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RNA干扰人端粒酶逆转录酶基因对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性抑制的研究 被引量：2
1
作者 景抗震 高建平 +2 位作者 程文 张征宇 葛京平 《医学研究生学报》 CAS 2008年第3期237-241,I0001,共6页
目的:探讨RNA干扰技术使人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因沉默,对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性的抑制作用。方法:针对hTERT基因设计构建多种siRNA表达载体,并转染至膀胱肿瘤BIU-87细胞,通过实时荧光定量、单四唑(MTT)检测端粒酶活... 目的:探讨RNA干扰技术使人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因沉默,对膀胱尿路上皮癌BIU-87细胞株端粒酶活性的抑制作用。方法:针对hTERT基因设计构建多种siRNA表达载体,并转染至膀胱肿瘤BIU-87细胞,通过实时荧光定量、单四唑(MTT)检测端粒酶活性,观察siRNA表达载体对hTERT基因表达的影响。结果:实时荧光定量和MTT检测证明,所构建的载体能导致不同程度的hTERT基因沉默,并成功地抑制BIU-87细胞的生长。结论:RNA干扰膀胱尿路上皮癌细胞(BIU-87)端粒酶hTERT基因,能影响端粒酶基因的表达,为进一步研究端粒酶活性在膀胱尿路上皮癌中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 RNA干扰 人端粒酶逆转录酶基因 端粒酶 膀胱尿路上皮癌
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内皮素A受体拮抗剂BQ123对前列腺癌PC3细胞增殖与凋亡的影响 被引量：8
2
作者 许松 高建平 +2 位作者 张征宇 葛京平 周文泉 《医学研究生学报》 CAS 2008年第7期685-688,696,共5页
目的:观察内皮素A受体拮抗剂BQ123对人前列腺癌(PCA)PC3细胞株增殖与凋亡的影响,探讨内皮素A受体拮抗剂对PCA细胞的体外抗肿瘤效应。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、划痕损伤实验、细胞迁移实验观察BQ123对人PCA PC3细胞株增殖的... 目的:观察内皮素A受体拮抗剂BQ123对人前列腺癌(PCA)PC3细胞株增殖与凋亡的影响,探讨内皮素A受体拮抗剂对PCA细胞的体外抗肿瘤效应。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、划痕损伤实验、细胞迁移实验观察BQ123对人PCA PC3细胞株增殖的抑制效应,利用Annexin V-FITC/PI染色和流式细胞术检测BQ123诱导肿瘤细胞凋亡的作用及其与细胞周期的关系。结果:BQ123对PCA PC3细胞株有抑制作用,并表现出良好的时效关系。细胞凋亡和细胞周期实验表明,BQ123可诱导PC3细胞株的凋亡,其诱导细胞凋亡的作用与细胞周期无关。结论:BQ123对PCA PC3细胞株增殖的抑制效应具有时间依赖性,并可诱导细胞凋亡,可为PCA的治疗提供一种新的思路。 展开更多
关键词 内皮素受体 前列腺癌 细胞调亡
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ALKBH2基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定 被引量：4
3
作者 龚隽 葛京平 +1 位作者 杨斌 孙颖浩 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第5期456-459,共4页
目的 ALKBH2基因高表达于尿路上皮肿瘤,RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术难以稳定均一性的下调靶基因。文中旨在构建人源ABH2基因shRNA干扰慢病毒表达载体并进行鉴定。方法选取ABH2基因,分析该基因的编码区序列,进行单链oligo的设计... 目的 ALKBH2基因高表达于尿路上皮肿瘤,RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术难以稳定均一性的下调靶基因。文中旨在构建人源ABH2基因shRNA干扰慢病毒表达载体并进行鉴定。方法选取ABH2基因,分析该基因的编码区序列,进行单链oligo的设计及合成,利用PCR对合成的oligo进行拼接反应,将合成好的序列装入pcDNA3.1(+)载体并转化至感受态细胞DH5α,测序鉴定重组克隆中基因序列后构建表达载体pcDNA3.1(+)/ABH2。根据不同的载体分为4组:siRNA-468组、siRNA-571组、siRNA-662组和对照组。根据靶基因序列设计并合成3对shRNA,构建入U6载体。将shRNA载体分别与表达载体共转染入HEK293细胞,通过QPCR检测筛选出最优干扰序列。将筛选到最有效的shRNA-571干扰序列构建入慢病毒载体pL/shRNA/F载体,用构建的慢病毒干扰载体和包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度。将LV-shRNA-571与过表达载体pcDNA3.1(+)/ABH2共转染肾癌细胞株ACHN,通过QPCR鉴定干扰效果。结果克隆测序验证无误,慢病毒载体构建成功。转染实验48 h后,收集293细胞分泌的病毒上清测定病毒的滴度为1.1×108TU/mL。对照组ABH2 mRNA相对表达量为0.785±0.082,siRNA-571组为0.078±0.006,RNAi后ABH2基因的mRNA表达水平(0.078±0.006)与对照组(0.785±0.082)相比显著降低(P<0.01),慢病毒PL/shRNA/F-ALKBH2-571对目的基因ABH2的干扰效率为92.2%。结论成功构建ABH2基因RNAi慢病毒载体并得到鉴定。 展开更多
