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胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞表型转化的影响 被引量:6
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作者 王旭开 王燕 +2 位作者 何作云 刘光耀 杨成明 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期1090-1094,共5页
目的:探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化的影响。方法:用酶消化法分离大鼠VSMC,采用免疫组织化学法检测胰岛素作用后VSMC肌动蛋白(α-SM actin),RT-PCR检测胰岛素作用后VSMC中bFGF、TGF... 目的:探讨胰岛素对体外培养的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)表型转化的影响。方法:用酶消化法分离大鼠VSMC,采用免疫组织化学法检测胰岛素作用后VSMC肌动蛋白(α-SM actin),RT-PCR检测胰岛素作用后VSMC中bFGF、TGF-β、PDGF、matrix Gla和OPN各目的基因mRNA相对表达水平。结果:胰岛素组VSMC的3H-TdR掺入值比对照组升高47%(P<0.01),VSMC α-SM actin免疫组化结果显示对照组的α-SM actin比胰岛素组染色深。而matrixGla和OPN在培养的VSMC中mRNA的表达量,胰岛素组明显高于对照组(P<0.05),同时bFGF、TGF-β、PDGF的表达胰岛素组也明显高于对照组(P<0.05)。并可明显见到细胞骨架F-actin、G-actin重新分布。结论:在合成表型的matrix Gla和OPN表达量明显高于收缩表型,而合成表型的α-SM actin表达量明显低于收缩表型。提示胰岛素对VSMC的表型转化起了一定作用。胰岛素在促进了VSMC增殖的同时,伴有VSMC由收缩型转变为合成型及细胞骨架F-actin、G-actin重新分布。 展开更多
关键词 胰岛素 血管平滑肌细胞 细胞表型 细胞转化 酶消化法 免疫组织化学法 动脉粥样硬化 高胰岛素血症
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基因重组肿瘤坏死因子对LAK细胞体内外抗肿瘤作用的增强效果 被引量:3
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作者 曹雪涛 叶天星 +4 位作者 孔宪涛 杨嗣坤 徐志工 郑杭民 陆德如 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1991年第4期232-235,共4页
TNF单独不能诱导LAK活性,也不能进一步提高最适剂量IL-2(1000U/ml)诱导的LAK活性,但能显著增强亚适剂量IL-2(10~100U/ml)诱导的LAK活性。抗TNF单抗和抗IL-2受体β链(p75)单抗显著抑制TNF/IL-2对LAK活性的协同诱导作用。实验证明,TNF能... TNF单独不能诱导LAK活性,也不能进一步提高最适剂量IL-2(1000U/ml)诱导的LAK活性,但能显著增强亚适剂量IL-2(10~100U/ml)诱导的LAK活性。抗TNF单抗和抗IL-2受体β链(p75)单抗显著抑制TNF/IL-2对LAK活性的协同诱导作用。实验证明,TNF能显著增强IL-2/LAK细胞的体内抗肿瘤效果,对于腹水型肝癌小鼠,以联合腹腔内注射TNF/IL-2/LAK细胞的体内抗肿瘤效果最佳。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 LAK细胞 肿瘤免疫学
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人胎肝cDNA文库的构建 被引量:1
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作者 王易伦 戴建新 +2 位作者 郭瀛军 陆德如 宋树奎 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第6期531-534,共4页
从水囊引产的5^+月孕龄胎儿肝脏中提取RNA,分离含poly(A)尾的信使RNA[poly(A)^+mRNA],合成双链cDNA,定向插入λgtll表达载体,转染Y1090受体菌,构建了人胎肝cDNA文库。该文库有1.35×10~6个噬菌体,重组率为87.5%,可用寡核苷酸探针... 从水囊引产的5^+月孕龄胎儿肝脏中提取RNA,分离含poly(A)尾的信使RNA[poly(A)^+mRNA],合成双链cDNA,定向插入λgtll表达载体,转染Y1090受体菌,构建了人胎肝cDNA文库。该文库有1.35×10~6个噬菌体,重组率为87.5%,可用寡核苷酸探针和单克隆抗体两种方法筛选目的基因。 展开更多
关键词 胎肝 CDNA文库 克隆 人类
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优化mRNA翻译起始区提高人粒-巨噬细胞集落刺激因子在E.coli中的表达 被引量:2
