干细胞研究中的化学生物学:学科交叉的新前沿 被引量：4

1

作者 李文林 张冠宇 孙平新 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期133-141,共9页

化学生物学(chemical biology)是利用小分子化合物干预和解析生物系统,认识生物系统的本质和内在规律的学科,在包括干细胞研究在内的多个领域得到应用。近年来,干细胞研究取得了引人瞩目的进步,这些基础研究的进步也正在推动着干细胞技... 化学生物学(chemical biology)是利用小分子化合物干预和解析生物系统,认识生物系统的本质和内在规律的学科,在包括干细胞研究在内的多个领域得到应用。近年来,干细胞研究取得了引人瞩目的进步,这些基础研究的进步也正在推动着干细胞技术在再生医学中的应用。对细胞命运转换分子基础的认识以及精确操控是干细胞研究的核心问题。小分子化合物因其在使用的便捷性、可控性和功能多样性等方面的显著优势,正越来越多地被用于干预和研究干细胞的增殖、分化和重编程等生物学行为。利用化学分子调控体内干细胞的生物学行为、促进其体内再生和修复将有望成为再生医学领域极具潜力的发展方向。 展开更多

关键词 干细胞 化学生物学 细胞命运 重编程

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锌指蛋白ZBTB20生物学功能的研究进展 被引量：2

2

作者 刘淦 陈李斌佶 +1 位作者 谢志芳 章卫平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期525-529,共5页

锌指蛋白ZBTB20是ZBTB锌指蛋白亚家族的新成员,与已知的BCL6和PLZF同源。通过基因打靶小鼠和疾病人群研究,学者们发现ZBTB20在肝脏、胰岛、神经系统和免疫系统等多个器官与系统中具有重要生理学功能,是个体发育、学习记忆、痛觉感受、... 锌指蛋白ZBTB20是ZBTB锌指蛋白亚家族的新成员,与已知的BCL6和PLZF同源。通过基因打靶小鼠和疾病人群研究,学者们发现ZBTB20在肝脏、胰岛、神经系统和免疫系统等多个器官与系统中具有重要生理学功能,是个体发育、学习记忆、痛觉感受、糖脂代谢等正常生理过程所必需的调节分子。ZBTB20表达或功能异常可导致个体发育障碍,与智障、肿瘤和代谢性疾病等多种重大疾病的病理生理过程密切相关。作为甲胎蛋白基因的主要转录抑制因子,ZBTB20在出生后肝脏甲胎蛋白基因的表达失活中发挥了关键性作用,且与肝癌预后密切相关。人群中ZBTB20基因的缺失与多种肿瘤有关,其点突变可导致Primrose综合征。本文就ZBTB20的生物学功能研究进展作一综述。 展开更多

关键词 锌指蛋白 ZBTB20 转录因子 生理与病理生理 基因打靶

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利用分叶顺次肝切除术建立小鼠肝脏大部切除后再生模型 被引量：12

3

作者 汤朝晖 周露婷 +4 位作者 谢志芳 胡以平 杨甲梅 章卫平 吴孟超 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期524-526,共3页

目的:利用肝部分切除术,建立可准确量化和易于操控的小鼠肝脏再生模型,为研究肝脏再生的细胞和分子生物学机制及其病理学意义提供技术平台。方法:正常成年C57BL/6小鼠经心脏灌注固定后,逐叶分离肝脏、称重,计算各肝叶所占肝重的百分比;... 目的:利用肝部分切除术,建立可准确量化和易于操控的小鼠肝脏再生模型,为研究肝脏再生的细胞和分子生物学机制及其病理学意义提供技术平台。方法:正常成年C57BL/6小鼠经心脏灌注固定后,逐叶分离肝脏、称重,计算各肝叶所占肝重的百分比;麻醉状态下,分叶顺次无菌切除小鼠肝脏的左外叶、左中叶和右中叶,建立肝脏大部切除的再生模型;利用RT-PCR方法动态检测术后肝脏甲胎蛋白基因的激活表达特征。结果:肝左外叶、左中叶和右中叶合计约占小鼠肝脏总重量的68%,分叶顺次切除上述3个肝叶,术后动物恢复和存活状态良好,RT-PCR结果证实甲胎蛋白基因在小鼠肝脏再生中的激活表达。结论:利用分叶顺次肝切除术,成功建立了小鼠的肝大部切除后再生模型,该方法可准确量化肝脏切除的程度,具有可控性强、简便易行和成功率高等优点,为小鼠肝再生的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 肝解剖 肝部分切除术 肝再生

