高原低氧改善肿瘤免疫微环境并抑制结直肠癌皮下肿瘤生长 被引量：1

1

作者 赵思洁 王猛 +3 位作者 高源 杨芳 胡绍凡 缪洪明 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第1期38-50,共13页

目的探究高原低氧环境对结直肠癌体内生长及肿瘤微环境的影响。方法采用随机数字表法将雄性6周龄BALB/C与C57BL/6小鼠(体质量18~20 g)各自分为2组,分别置于低压氧仓(10%氧气,海拔约5600 m,高原低氧组)和SPF级动物实验中心(21%O_(2),海拔... 目的探究高原低氧环境对结直肠癌体内生长及肿瘤微环境的影响。方法采用随机数字表法将雄性6周龄BALB/C与C57BL/6小鼠(体质量18~20 g)各自分为2组,分别置于低压氧仓(10%氧气,海拔约5600 m,高原低氧组)和SPF级动物实验中心(21%O_(2),海拔约300 m,平原常氧组)饲养,C57BL/6小鼠每组8只,BALB/C小鼠每组7只。对C57BL/6小鼠皮下接种MC38、对BALB/C小鼠皮下接种CT26以构建结直肠癌皮下肿瘤模型。观察C57BL/6与BALB/C小鼠肿瘤大小并统计肿瘤质量。收集C57BL/6小鼠的肿瘤、外周血以及脾脏中的免疫细胞,流式细胞术对巨噬细胞、T淋巴细胞、IFN-γ^(+)T淋巴细胞以及髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)进行检测,分析这些免疫细胞在平原常氧和高原低氧环境下的变化情况。结果与平原常氧组C57BL/6与BALB/C小鼠相比,高原低氧组2种小鼠皮下肿瘤生长都被显著抑制(0.17 vs 0.09 g,1.38 vs 0.51 g,P<0.01)与平原常氧组C57BL/6小鼠相比,高原低氧组C57BL/6小鼠肿瘤微环境中的M2巨噬细胞比例显著降低(22.13%vs 15.90%,P<0.05);MDSC比例减少(2.06%vs 1.05%,P<0.01),其中单核性MDSC(M-MDSC:Ly6C^(+))亚群比例显著降低(60.97%vs 41.13%,P<0.01),而粒性MDSC(PMN-MDSC:Ly6G^(+))比例无显著差异(10.97%vs 9.70%,P>0.05);CD8^(+)T细胞比例显著升高(41.25%vs 51.18%,P<0.01),CD4^(+)T细胞比例降低(48.70%vs 41.93%,P<0.05);IFN-γ^(+)T、IFN-γ^(+)CD4^(+)T、IFN-γ^(+)CD8^(+)T细胞比例均显著增高(28.58%vs 59.65%,23.33%vs 53.65%,36.9%vs 66.48%,P<0.01);外周血中CD4^(+)T淋巴细胞和M1巨噬细胞比例都降低(84.98%vs 78.43%,5.86%vs 4.01%,P<0.01),MDSC及PMN-MDSC(Ly6G^(+))比例增高(4.47%vs 16.43%,36.56%vs 62.97%,P<0.01);脾脏中CD8^(+)T淋巴细胞比例和IFN-γ^(+)CD8^(+)T淋巴细胞比例都显著降低(33.05%vs 27.68%,5.13%vs 1.58%,P<0.01)。结论高原低氧可以增强肿瘤微环境内免疫应答并抑制结直肠癌皮下肿瘤的生长,但却抑制全身性免疫应答。 展开更多

关键词 高原 低氧 肿瘤微环境 结直肠癌 免疫应答

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塞来昔布通过提高12,13-diHOME水平改善急性高原缺氧小鼠右心功能

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作者 张炜 包鑫余 +9 位作者 赖晓玥 万小勤 谭燕 尹鸿钧 蔡筱诗 田丁元 汪紫阳 郑攀 邓芳 张志辉 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第19期2289-2301,共13页

