转化后的细菌内有可溶性Ｆａｂ片段的表达。纯化后的Ｆａｂ片段达免疫纯，并具有特异性结合ＨＢｓＡｇ的能力。结论：该研究为人源性抗ＨＢｓＡｇＦａｂ用于临床治疗打下基础。 展开更多

关键词 乙肝病毒 表面抗原 抗体 FAB片段 纯化

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鼻咽癌组织中BHRF1基因的研究 被引量：3

11

作者 黄海 潘星华 +6 位作者 周水淼 李兆基 温武 余龙 孔宪涛 孙喜元 傅强 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期85-86,共2页

目的：探讨鼻咽癌组织中ＥＢ病毒基因ＢＨＲＦ１的存在和表达与癌细胞分化及其患者预后间的关系。方法：利用斑点杂交技术检测鼻咽未分化癌、低分化及高分化鳞癌中ＢＨＲＦ１的存在和表达情况，并且观察患者对放疗的效果。结果：ＢＨＲ... 目的：探讨鼻咽癌组织中ＥＢ病毒基因ＢＨＲＦ１的存在和表达与癌细胞分化及其患者预后间的关系。方法：利用斑点杂交技术检测鼻咽未分化癌、低分化及高分化鳞癌中ＢＨＲＦ１的存在和表达情况，并且观察患者对放疗的效果。结果：ＢＨＲＦ１的存在与表达与鼻咽癌的分化无关，但其表达可导致癌细胞对辐射敏感性的下降（Ｐ＜０．０１）。结论：ＢＨＲＦ１在鼻咽癌细胞中的表达可增强其抵抗辐射诱发细胞凋亡的能力，这在鼻咽癌诊断、治疗和预后判断上具有重要意义。 展开更多

关键词 EB病毒基因 鼻咽肿瘤 细胞分化

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TNF诱导肿瘤细胞产生氧自由基 被引量：2

12

作者 李进 孔宪涛 +4 位作者 赵亚南 沙金 燕惠宁 朱玲仙 张其 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期51-53,共3页

目的：了解氧自由基的产生与ＴＮＦ抗肿瘤活性之间的关系。方法：采用３Ｈ－ＴｄＲ摄入法测定ＴＮＦ对胃癌细胞株Ｘ－１０８、卵巢癌细胞株３ＡＯ和ＡＯ肿瘤细胞的杀伤活性；用细胞色素Ｃ氧化法测定靶细胞经ＴＮＦ刺激后产生的超氧离子... 目的：了解氧自由基的产生与ＴＮＦ抗肿瘤活性之间的关系。方法：采用３Ｈ－ＴｄＲ摄入法测定ＴＮＦ对胃癌细胞株Ｘ－１０８、卵巢癌细胞株３ＡＯ和ＡＯ肿瘤细胞的杀伤活性；用细胞色素Ｃ氧化法测定靶细胞经ＴＮＦ刺激后产生的超氧离子水平。结果：ＴＮＦ对Ｘ－１０８、ＡＯ有较明显的杀伤活性，３Ｈ－ＴｄＲ摄入量的降低与ＴＮＦ浓度的增加一致，而３ＡＯ则对ＴＮＦ呈明显的抵抗。Ｘ－１０８细胞株在经ＴＮＦ处理８ｈ后即可检测出超氧离子，并且在２４ｈ后达到高峰。Ｘ－１０８和ＡＯ细胞内超氧离子的水平与ＴＮＦ的剂量有关。对于抵抗ＴＮＦ的３ＡＯ卵巢癌细胞株，其超氧离子的水平与对照组无明显差别。阿霉素能够增强ＴＮＦ诱导氧自由基的能力。结论：ＴＮＦ的受体后效应——自由基的产生可能是ＴＮＦ杀伤靶细胞的重要机制之一。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 肿瘤 肿瘤细胞 氧自由基

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LPS结合蛋白的结构和功能 被引量：2

13

作者 赵虎 周庭银 孔宪涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第1期91-92,共2页

关键词 LBP LPS 结构 功能 结构蛋白

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脑胶质瘤浸润淋巴细胞的分离、培养、NK细胞活性和T细胞表型研究 被引量：2

14

作者 李有君 朱诚 +2 位作者 张光霁 周小平 孔宪涛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1993年第3期152-154,共3页