关键词 RNA干扰 ALKBH2基因 慢病毒
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miR-199a-5p转染786-0细胞株对其生长影响的实验研究 被引量：3
4
作者 何昊玮 葛京平 +1 位作者 董杰 王林辉 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第9期921-924,共4页
目的 miRNA是肿瘤重要的调节因子,前期研究发现miR-199a-5p在肾透明细胞癌组织中表达明显下调,表明miR-199a-5p可能起到抑制肿瘤生长的作用。文中研究miR-199a-5p对人肾透明细胞癌786-0细胞的增殖、侵袭、凋亡及细胞周期的影响。方法采... 目的 miRNA是肿瘤重要的调节因子,前期研究发现miR-199a-5p在肾透明细胞癌组织中表达明显下调,表明miR-199a-5p可能起到抑制肿瘤生长的作用。文中研究miR-199a-5p对人肾透明细胞癌786-0细胞的增殖、侵袭、凋亡及细胞周期的影响。方法采用脂质体介导的基因转染技术,将实验组miR-199a-5p成熟体模拟物(mimics)及对照组阴性对照(negative control,NC)共转染人肾透明细胞癌细胞系786-0,CCK8法检测转染后786-0细胞增殖,transwell法检测转染后786-0细胞侵袭能力,流式细胞仪测定转染细胞的细胞周期及凋亡。结果实验组细胞的miR-199a-5p水平明显高于对照组(P<0.01),786-0细胞株细胞侵袭能力减弱(P<0.01),细胞增殖能力稍有增强(P<0.05),细胞凋亡、细胞周期没有明显区别(P>0.05)。结论 miR-199a-5p在体外能减弱人肾透明细胞癌细胞的侵袭过程。 展开更多
关键词 肾透明细胞癌 MIRNAS 转染 细胞侵袭
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肾集合小管癌伴持续高热1例并文献复习 被引量：3
5
作者 赵旭东 魏武 +1 位作者 程文 高建平 《医学研究生学报》 CAS 2008年第11期1229-1230,共2页
关键词 肾集合管癌 发热 诊断 肾细胞癌
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前列腺癌中EphA1基因表达的初步研究 被引量：4
6
作者 周水根 孙颖浩 +4 位作者 王建东 董迎春 许传亮 高建平 周晓军 《医学研究生学报》 CAS 2008年第5期451-454,I0001,共5页
目的:检测前列腺癌中EphA1基因转录及受体表达水平,探讨其表达异常的机制及其临床意义。方法:利用RT-PCR法检测雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3中EphA1基因mRNA表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)... 目的:检测前列腺癌中EphA1基因转录及受体表达水平,探讨其表达异常的机制及其临床意义。方法:利用RT-PCR法检测雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP和雄激素非依赖性前列腺癌细胞系PC-3中EphA1基因mRNA表达情况,采用甲基化特异性PCR(MSP)方法进行甲基化状态分析;用免疫组化方法检测19例前列腺癌和22例良性前列腺组织标本中EphA1受体表达情况。结果:LNCaP和PC-3细胞中均未检测到EphA1基因转录;PC-3细胞中EphA1基因启动子区内CpG岛存在高甲基化现象,而LNCaP细胞则不存在;前列腺癌和良性前列腺增生组织中EphA1受体表达率分别为36.8%和45.5%,其差异无统计学意义(P>0.05)。结论:前列腺癌细胞LNCaP和PC-3中无明显EphA1基因表达,甲基化可能是导致该基因下调的机制之一。EphA1基因的甲基化在前列腺癌进展及由雄激素依赖向雄激素非依赖转化过程中可能发挥一定作用。 展开更多
关键词 前列腺癌 EphA1 甲基化
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损伤控制与肾损伤的治疗 被引量：4
7
作者 赵旭东 周文泉 高建平 《医学研究生学报》 CAS 2009年第1期91-95,共5页
肾损伤时,由于其周围组织的保护作用,使它不同于腹腔内其他实质器官,对于一般性的出血具有较强的自限性,故目前对于肾损伤多倾向于保守治疗。但对于较严重的肾损伤,尤其是保守治疗无效时,手术探察往往导致较高的肾切除率。而施行损伤控... 肾损伤时,由于其周围组织的保护作用,使它不同于腹腔内其他实质器官,对于一般性的出血具有较强的自限性,故目前对于肾损伤多倾向于保守治疗。但对于较严重的肾损伤,尤其是保守治疗无效时,手术探察往往导致较高的肾切除率。而施行损伤控制性手术,简单快速地控制出血与污染,则能最大限度地保存有功能的肾组织。在重度肾损伤的救治中,损伤控制外科已越来越显示出其优越性。 展开更多
关键词 肾损伤 治疗 损伤控制外科
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EP4受体拮抗剂对激素非依赖性前列腺癌DU145细胞恶性表型的影响 被引量：2
8
作者 许松 张征宇 +2 位作者 葛京平 周文泉 王立明 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第5期460-463,共4页