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胚胎干细胞转染外源基因教学实验优化 被引量：1

4

作者 陈费 王敏君 +2 位作者 姚浩 刘清桂 胡以平 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2017年第2期50-52,共3页

针对胚胎干细胞的培养和外源基因转染实验教学过程中,存在学生培养的胚胎干细胞状态较差、转染外源基因效率偏低等问题,通过实验探索,发现通过控制接种滋养层细胞的密度、悬浮转染代替传统贴壁转染的方法,可显著改善上述问题。该探索不... 针对胚胎干细胞的培养和外源基因转染实验教学过程中,存在学生培养的胚胎干细胞状态较差、转染外源基因效率偏低等问题,通过实验探索,发现通过控制接种滋养层细胞的密度、悬浮转染代替传统贴壁转染的方法,可显著改善上述问题。该探索不仅优化了转染方法、提高了教学效果,也为学生培养科研能力奠定了基础。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 基因转染 实验优化

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MafA逆转录病毒表达载体的构建及其在肝原始细胞中的稳定表达 被引量：1

5

作者 金彩霞 李文林 +1 位作者 徐方 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期465-468,共4页

目的:构建表达MafA(v-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homologue A)的逆转录病毒表达载体,并建立稳定表达MafA的肝原始细胞系(liver epithelial progenitor cells,LEPCs)。方法:通过PCR方法克隆MafA基因全长.将其构建到p... 目的:构建表达MafA(v-maf musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homologue A)的逆转录病毒表达载体,并建立稳定表达MafA的肝原始细胞系(liver epithelial progenitor cells,LEPCs)。方法:通过PCR方法克隆MafA基因全长.将其构建到pBMN—Z—IRES-Neo逆转录病毒载体中获得pBMN—MafA—Neo载体;将该载体导入Phoenix包装细胞系,收集病毒上清并感染LEPCs,筛选稳定表达MafA的LEPCs;RT-PCR方法检测MafA表达对LEPCs分子表型的影响。结杲:成功构建pBMN—MafA-Neo载体,并获得稳定表达MafA基因的肝原始细胞系(LEPCs—MafA)。LEPCs-MafA细胞GK和GLUT2基因表达高于LEPCs。结论:成功获得稳定表达MafA的肝原始细胞系,为研究MafA诱导肝干细胞向胰腺细胞转分化奠定了基础。 展开更多

关键词 MAFA 逆转录病毒载体 肝原始细胞系

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少突胶质细胞前体细胞移植治疗中枢神经系统脱髓鞘疾病的研究进展 被引量：4

6

作者 张冠宇 孙平新 李文林 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期7-14,共8页

脱髓鞘疾病是一类以髓鞘脱失为主要特征的神经系统疾病。脱髓鞘疾病可严重影响患者生活质量,并且目前鲜有令人满意的治疗方法。少突胶质细胞前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)是存在于中枢神经系统(central nervous syste... 脱髓鞘疾病是一类以髓鞘脱失为主要特征的神经系统疾病。脱髓鞘疾病可严重影响患者生活质量,并且目前鲜有令人满意的治疗方法。少突胶质细胞前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)是存在于中枢神经系统(central nervous system,CNS)中,具有迁移、增殖及分化为成熟少突胶质细胞(oligodendrocytes,OLs)能力的前体细胞。OLs是CNS中的成髓鞘细胞,因此OPCs与CNS中髓鞘的发生和损伤后再生都密切相关。近些年对OPCs发育和分化分子基础研究的深入直接推动了利用多能干细胞定向分化以及体细胞谱系重编程等手段获得OPCs的进步,使OPCs移植成为可能治疗CNS脱髓鞘疾病的新方法。本文对近些年的相关研究进行了综述。 展开更多

