恶性疟红细胞结合抗原功能区基因的克隆及其序列变异性的研究

1

作者 潘卫庆 陆德如 +1 位作者 缪为民 管惟滨 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1992年第10期20-23,共4页

关键词 疟原虫 疟疾 疫苗 基因序列

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聚乙二醇提高重组人的γ-干扰素复性的研究 被引量：2

2

作者 郑平华 陈国富 +2 位作者 王正旺 潘学工 陆德如 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1993年第10期23-26,共4页

关键词 γ 干扰素 聚乙二醇 包涵体

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组蛋白乙酰化/脱乙酰化与DNA甲基化的关系 被引量：5

3

作者 陈坚 张晓琴 傅继梁 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期362-364,共3页

组蛋白乙酰化和脱乙酰化与DNA甲基化有密切的关系。本文介绍了DNA甲基化对组蛋白乙酰化 /脱乙酰化影响 ,组蛋白乙酰化 /脱乙酰化对DNA甲基化的影响 ,以及组蛋白乙酰化

关键词 组蛋白脱乙酰化 组蛋白乙酰化 DNA甲基化

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人红细胞生成素cDNA在COS7细胞中高效表达 被引量：1

4

作者 曹韫旭 周向军 +3 位作者 童涌 娄永华 温肇荣 陆德如 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第3期266-268,共3页

利用基因重组、PCR扩增、定点突变及转译优化等程序,构建了人红细胞生成素重组表达载体pCSV-EPO,并利用DEAE-dextran法转染猴细胞系COS7获得了EPO的暂时性高表达,EPO-ELISA定量测定表达水平:转染后48h收集的上清EPO量为25ng/ml,72h为17n... 利用基因重组、PCR扩增、定点突变及转译优化等程序,构建了人红细胞生成素重组表达载体pCSV-EPO,并利用DEAE-dextran法转染猴细胞系COS7获得了EPO的暂时性高表达,EPO-ELISA定量测定表达水平:转染后48h收集的上清EPO量为25ng/ml,72h为17ng/ml。 展开更多

关键词 红细胞生成素 突变 基因转移

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重组人α8干扰素在大肠杆菌中的克隆与高表达 被引量：1

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作者 张平武 王易伦 陆德如 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第2期115-118,共4页

利用基因重组技术构建了人干扰素α８（ＩＦＮ－α８）高表达菌株Ｅ．ｃｏｌｉＸＬｌ－Ｂｌｕｅ／ｐＢｍ，经酶切鉴定、ＤＮＡ测序、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ及生物活性测定等分析，表明能特异性地表达具有生... 利用基因重组技术构建了人干扰素α８（ＩＦＮ－α８）高表达菌株Ｅ．ｃｏｌｉＸＬｌ－Ｂｌｕｅ／ｐＢｍ，经酶切鉴定、ＤＮＡ测序、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ及生物活性测定等分析，表明能特异性地表达具有生物活性的ＩＦＮ－α８，表达量达到总菌体蛋白的２３％，经复性后比活为４．８×１０７ＩＵ／ｍｇ，具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 干扰素α8 基因重组 克隆 基因表达 大肠杆菌

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用高度保守区引物和套式PCR扩增丙型肝炎病毒 被引量：1

6

作者 任少堂 秦一中 +2 位作者 汪伟业 张国兆 陈蕊雯 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第5期424-427,共4页

采用套式聚合酶链反应(PCR)方法,以具有高度保守性的丙型肝炎病毒(HCV)RNA 5′端非编码区引物对,扩增10例输血后肝炎血清,8例(80％)阳性。并将逆转录与第一轮PCR结合连续进行,使操作简便有效。间接证明了HCV上海株与世界若干地区HCV株5... 采用套式聚合酶链反应(PCR)方法,以具有高度保守性的丙型肝炎病毒(HCV)RNA 5′端非编码区引物对,扩增10例输血后肝炎血清,8例(80％)阳性。并将逆转录与第一轮PCR结合连续进行,使操作简便有效。间接证明了HCV上海株与世界若干地区HCV株5′端非编码区核酸序列具有高度同源性和保守性。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 聚合酶链反应 诊断

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高表达重组人粒细胞集落刺激因子cDNA的中国仓鼠卵巢细胞株的建立 被引量：1

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作者 陈坚 陆德如 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第6期5-8,共4页