目的评估塞来昔布(Celecoxib)对急性高原缺氧小鼠右心功能的影响并探究其作用机制。方法将7周龄C57BL/6J雄性小鼠置于模拟5800 m海拔低压氧仓饲养2 d以构建急性高原缺氧动物模型。①将18只小鼠按随机数字表法分为平原组(P+S)、高原组(H... 目的评估塞来昔布(Celecoxib)对急性高原缺氧小鼠右心功能的影响并探究其作用机制。方法将7周龄C57BL/6J雄性小鼠置于模拟5800 m海拔低压氧仓饲养2 d以构建急性高原缺氧动物模型。①将18只小鼠按随机数字表法分为平原组(P+S)、高原组(H+S)和高原给塞来昔布组(H+Cel),检测体质量和血常规,小动物超声心动图测量心率(heart rate,HR)、肺动脉加速时间与射血时间比(pulmonary artery acceleration time/ejection time,AT/ET)、三尖瓣环收缩期位移(tricuspid annular plane systolic excursion,TAPSE)、三尖瓣环收缩期峰值速度(tricuspid annular systolic velocity,S’)、左室射血分数(left ventricular ejection fraction,EF)和左室缩短分数(left ventricular fractional shortening,FS),靶向代谢组测序检测小鼠心脏花生四烯酸代谢,ELISA检测小鼠心脏、肝脏、棕色脂肪和血浆的12,13-二羟基-9-氧杂十八碳二烯酸(12,13-Dihydroxy-9Z-octadecenoic acid,12,13-diHOME)水平。②将18只小鼠随机分为平原组(P+S)、高原组(H+S)和高原给12,13-diHOME组(H+di),同前检测小鼠体质量、血常规和心脏超声。③将32只小鼠随机分为高原组(H+S)、高原给塞来昔布组(H+Cel)、高原给可溶性环氧化物水解酶抑制剂(soluble epoxide hydrolase inhibitor,sEHI)组(H+sEHI)和高原同时给sEHI和塞来昔布组(H+sEHI+Cel),同前检测体质量、血常规和心脏超声,ELISA检测小鼠心脏和血浆的12,13-diHOME和环氧二十碳三烯酸(epoxyeicosatrienoic acids,EETs)水平。结果①与P+S组比较,H+S组心脏中的12,13-diHOME水平显著下降(P<0.001),白细胞(white blood cell,WBC)和中性粒细胞(neutrophil,NEUT)数量显著上升(P<0.01),TAPSE、S’和AT/ET的静息水平和负荷水平均显著降低(P<0.01,P<0.001);与H+S组比较,H+Cel组心脏中的12,13-diHOME水平显著提高(P<0.05)、白细胞和淋巴细胞(Lymphocyte,LYM)数量显著下降(P<0.01,P<0.05),TAPSE和S’的负荷水平和储备均显著提高(P<0.01,P<0.001)。②与H+S组比较,H+di组TAPSE的静息水平和负荷水平均显著提高(P<0.001),其储备也有提高趋势(P=0.0532),白细胞和中性粒细胞水平没有改变。③与H+Cel组比较,H+sEHI和H+sEHI+Cel组心脏中的12,13-diHOME水平显著下降(P<0.01,P<0.05),心功能无显著改变;与H+S组比较,H+Cel组,H+sEHI组和H+sEHI+Cel组小鼠白细胞和淋巴细胞数量均显著下降(P<0.01,P<0.001),血清中的EETs水平显著提高(P<0.01,P<0.001)。结论塞来昔布通过CYP450-sEH代谢途径提升急性高原缺氧小鼠心脏中12,13-diHOME水平并显著改善了急性高原缺氧小鼠的右心功能。 展开更多

关键词 塞来昔布 高原 缺氧 右心功能 12 13-diHOME

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高原习服的评价标准与方法研究 被引量：52

3

作者 高钰琪 罗德成 +3 位作者 牛文忠 黄缄 黄庆愿 刘福玉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期1453-1454,共2页

目的　研究制定适合我军高原部队使用的评价高原习服的国家军用标准和方法。方法　遵照国家军用标准制定规范 ,系统回顾总结多年来的研究成果 ,广泛征求高原医学有关专家的意见 ,针对部队的实际情况 ,本着科学、简便、易行的原则 ,制定... 目的　研究制定适合我军高原部队使用的评价高原习服的国家军用标准和方法。方法　遵照国家军用标准制定规范 ,系统回顾总结多年来的研究成果 ,广泛征求高原医学有关专家的意见 ,针对部队的实际情况 ,本着科学、简便、易行的原则 ,制定出本标准。结果　将高原习服分为初步习服、基本习服和完全习服 ,其判断指标和依据为习服时间、基础生理指标 (呼吸次数、血压、脉率、红细胞计数、血红蛋白 )和体能评价指标 (VO2 max和 1 0 0 0m跑成绩 )。结论　制定了对我军高原部队有实际指导意义的评价高原习服的标准和方法 。 展开更多

关键词 高原习服 习服评价 军用标准

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急性缺氧对大鼠肠系膜微循环白细胞流变学行为的影响 被引量：12