关键词 中枢神经系统疾病 脱髓鞘疾病 少突胶质细胞前体细胞 细胞移植

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肝干细胞研究进展 被引量：2

7

作者 陆炼 于兵 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期493-500,共8页

肝干细胞是具有自我更新能力和分化为成熟肝细胞与胆管上皮细胞的双向分化潜能的原始细胞。肝干细胞不仅参与了肝脏的稳态维持、损伤修复和肝再生,而且在肝脏疾病的细胞治疗、人工生物肝及肝导向基因治疗中有着巨大的应用潜能。本文对... 肝干细胞是具有自我更新能力和分化为成熟肝细胞与胆管上皮细胞的双向分化潜能的原始细胞。肝干细胞不仅参与了肝脏的稳态维持、损伤修复和肝再生,而且在肝脏疾病的细胞治疗、人工生物肝及肝导向基因治疗中有着巨大的应用潜能。本文对几种主要类型的肝干细胞及它们的来源、分子标志物等进行了综述。 展开更多

关键词 干细胞 胚胎肝干细胞 成体肝干细胞 肝再生

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血清和无血清诱导方法分化小鼠胚胎干细胞为定形内胚层的比较 被引量：1

8

作者 李阳芳 兰勇 +2 位作者 张亚卓 王欣 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期124-129,共6页

目的比较两种方法(血清诱导方法和无血清诱导方法)诱导小鼠胚胎干细胞分化为定形内胚层细胞的效率。方法利用血清诱导法和无血清诱导法分别诱导分化小鼠胚胎干细胞,根据定形内胚层表面标记蛋白(Cxcr4、c-Kit和E-cadherin)的表达,通过流... 目的比较两种方法(血清诱导方法和无血清诱导方法)诱导小鼠胚胎干细胞分化为定形内胚层细胞的效率。方法利用血清诱导法和无血清诱导法分别诱导分化小鼠胚胎干细胞,根据定形内胚层表面标记蛋白(Cxcr4、c-Kit和E-cadherin)的表达,通过流式细胞术分析定形内胚层诱导的时间及效率,并利用RT-PCR检测两种方法诱导的定形内胚层基因表达谱;同时利用荧光定量PCR检测无血清诱导过程中内胚层基因的表达情况;利用流式细胞术分选Cxcr4和c-Kit双阳性细胞进行定形内胚层基因表达的鉴定。结果血清诱导法和无血清诱导法都能够将胚胎干细胞诱导分化为定形内胚层,其中无血清组的诱导效率高于血清组,高达74.19%,并且在诱导的第4天就能到达峰值。结论建立了高效快捷的诱导胚胎干细胞分化为定形内胚层细胞的方法,为进一步向肝、胰等组织细胞诱导打下了基础。 展开更多

关键词 胚胎干细胞 定形内胚层 细胞分化 血清

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小鼠肝脏中细胞角蛋白19阳性细胞的肝向分化特性

9

作者 陆炼 陈费 +2 位作者 于兵 赵健 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期536-542,共7页