用质粒pEF－BOS的增强子、肽链延长因子基因的启动子及其第一内含子替换质粒pED－GCSF的增强子、腺病毒主要晚期启动子及杂合内含子，构建成了更高表达质粒pEFGCSF，转染CHO－dhfr－细胞，加入并逐渐升高氨甲喋呤（MTX）的浓度。结果显... 用质粒pEF－BOS的增强子、肽链延长因子基因的启动子及其第一内含子替换质粒pED－GCSF的增强子、腺病毒主要晚期启动子及杂合内含子，构建成了更高表达质粒pEFGCSF，转染CHO－dhfr－细胞，加入并逐渐升高氨甲喋呤（MTX）的浓度。结果显示：一定范围内，随着MTX浓度增高，重组人粒细胞集落刺激因子表达量随之提高；筛选并建立了一株稳定高表达rhG－CSFcDNA的细胞株，其表达量为5．0～5．6μg／ml／3天。 展开更多

关键词 真核表达 哺乳动物细胞 启动子 质粒 hGCSF

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恶性疟P190抗原保守区Ⅰ、Ⅴ基因的亚克隆及在大肠杆菌中高效表达

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作者 潘卫庆 杨树桐 +1 位作者 邓海琳 陆德如 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第3期205-209,共5页

作者采用PCR方法克隆了我国海南省FCC1/HN株P190抗原两个保守区基因,分别定名为P190CRI和P190CRV。基因片段经纯化后连接到pUC18载体中进行DNA序列分析,结果显示:除了P190CRV中有5个碱基变换外,其余序列均与MAD20型序列一致。经序列分... 作者采用PCR方法克隆了我国海南省FCC1/HN株P190抗原两个保守区基因,分别定名为P190CRI和P190CRV。基因片段经纯化后连接到pUC18载体中进行DNA序列分析,结果显示:除了P190CRV中有5个碱基变换外,其余序列均与MAD20型序列一致。经序列分析的两个基因片段分别与pGEX-2T载体连接,经双酶切鉴定后转化感受态JM109(DE_3)大肠杆菌进行高效融合表达,并且用Sepharose 4B-谷胱甘肽层析柱进行亲和纯化,结果为:两个插入基因片段均得到高效融合表达,经一步亲和纯化后就取得高纯度的重组蛋白。 展开更多

关键词 恶性疟原虫 疟疾疫苗 遗传工程

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腺相关病毒末端反向重复顺序折叠结构在真核细胞染色体基因组上的整合作用

9

作者 郭葆玉 胡宗林 +2 位作者 徐惠敏 孔宪涛 陆德如 《第二军医大学学报》 CSCD 北大核心 1994年第5期423-427,共5页

腺相关病毒（Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ，ＡＡＶ）是一类线状单股ＤＮＡ（ＳＳ－ＤＮＡ）的微小病毒。依据Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ的ＳＳ－ＤＮＡ病毒复制模型原理，将其末端反向重复顺序（ＩＴＲｓ）分离，变... 腺相关病毒（Ａｄｅｎｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｖｉｒｕｓ，ＡＡＶ）是一类线状单股ＤＮＡ（ＳＳ－ＤＮＡ）的微小病毒。依据Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ的ＳＳ－ＤＮＡ病毒复制模型原理，将其末端反向重复顺序（ＩＴＲｓ）分离，变为折叠十字架结构，再以其发夹中的３＇－ＯＨ为引物合成另一股姊妹染色体ＤＮＡ，然后共价连接到亲代分子上，与辅助病毒Ａｄ２和ＰＡＡＶ／Ａｄ共转染真核生物细胞。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分子杂交结果表明：插入这一折叠结构中由ＳＶ４０早期启动子控制的报告基因－新霉素抗性基因拷贝已整合到细胞基因组染色体上，这种以无细菌ＤＮＡ分子为支架的折叠结构不仅证明了Ｃａｖａｌｉｅｒ－Ｓｍｉｔｈ的理论，而且可望为外源基因导入真核细胞提供新的又一系统。 展开更多

关键词 腺相关病毒 折叠结构 新霉素抗性基因 基因转导

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组蛋白脱乙酰化酶及其与基因转录的关系

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作者 陈坚 张晓琴 傅继梁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第6期609-612,共4页

含有组蛋白脱乙酰化酶活性的分子有两类 :一类是与酵母RPD3同源的分子 ,另一类是与RPD3不同源的分子 .它们各有其不同的来源 ,存在于各自的复合物中 ,催化不完全相同的组蛋白或其他蛋白质脱乙酰化 ;这些脱乙酰化酶与基因转录的调控存在... 含有组蛋白脱乙酰化酶活性的分子有两类 :一类是与酵母RPD3同源的分子 ,另一类是与RPD3不同源的分子 .它们各有其不同的来源 ,存在于各自的复合物中 ,催化不完全相同的组蛋白或其他蛋白质脱乙酰化 ;这些脱乙酰化酶与基因转录的调控存在着密切的关系 。 展开更多