4

作者 张钢 高钰琪 刘福玉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期320-322,共3页

目的　研究急性缺氧对大鼠肠系膜微循环白细胞流变学行为的影响。方法　运用活体显微镜结合计算机图像分析系统观察分析急性缺氧大鼠肠系膜微循环中白细胞的流变行为。结果　常氧状态下肠系膜微静脉中有少量白细胞粘附 ,部分白细胞沿管... 目的　研究急性缺氧对大鼠肠系膜微循环白细胞流变学行为的影响。方法　运用活体显微镜结合计算机图像分析系统观察分析急性缺氧大鼠肠系膜微循环中白细胞的流变行为。结果　常氧状态下肠系膜微静脉中有少量白细胞粘附 ,部分白细胞沿管壁滚动 ,滚动速度较快 ,白细胞与内皮细胞接触时间 (TLECT)短 ,急性缺氧后白细胞粘附数显著增加 ,白细胞沿壁滚动大量增多 ,滚动速度明显减慢 ,TLECT显著延长 (P <0 0 5 )。结论　急性缺氧严重影响微循环中白细胞的流变学行为 ,TLECT显著延长 ,反映了白细胞与内皮细胞相互作用程度加重 。 展开更多

关键词 急性缺氧 白细胞流变学 肠系膜微循环 细胞粘附 影响

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线粒体基因组4977bp异质性缺失与高原肺水肿易感性无关 被引量：7

5

作者 罗勇军 陈郁 高钰琪 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第23期2537-2538,共2页

目的研究线粒体基因组4 977 bp大片段异质性缺失与高原肺水肿(high altitude pulmonary edema,HAPE)易感性的关系。方法选择本室收集的HAPE标本36例及与其匹配的健康对照标本36例,采用定量PCR(SYBR)的方法研究线粒体基因组4 977 bp大片... 目的研究线粒体基因组4 977 bp大片段异质性缺失与高原肺水肿(high altitude pulmonary edema,HAPE)易感性的关系。方法选择本室收集的HAPE标本36例及与其匹配的健康对照标本36例,采用定量PCR(SYBR)的方法研究线粒体基因组4 977 bp大片段异质性缺失与高原肺水肿易感性的关系。结果在高原肺水肿的病例组及对照组中均没有发现4 977 bp异质性缺失。结论线粒体基因组4 977 bp异质性缺失与高原肺水肿易感性无关。 展开更多

关键词 线粒体DNA 4977BP缺失 高原肺水肿 异质性

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模拟高原缺氧不依赖肺动脉高压促进大鼠右心室ACE2的表达 被引量：3

6

作者 王宇亮 高钰琪 刘福玉 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期1298-1302,共5页

目的:研究模拟高原缺氧环境下大鼠心脏血管紧张素转换酶2(ACE2)的变化规律及调节因素,初步探讨ACE2与高原心脏病的关系。方法:在低氧环境(模拟海拔5000m高原、23h/d)下饲养成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,并分为缺氧1、15、30d组,设立... 目的:研究模拟高原缺氧环境下大鼠心脏血管紧张素转换酶2(ACE2)的变化规律及调节因素,初步探讨ACE2与高原心脏病的关系。方法:在低氧环境(模拟海拔5000m高原、23h/d)下饲养成年雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,并分为缺氧1、15、30d组,设立平原对照组;检测各组大鼠右心室ACE2活性,同时测定右心室功能、重量指数以及肺动脉压力变化。在此基础上,我们观察了卡托普利、尼群地平灌胃对慢性缺氧30d组大鼠右心室ACE2活性的影响。结果:缺氧30d组右心室ACE2 mRNA、蛋白表达显著上调,ACE2活性明显增加,同时伴明显心室肥厚及心功能显著升高。另外,卡托普利、尼群地平虽然显著降低了肺动脉压力以及心脏功能,但对ACE2活性无显著影响。结论:慢性高原缺氧环境促使心脏ACE2的表达与活性上调,提示ACE2可能与缺氧心脏结构功能变化有关;表达增加是缺氧环境中大鼠右心室ACE2活性升高的原因之一,而肺动脉高压可能并非是缺氧情况下ACE2活性变化的主要原因。 展开更多

关键词 高海拔 缺氧 血管紧张素转换酶2

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低氧抑制精子纤毛微管稳定性致精子发生障碍的分子机制研究

7

作者 王潇 张梦洁 +2 位作者 邓芳 殷骏 倪兵 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第10期1059-1068,共10页