目的 EP4受体与肿瘤的发生、发展关系密切,文中旨在探讨EP4受体拮抗剂对激素非依赖性前列腺癌(androgen-independent prostate cancer,AIPC)细胞的体外抗肿瘤效应。方法利用RT-PCR和Western blot检测DU145细胞中EP4受体mRNA及蛋白的表... 目的 EP4受体与肿瘤的发生、发展关系密切,文中旨在探讨EP4受体拮抗剂对激素非依赖性前列腺癌(androgen-independent prostate cancer,AIPC)细胞的体外抗肿瘤效应。方法利用RT-PCR和Western blot检测DU145细胞中EP4受体mRNA及蛋白的表达水平。采用MTT比色法、划痕愈合实验、细胞侵袭实验观察ONO-AE3-208对AIPC DU145细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制效应。用已知EP4极低水平表达的LNCaP/mock和LNCaP细胞作为对照组,DU145细胞作为实验组。结果 RT-PCR及Western blot结果显示,DU145细胞中EP4受体mRNA表达水平较对照的LNCaP和LNCaP/mock细胞分别高出4.698倍和8.137倍,EP4受体蛋白也呈现高水平表达。MTT比色法结果显示随ONO-AE3-208作用时间和浓度的增加,其对DU145细胞增殖的影响不明显(P>0.05);划痕愈合实验结果提示:经10μmol/L ONO-AE3-208作用24h,DU145细胞的细胞迁移率[(16.231±4.112)%]明显低于对照组[(48.710±7.219)%](P<0.01)。细胞侵袭实验结果提示:经0.1、1.0和10.0μmol/LONO-AE3-208作用24 h,实验组DU145细胞穿入下室细胞数[分别为(27.4±4.5)、(18.6±4.0)、(13.6±5.0)个]明显少于对照组[(38.8±5.2)个],差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EP4受体在AIPC DU145细胞中表达明显升高。EP4受体拮抗剂ONO-AE3-208对AIPC DU145的增殖无影响,对其迁移和侵袭能力有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 EP4受体 前列腺癌 恶性表型
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肾透明细胞癌相关特异miRNAs的筛选及分子网络调控机制分析 被引量：2
9
作者 何昊玮 葛京平 +1 位作者 董杰 王林辉 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2013年第5期460-464,共5页
目的 miRNAs(microRNAs)是肿瘤重要的调节因子,对细胞增殖、细胞周期的控制、逃避细胞凋亡、组织侵袭及转移、血管形成、无限复制潜力均起到重要的调节作用。文中对肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)与癌旁正常肾组... 目的 miRNAs(microRNAs)是肿瘤重要的调节因子,对细胞增殖、细胞周期的控制、逃避细胞凋亡、组织侵袭及转移、血管形成、无限复制潜力均起到重要的调节作用。文中对肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)与癌旁正常肾组织的差异miRNAs表达谱进行分子网络调控机制分析,找到关键miRNA并验证其靶基因。方法通过TargetScan预测得到差异miRNA调控的所有靶基因,并在筛选后利用GO显著性功能分析和KEGG Pathway显著性分析,构建差异miRNA与靶基因的调控网络。筛选关键miRNA及其靶基因,对miR-199a-5p调控的靶基因进行验证。结果 miR-22、miR-199a-5p、miR-429是调控网络的关键miRNA。转化生长因子β受体1(transforming growth factor-βreceptor 1,TGFBR1)、jun B原癌基因(jun B proto-cologene,JunB)是miR-199a-5p的靶基因。结论 miR-199a-5p通过抑制TGFBR1、JunB的表达在ccRCC进展过程中起到重要的调控作用。 展开更多
关键词 肾透明细胞癌 MIRNAS 靶基因 GO分析
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膀胱肿瘤术后化疗的个体化研究 被引量：2
10
作者 张征宇 高建平 葛京平 《医学研究生学报》 CAS 2005年第11期1020-1021,1024,共3页
目的:探讨膀胱肿瘤体外药物敏感试验的方法,并观察其指导临床用药的效果。方法:38例膀胱肿瘤患者作为药敏组,对其肿瘤标本在不同药物及同一药物不同浓度中进行体外细胞培养,应用单四唑(MTT)法检测其生长抑制率,并以此指导临床用药及术... 目的:探讨膀胱肿瘤体外药物敏感试验的方法,并观察其指导临床用药的效果。方法:38例膀胱肿瘤患者作为药敏组,对其肿瘤标本在不同药物及同一药物不同浓度中进行体外细胞培养,应用单四唑(MTT)法检测其生长抑制率,并以此指导临床用药及术后化疗。另以30例常规应用羟喜树碱治疗的患者为对照组,分别观察两组膀胱肿瘤的年复发次数。结果:药物对肿瘤细胞的抑制率与药物的浓度呈正相关;联合用药对肿瘤细胞的抑制率明显高于单一用药。临床观察显示,药敏组肿瘤年复发次数明显低于对照组。结论:应用MTT法检测体外培养的肿瘤细胞生长抑制率是指导膀胱癌术后灌注化疗药物选择的有效方法。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 化疗 药物敏感试验
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