关键词 组蛋白脱乙酰化酶 基因转录 组蛋白脱乙酰化

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基因重组干扰素γ对类风湿关节炎患者体内免疫调节 被引量：3

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作者 曹之舫 姜蓉 +3 位作者 王皓 孟济明 斯俊明 周奇兴 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第5期316-319,共4页

用基因重组干扰素γ（ｒＩＦＮ－γ）１．０×１０￣６Ｕ治疗类风湿关节炎（ＲＡ）患者并检测多项免疫学指标。结果表明，患者的总Ｔ淋巴细胞、Ｌ／Ｔ＿８比值无明显改变，淋巴细胞表达Ｔａｃ抗原和ＭＨＣⅡ类抗原的水平亦与治疗前... 用基因重组干扰素γ（ｒＩＦＮ－γ）１．０×１０￣６Ｕ治疗类风湿关节炎（ＲＡ）患者并检测多项免疫学指标。结果表明，患者的总Ｔ淋巴细胞、Ｌ／Ｔ＿８比值无明显改变，淋巴细胞表达Ｔａｃ抗原和ＭＨＣⅡ类抗原的水平亦与治疗前相近；但淋巴细胞转化率由治疗前的异常升高降至正常范围，单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达由６８％提高至７９％，ＨＬＡ－ＤＰ、－ＤＱ的表达则增加了一倍以上。上述结果提示ｒＩＦＮ－γ对ＲＡ具有较强的体内免疫调节作用。 展开更多

关键词 抗原 类风湿性关节炎 干扰素Γ T淋巴细胞亚群

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伴同蛋白GroE的纯化及对蛋白质复性的作用 被引量：2

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作者 郑平华 陆峰 +1 位作者 郭嘉 陆德如 《高技术通讯》 CAS CSCD 1995年第8期44-47,共4页

伴同蛋白是近几年发现的一类促进其它蛋白质“组装”而它本身并不参与终产物形成的蛋白质。为此，我们纯化了伴同蛋白ＧｒｏＥＬ、ＧｒｏＥＳ，并研究了在重组人的γ－干扰素体外复性过程中加入伴同蛋白ＧｒｏＥＬ、ＧｒｏＥＳ，使得γ... 伴同蛋白是近几年发现的一类促进其它蛋白质“组装”而它本身并不参与终产物形成的蛋白质。为此，我们纯化了伴同蛋白ＧｒｏＥＬ、ＧｒｏＥＳ，并研究了在重组人的γ－干扰素体外复性过程中加入伴同蛋白ＧｒｏＥＬ、ＧｒｏＥＳ，使得γ－干扰素复性的百分比从６．４％增加到大于５０％，比活从６．６×１０４Ｕ／ｍｇ增加到大于１．０×１０７Ｕ／ｍｇ。结果表明，伴同蛋白对蛋白质的复性是有效的。 展开更多

关键词 伴同蛋白 复性 提纯 蛋白

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恶性疟原虫FCC1/HN株MSA1抗原Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ保守区基因的亚克隆及序列分析 被引量：1

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作者 杨树桐 潘卫庆 +1 位作者 邓海琳 陆德如 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第4期301-307,共7页

P190系恶性疟原虫裂殖子表面抗原1(MSA1),是很有希望的疟疾疫苗候选抗原。根据该基因现有序列,我们设计了3对引物,在5′端引物和3′端引物前分别设有BamHI和XbaI酶切位点序列,在每个酶切位点前设有保护性碱基GC,用固相亚磷酸酰胺法在ABI... P190系恶性疟原虫裂殖子表面抗原1(MSA1),是很有希望的疟疾疫苗候选抗原。根据该基因现有序列,我们设计了3对引物,在5′端引物和3′端引物前分别设有BamHI和XbaI酶切位点序列,在每个酶切位点前设有保护性碱基GC,用固相亚磷酸酰胺法在ABI391型DNA自动合成仪上自动合成引物,合成的引物氨解、冷冻干燥后经HPLC纯化。采用聚合酶链反应(PCR)方法扩增了恶性疤原虫FCC1/HN株P190第3、4保守区和第2保守区部分序列的基因片段,分别定名为P190CR3、P190CR4和P190CR2-2,各片段均连接到pUC18载体上,用双脱氧末端终止法测定了克隆片段的DNA序列,结果表明这3个区域的DNA序列与MAD20(采自巴布亚-新几内亚)、Wellcome(采自西非)、K1(采自泰国)及CAMP(采自马尔加什)株恶性疟原虫P190相应区域比较也是高度保守的。在该基因第2保守区核苷酸第81位(相当于MAD20的732位)发生了碱基替换,由T替代了C,但未发生氨基酸的改变。 展开更多

关键词 疟原虫 保守序列 疫苗

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