目的旨在探讨低氧环境对精细胞分化及精子纤毛微管稳定性的影响及其分子机制,以明确低氧条件对雄性生殖功能的潜在危害。方法采用48只8周龄SPF级健康雄性SD大鼠(体质量300~399 g),由陆军军医大学实验动物研究所提供。大鼠实验设计如下:... 目的旨在探讨低氧环境对精细胞分化及精子纤毛微管稳定性的影响及其分子机制,以明确低氧条件对雄性生殖功能的潜在危害。方法采用48只8周龄SPF级健康雄性SD大鼠(体质量300~399 g),由陆军军医大学实验动物研究所提供。大鼠实验设计如下:①氧浓度梯度实验:设置21%常氧对照、13.5%、11.8%、10.4%氧浓度,分别模拟海拔3500、4500、5500 m低氧环境,持续暴露2个月,每组样本量为6只;②氧暴露时间梯度实验:在10.4%氧浓度下暴露0、0.5、1.0、2.0个月,每组样本量为6只。采用流式分选技术分离圆形精细胞,并采用以下方法测量相关指标:①转录组测序,分析低氧胁迫下精子分化障碍及纤毛结构异常的基因表达谱变化;②Western blot,检测关键蛋白CEP290、RING 1A、H2AK119ub的表达水平;②荧光漂白恢复技术(fluorescence recovery after photobleaching/FRAP),监测微管组装动力学,评估低氧对微管稳定性的即时影响。结果实验结果显示,在氧浓度梯度实验中,10.4%氧浓度暴露2个月后,大鼠睾丸生精小管中精原细胞、次级精母细胞及圆形精细胞的比例显著增加(P<0.05),分别为21%常氧组的(1.33±0.04)倍、(1.06±0.01)倍、(1.60±0.02)倍;而初级精母细胞和长形精细胞的比例显著降低(P<0.05),分别为21%常氧组的(0.89±0.01)倍、(0.88±0.0002)倍。这种变化呈现出明显的氧浓度依赖性。在时间梯度实验中,暴露于10.4%氧浓度0.5个月时,精原细胞、次级精母细胞及圆形精细胞的比例开始增加(P<0.05),分别为0个月对照组的(1.11±0.03)倍、(1.04±0.01)倍、(1.29±0.003)倍;而初级精母细胞和长形精细胞的比例在暴露1个月后开始显著降低(P<0.05),分别为0个月对照组的(0.94±0.03)倍、(0.95±0.008)倍。暴露于10.4%氧浓度2个月的大鼠,其附睾内精子尾部畸形率显著增加(P<0.0001),畸形率从21%常氧组的(12.1±1.7)%上升至(30.8±3.7)%。精母细胞系G2暴露于1%低氧环境中24 h后,FRAP显示微管组装速率降低,微管动态不稳定性增加,荧光恢复最大值从21%常氧组的(0.37±0.02)倍下降至(0.29±0.01)倍。转录组测序结果显示,低氧环境下纤毛基体关键分子CEP290的转录水平上调,上调倍数为21%常氧组的(1.81±0.11)倍;而PRC1复合体成员RING 1A、RING 1B、CBX2、PHC1及PCGF1的表达水平下调,分别为21%常氧组的(0.74±0.02)倍、(0.73±0.01)倍、(0.78±0.02)倍、(0.71±0.01)倍、(0.86±0.03)倍。Western blot验证结果显示,CEP290蛋白表达水平在低氧组上调,RING 1A蛋白表达水平下调。ChIPqPCR实验显示,RING 1A及其产物H2AK119ub在CEP290启动子区的结合显著减少(P<0.0001),结合强度分别为21%常氧组的(0.38±0.02)倍、(0.52±0.06)倍。而在siRING 1A组G2细胞中,H2AK119ub在CEP290启动子区的结合显著减少(P<0.0001),结合强度为对照组的(0.74±0.06)倍,同时CEP290 mRNA水平显著上升(P<0.0001),上调倍数为(3.35±0.37)倍。结论低氧环境通过RING 1AH2AK119ub-CEP290信号轴抑制精子纤毛微管稳定性,影响精细胞分化,导致精子发生障碍。 展开更多

关键词 低氧 精子生成 纤毛 微管稳定性 RING 1A

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高糖对培养的肾小球系膜细胞产生t-PA及与其结合的影响

8

作者 闫振成 张建国 +2 位作者 李开龙 黄庆愿 丁涵露 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期470-472,共3页