目的明确小鼠肝脏中的细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)阳性(CK19^+)细胞是否可分化为成熟肝细胞。方法利用CK19^(CreERT)小鼠和Rosa26-GFP小鼠杂交得到CK19^(CreERT)/Rosa26-GFP双转基因小鼠,注射他莫昔芬(tamoxifen,TM)后检测小鼠... 目的明确小鼠肝脏中的细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)阳性(CK19^+)细胞是否可分化为成熟肝细胞。方法利用CK19^(CreERT)小鼠和Rosa26-GFP小鼠杂交得到CK19^(CreERT)/Rosa26-GFP双转基因小鼠,注射他莫昔芬(tamoxifen,TM)后检测小鼠肝脏中CK19^+细胞的GFP标记情况。在此基础上分别构建3,5-二乙氧基羰基-1,4-二氢-2,4,6-三甲基吡啶和四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)肝脏损伤模型,采用肝脏组织冰冻切片结合免疫荧光染色检测肝脏中GFP标记的CK19^+细胞的分化情况。结果获得CK19^(CreERT)/Rosa26-GFP双转基因小鼠,免疫荧光染色结果显示CK19^+细胞可被GFP标记。在DDC肝脏损伤模型小鼠中检测到增生性小胆管内有GFP^+细胞,这些GFP^+细胞表达胆管上皮细胞标志物CK19,且DDC肝损伤模型小鼠中GFP^+胆管细胞比例高于未损伤对照组[(63.5±6.3)%vs(53.6±4.8)%,P<0.05];在CCl4肝损伤模型组小鼠中检测到肝脏实质细胞中有GFP^+细胞,这些GFP^+细胞表达成熟肝细胞标志物白蛋白(ALB),且CCl4肝损伤模型组小鼠肝脏中GFP^+细胞比例高于未损伤对照组[(0.15±0.02)%vs(0.008±0.003)%,P<0.01]。结论小鼠肝脏内的CK19^+细胞群体中存在具有肝向分化潜能的前体细胞,可能为真正的肝干细胞的识别鉴定提供一个新线索。 展开更多

关键词 肝干细胞 CK19 转基因小鼠 CK19CreERT Rosa26-GFP

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重组乙型肝炎病毒变异s基因的表达及其抗原性的分析 被引量：3

10

作者 葛军辉 张乐之 +5 位作者 姚玉成 刘会敏 王新民 余宏宇 何金 胡以平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期565-567,574,共4页

目的　构建乙型肝炎病毒 (HBV)变异s基因真核表达载体 ,研究变异所致乙肝表面抗原 (HBsAg)免疫学性状的改变。方法　利用DraⅢ和XhoⅠ双酶切含有突变位点的HBVDNA 1.2拷贝的质粒P3.8Ⅱ ,获得 90 4bp带有突变点的HBV S基因片段。将其置... 目的　构建乙型肝炎病毒 (HBV)变异s基因真核表达载体 ,研究变异所致乙肝表面抗原 (HBsAg)免疫学性状的改变。方法　利用DraⅢ和XhoⅠ双酶切含有突变位点的HBVDNA 1.2拷贝的质粒P3.8Ⅱ ,获得 90 4bp带有突变点的HBV S基因片段。将其置换含有HBVDNA(adr亚型 )S和S2片段的真核表达载体 pCMV S2 .S的相应片段 ,从而构建s基因nt5 87G→A突变的真核表达载体 pCMV S2 .S +14 5R ;并转染人肝癌细胞系HepG2 ,以获得分泌变异型HBsAg的细胞系。利用EIA及细胞免疫染色法 ,探讨变异抗原与抗 HBs结合力的变化。结果　构建了HBsAg的第 14 5位甘氨酸→精氨酸突变体的真核表达载体。将其转染哺乳动物细胞后第 3天 ,培养上清中用EIA检测HBsAg呈阳性 ,A值随时间延长而上升 ,但变异型的A值明显低于野生型。变异型与野生型HBsAg细胞免疫化学检测均有部分细胞呈阳性 ,但差别不显著。结论　HBsAg第 14 5位甘氨酸→精氨酸的突变体的真核表达载体表达产物具有良好的抗原性 ,能够与抗 HBs结合 。 展开更多