本文应用酶消化和不连续密度梯度离心法,从9例原发性脑胶质瘤手术切除的瘤组织中分离出胶质瘤浸润淋巴细胞(GIL),在含IL-2培养液内培养4周,GIL 平均扩增48.4倍,最高达118倍;新制备GIL 的NK 活性极低,经过1周培养,NK 活性明显升高;新制备... 本文应用酶消化和不连续密度梯度离心法,从9例原发性脑胶质瘤手术切除的瘤组织中分离出胶质瘤浸润淋巴细胞(GIL),在含IL-2培养液内培养4周,GIL 平均扩增48.4倍,最高达118倍;新制备GIL 的NK 活性极低,经过1周培养,NK 活性明显升高;新制备GIL 中CD_3^+细胞为71.0士11.9%,其中CD_8^+细胞多于CD_4^+细胞。 展开更多

关键词 脑胶质瘤 淋巴细胞 天然 杀伤细胞

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骨质中硫酸软骨素类蛋白多糖的类型和特征 被引量：3

15

作者 赵虎 周庭银 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第2期231-233,共3页

采用骨质蛋白质的三步 (盐酸胍 - EDTA-盐酸胍 )提取法 ,较完全地提取兔长骨和人牙槽骨骨质中各类蛋白多糖 ( PGs) ,并采用凝胶过滤和离子交换柱层析等方法进行纯化 ,再用单克隆抗体 ( MAb2 B6、MAb3B3和 MAb1 B5)检测、分析其中 PGs的... 采用骨质蛋白质的三步 (盐酸胍 - EDTA-盐酸胍 )提取法 ,较完全地提取兔长骨和人牙槽骨骨质中各类蛋白多糖 ( PGs) ,并采用凝胶过滤和离子交换柱层析等方法进行纯化 ,再用单克隆抗体 ( MAb2 B6、MAb3B3和 MAb1 B5)检测、分析其中 PGs的类型和性质 .结果表明 ,兔长骨中 PGs的主要类型为 DS类 ( 4 5k D)、C6S类 ( 2 0 0 k D)、C4S类 ( 4 5k D)和 COS类 ( 2 0 0 k D) PG;人牙槽骨中则主要含 DS类 PG( 4 5k D) ,和少量 COS类 PG( 4 5k D和 1 1 0 k D) ,未发现 C4S类 PG.根据此结果可以推测 ,兔长骨以混合方式 (软骨成骨和类骨质成骨 )骨化 ,而人牙槽骨则以类骨质成骨为主 .两者骨质结构和损伤后修复方式可能也有一定的差异 . 展开更多

关键词 蛋白多糖 CS 骨质结构 成骨方式 骨损伤修复

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表达HBV的SMMC-7721人肝癌细胞系模型的建立 被引量：1

16

作者 谭龙益 王皓 孔宪涛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期120-122,共3页

目的：建立表达ＨＢＶ的体外培养的细胞克隆，为研究ＨＢＶ的生物学性状提供良好的细胞模型。方法：将３．２ｋｂＨＢＶＤＮＡ插入携带新霉素抗药基因的真核细胞表达载体ｐＣＮＣＸ，应用磷酸钙沉淀技术将其导入体外培养的ＳＭＭＣ－７... 目的：建立表达ＨＢＶ的体外培养的细胞克隆，为研究ＨＢＶ的生物学性状提供良好的细胞模型。方法：将３．２ｋｂＨＢＶＤＮＡ插入携带新霉素抗药基因的真核细胞表达载体ｐＣＮＣＸ，应用磷酸钙沉淀技术将其导入体外培养的ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞系。结果：成功地获得表达ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ的细胞克隆。结论：应用磷酸钙沉淀技术将ＨＢＶＤＮＡ导入体外培养的细胞克隆，获得能表达ＨＢＶ的细胞克隆。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 基因组 基因转染 肝肿瘤

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链球菌蛋白G快速纯化人源生物工程抗体 被引量：2

17

作者 韩焕兴 罗荣城 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第5期425-426,共2页

目的 根据链球菌蛋白Ｇ与人抗体的Ｆａｂ片段有弱结合位点的行生，探索应用蛋白Ｇ亲合纯化原核表达的人源ｍＡｂ片段的可行性，为人源基因工程抗体的批量制备提供依据。方法 扩增抗ＨＢｓ＋菌株。经ＩＰＴＧ诱导表达后制备表达产物上... 目的 根据链球菌蛋白Ｇ与人抗体的Ｆａｂ片段有弱结合位点的行生，探索应用蛋白Ｇ亲合纯化原核表达的人源ｍＡｂ片段的可行性，为人源基因工程抗体的批量制备提供依据。方法 扩增抗ＨＢｓ＋菌株。经ＩＰＴＧ诱导表达后制备表达产物上清，上商品化链球菌蛋白Ｇ亲合胶（ＧａｍｍａＢｉｎｄ）反应。ＰＢＳ洗去非特异结合蛋白。梯６度酸洗脱结合ＵＶ检测观察解离效果。聚丙烯酰胺凝胶电脉（ＰＡＧＥ）检验纯化产物的纯度，Ｄｏｔｙ 展开更多