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作者 王易伦 张平武 +2 位作者 戴建新 郭瀛军 陆德如 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第3期262-266,共5页
人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)是一种重要的造血生长因子.利用基因重组技术构建两个hGM-CSF的E.coli表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对mRNA翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变(hGM... 人粒-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)是一种重要的造血生长因子.利用基因重组技术构建两个hGM-CSF的E.coli表达菌株,一个为在不改变氨基酸顺序的前提下,对mRNA翻译起始区核苷酸顺序进行优化突变(hGM-CSF(M)),另一个为未突变的对照(hGM-CSF(N)).经酶切电泳、DNA测序、SDS-PAGE和Westernblot等分析鉴定,证明两者均能表达特异性的14.6kDhGM-CSF,但hGM-CSF(M)的表达水平较hGM-CSF(N)提高了1.26倍,占菌体总蛋白的16.9%.mRNA翻译起始区二级结构预测分析表明,优化突变后生成自由能ΔG从原来的-10.2提高至-9.4Kcal,AUG从部分配对状态变为非配对状态. 展开更多
关键词 HGM-CSF 集落刺激因子 MRNA 粒细胞 巨噬细胞
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磺化标记的DNA探针用于检测恶性疟感染的评价
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作者 缪为民 管惟滨 +4 位作者 徐晓春 周元昌 陆德如 董蓓华 陈蕊雯 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第2期107-111,共5页
采用非同位素磺化修饰法(sulfomodification),标记恶性疟原虫DNA重组质粒片段pPF14。用此探针,以斑点杂交试验检测恶性疟原虫感染,并和常规血片法进行比较。结果显示:对于体外培养的恶性疟原虫,该法可检出25 pg纯化的DNA,或0.001%的原... 采用非同位素磺化修饰法(sulfomodification),标记恶性疟原虫DNA重组质粒片段pPF14。用此探针,以斑点杂交试验检测恶性疟原虫感染,并和常规血片法进行比较。结果显示:对于体外培养的恶性疟原虫,该法可检出25 pg纯化的DNA,或0.001%的原虫率。探针和人白细胞、鼠伯氏疟原虫、约氏疟原虫DNA均无交叉反应。对179份云南省西双版纳自治州疟疾病人血样进行检测,探针法结果和血片法有较好的相关性,探针法检测恶性疟的符合率为92.5%(99/107),和间日疟的交叉反应率为1.39%(1/72),和48例正常人血无一交叉反应。 展开更多
关键词 DNA 探针 磺化修饰 疟疾
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口服伤寒—鼠伤寒双价重组疫苗的研究
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作者 曹韫旭 温肇荣 陆德如 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1993年第4期9-12,共4页
关键词 疫苗 鼠伤寒杆菌 伤寒 防疫接种
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白血病抑制因子在CHO细胞中的表达及其对U937细胞增殖的抑制作用(英文) 被引量:2
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作者 朱奎 刘厚奇 +4 位作者 刘小萍 张树忠 邹祝英 刘建国 傅继梁 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1998年第3期190-193,共4页
构建白血病抑制因子(LIF)表达质粒pEDr-LIF并通过磷酸钙-DNA共沉淀的方法转入CHO-dhfr细胞。使用不同浓度的MTX筛选高表达株。获得的最高表达株经ELISA试剂盒检测上清中LIF含量3天内达到0.2μg/ml。Southern blot检测表明LIF cDNA已经... 构建白血病抑制因子(LIF)表达质粒pEDr-LIF并通过磷酸钙-DNA共沉淀的方法转入CHO-dhfr细胞。使用不同浓度的MTX筛选高表达株。获得的最高表达株经ELISA试剂盒检测上清中LIF含量3天内达到0.2μg/ml。Southern blot检测表明LIF cDNA已经稳固整合到了宿主细胞的基因组DNA中。MTT试验表明CHO-LIF的培养上清可以显著地抑制U937的细胞增殖。 展开更多
关键词 白血病抑制因子 基因表达 CHO细胞 U937细胞
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