关键词 重组 S基因 乙型肝炎表面抗原 变异 真核表达 免疫细胞化学

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抗新型锌指蛋白ZBTB45单克隆抗体的制备与应用

11

作者 王燕 王科嘉 +7 位作者 李玲 陈榕 麻献华 郭小芹 张晔 邹大进 谢志芳 章卫平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1277-1281,共5页

目的制备新型锌指蛋白ZBTB45的单克隆抗体,建立该分子的体内外免疫学检测方法,为研究其生物学功能提供技术手段。方法制备小鼠ZBTB45的多表位抗原融合蛋白,免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA检测、多次有限稀释亚克隆建立分... 目的制备新型锌指蛋白ZBTB45的单克隆抗体,建立该分子的体内外免疫学检测方法,为研究其生物学功能提供技术手段。方法制备小鼠ZBTB45的多表位抗原融合蛋白,免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,经ELISA检测、多次有限稀释亚克隆建立分泌ZBTB45单克隆抗体的杂交瘤细胞株,从荷瘤小鼠的腹水中通过蛋白A柱纯化单克隆抗体,鉴定分析所制备抗体在免疫印迹、免疫沉淀和免疫组织化学中的应用效果。结果成功制备了6株抗ZBTB45的特异性单克隆抗体,其中3E5、2G4、4D2和1D4可成功用于免疫印迹和免疫沉淀分析,3E5、6D8和8E3可用于免疫组织化学检测内源性ZBTB45,具有较好的敏感性、特异性。结论首次成功制备了抗ZBTB45单克隆抗体,可应用于体外和体内的免疫学检测,为深入研究ZBTB45的生物学功能提供了技术支持。 展开更多

关键词 锌指蛋白 转录因子 ZBTB45 单克隆抗体

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重组乙型肝炎病毒变异s基因疫苗诱导小鼠产生特异性体液免疫应答

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作者 葛军辉 刘惠敏 +5 位作者 何金 李玉莉 余宏宇 叶忠 张乐之 胡以平 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期447-449,453,共4页

目的 :构建乙型肝炎病毒 (HBV)变异s基因真核表达载体 ,检测其诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。方法 :利用限制性内切酶定位克隆构建s基因nt5 87G→A的真核表达载体pCMV S2 .S +14 5R(PR)。用其转染人肝癌细胞系HepG2后 ,用EIA、ELISA... 目的 :构建乙型肝炎病毒 (HBV)变异s基因真核表达载体 ,检测其诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。方法 :利用限制性内切酶定位克隆构建s基因nt5 87G→A的真核表达载体pCMV S2 .S +14 5R(PR)。用其转染人肝癌细胞系HepG2后 ,用EIA、ELISA及免疫细胞化学法 ,观察其抗原性。以重组变异型s基因真核表达载体 (PR)和载体pcDNA3.0分别免疫C5 7BL/6小鼠各 5只。每只小鼠各肌肉注射纯化质粒 10 0 μg。用ELISA法检测血清抗 HBs及抗 HBs2抗体的效价。结果 :体外实验证实 ,变异型HBsAg可与抗 HBs结合 ;PR免疫小鼠可诱导其产生抗 HBs抗体及抗 HBs2抗体 ,但抗 HBs2抗体的出现早于抗 HBs抗体约 1～ 2wk。结论 :HBV变异s基因(nt5 87G→A)的真核表达载体的表达产物具有良好的抗原性 ,能够诱导C5 展开更多

关键词 乙型肝炎表面抗原 变异 基因疫苗 体液免疫应答

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微波技术在诊断电镜标本制备中的应用

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作者 颜永碧 陆月良 郑尊 《电子显微学报》 CAS CSCD 2000年第6期844-845,共2页

关键词 微波技术 诊断 电镜 标本制备

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诊断电镜样品的快速制备方法

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作者 陆月良 颜永碧 《电子显微学报》 CAS CSCD 2000年第6期846-846,共1页

关键词 电镜样品 诊断 快速制备 病理检查

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