关键词 人源基因工程抗体 亲和层析 链球菌蛋白G 纯化

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肝纤维化中decorin与某些细胞因子的关系 被引量：1

18

作者 王桂琴 孔宪涛 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2000年第2期73-75,共3页

关键词 肝纤维化 DECORIN 细胞因子

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整合素诱导酪氨酸磷酸化蛋白在成纤维细胞原胶原基因表达中的作用

19

作者 洪微 孔宪涛 +1 位作者 陈敏亮 廖万清 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期353-355,共3页

目的：研究粘附分子整合素的细胞内信号传导途径之一——酪氨酸磷酸化在成纤维细胞表达原胶原基因中的作用。方法：利用抗整合素单抗及相应二抗的交联作用，模拟整合素在成纤维细胞表面簇集而诱导酪氨酸磷酸化，用蛋白印迹和ＲＴ－ＰＣ... 目的：研究粘附分子整合素的细胞内信号传导途径之一——酪氨酸磷酸化在成纤维细胞表达原胶原基因中的作用。方法：利用抗整合素单抗及相应二抗的交联作用，模拟整合素在成纤维细胞表面簇集而诱导酪氨酸磷酸化，用蛋白印迹和ＲＴ－ＰＣＲ技术分别检测诱导生成的酪氨酸磷酸化蛋白和Ⅰ型原胶原ｍＲＮＡ水平；并观察阻断酪氨酸磷酸化后，酪氨酸磷酸化蛋白和Ⅰ型原胶原ｍＲＮＡ的变化。结果：整合素β１亚基在成纤维细胞表面簇集可诱导相对分子质量分别为９８０００和６５０００的酪氨酸磷酸化蛋白，且Ⅰ型原胶原ｍＲＮＡ的表达显著增加（Ｐ＜０．０１）；阻断酪氨酸磷酸化，不仅酪氨酸磷酸化蛋白显著减少（Ｐ＜０．０１），而且Ⅰ型原胶原ｍＲＮＡ的表达也降低（Ｐ＜０．０５）。结论：整合素β１亚基在成纤维细胞表面簇集诱导的酪氨酸磷酸化蛋白在Ⅰ型原胶原基因表达中具有重要作用。 展开更多

关键词 整合素 成纤维细胞 原胶原蛋白 酪氨酸磷酸化

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腺相关病毒末端反向重复顺序折叠结构在真核细胞染色体基因组上的整合作用

20

作者 郭葆玉 胡宗林 +2 位作者 徐惠敏 孔宪涛 陆德如 《第二军医大学学报》 CSCD 北大核心 1994年第5期423-427,共5页

腺相关病毒（Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ，ＡＡＶ）是一类线状单股ＤＮＡ（ＳＳ－ＤＮＡ）的微小病毒。依据Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ的ＳＳ－ＤＮＡ病毒复制模型原理，将其末端反向重复顺序（ＩＴＲｓ）分离，变... 腺相关病毒（Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ，ＡＡＶ）是一类线状单股ＤＮＡ（ＳＳ－ＤＮＡ）的微小病毒。依据Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ的ＳＳ－ＤＮＡ病毒复制模型原理，将其末端反向重复顺序（ＩＴＲｓ）分离，变为折叠十字架结构，再以其发夹中的３＇－ＯＨ为引物合成另一股姊妹染色体ＤＮＡ，然后共价连接到亲代分子上，与辅助病毒Ａｄ２和ＰＡＡＶ／Ａｄ共转染真核生物细胞。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分子杂交结果表明：插入这一折叠结构中由ＳＶ４０早期启动子控制的报告基因－新霉素抗性基因拷贝已整合到细胞基因组染色体上，这种以无细菌ＤＮＡ分子为支架的折叠结构不仅证明了Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ的理论，而且可望为外源基因导入真核细胞提供新的又一系统。 展开更多

关键词 腺相关病毒 折叠结构 新霉素抗性基因 基因转导

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