目的　观察高糖状态下系膜细胞与组织型纤溶酶原激活物 (Tissueplasminogen ,t PA)结合力及系膜细胞产生t PA活性改变与纤维连接蛋白 (Fibronectin ,FN)产生的影响。方法　采用体外人肾小球系膜细胞培养 ,放射性核素标记法测定系膜细胞... 目的　观察高糖状态下系膜细胞与组织型纤溶酶原激活物 (Tissueplasminogen ,t PA)结合力及系膜细胞产生t PA活性改变与纤维连接蛋白 (Fibronectin ,FN)产生的影响。方法　采用体外人肾小球系膜细胞培养 ,放射性核素标记法测定系膜细胞与t PA结合力 ,纤维蛋白酶谱法检测t PA活性 ,酶联免疫分析检测FN。结果　高糖可抑制系膜细胞与t PA结合力 ,同时t PA活性增加 ,FN产生明显增多 ,并随着培养时间的延长 ,葡萄糖愈高 ,作用愈明显。结论　高糖致系膜细胞与t PA结合力下降 ,t PA活性增加 ,同时可能其抑制物明显增多 ,导致细胞外基质积聚 ,可能是糖尿病肾病肾小球硬化发生的重要原因之一。 展开更多

关键词 葡萄糖 纤溶蛋白酶原激活物 组织型 T-PA 影响 DN 肾小球系膜细胞 糖尿病肾病

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FDFT1抑制巨噬细胞M1极化促进小鼠结直肠癌进展

9

作者 高源 黄玉兰 +2 位作者 赵昆 时荣臣 缪洪明 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第3期205-215,共11页

目的筛选出结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞中抑制巨噬细胞向M1方向极化的胆固醇合成途径代谢酶相关靶点,并验证干预效果及其作用机制。方法将小鼠CRC细胞株(MC38)分为对照(si-NC)组和多个胆固醇合成途径相关代谢酶表达干扰(siRNA... 目的筛选出结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞中抑制巨噬细胞向M1方向极化的胆固醇合成途径代谢酶相关靶点,并验证干预效果及其作用机制。方法将小鼠CRC细胞株(MC38)分为对照(si-NC)组和多个胆固醇合成途径相关代谢酶表达干扰(siRNA干扰相应靶点)组,RT-qPCR检测转染后MC38细胞相应干扰靶点的mRNA水平;6周龄C57BL/6雄性小鼠(体质量13~18 g)提取原代腹腔巨噬细胞,利用siRNA转染后MC38细胞的条件培养基处理巨噬细胞,RT-qPCR检测巨噬细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平以评估对其M1方向极化的影响。将MC38细胞分为对照组(OE-NC和sh-NC组)、法尼基焦磷酸转移酶1(farnesyl-diphosphate farnesyltransferase 1,FDFT1)过表达组(OE-FDFT1组)和FDFT1敲低组(sh-FDFT1组),RT-qPCR检测FDFT1的mRNA水平,Western blot检测FDFT1蛋白水平;将C57BL/6小鼠通过随机数字表法按照细胞分组方式分别构建皮下荷瘤模型(n=5)、腹腔种植转移瘤模型(n=5),对肿瘤质量进行检测;流式细胞术检测肿瘤细胞增殖和凋亡情况;Transwell实验检测肿瘤细胞迁移能力变化;将C57BL/6巨噬细胞清除鼠(氯膦酸盐脂质体悬液尾静脉注射)通过随机数字表法按照细胞分组方式构建腹腔种植转移瘤模型(n=5),对肿瘤质量进行检测。结果与si-NC组MC38细胞相比,各胆固醇合成途径相关代谢酶表达干扰组中MC38细胞对应靶点的mRNA水平显著下调(P均<0.05);与si-NC组巨噬细胞相比,FDFT1表达干扰组巨噬细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平显著上调(P均<0.05)。相比于OE-NC组MC38细胞,OE-FDFT1组MC38细胞的增殖、凋亡和迁移能力未发生显著变化;相比于sh-NC组MC38细胞,sh-FDFT1组MC38细胞的增殖、凋亡和迁移能力未发生显著变化。在野生型C57BL/6小鼠皮下荷瘤模型、腹腔种植转移瘤模型中,与OE-NC组相比,OE-FDFT1组肿瘤质量显著上调(P均<0.01);而与sh-NC组相比,sh-FDFT1组肿瘤质量显著下调(P均<0.01)。在巨噬细胞清除小鼠肿瘤模型中,与OE-NC组相比,OE-FDFT1组肿瘤质量未发生显著变化;与sh-NC组相比,sh-FDFT1组肿瘤质量未发生显著变化。结论CRC肿瘤细胞中胆固醇合成途径代谢酶FDFT1是靶向巨噬细胞的肿瘤免疫治疗潜在靶点,通过调控巨噬细胞促进肿瘤进展。 展开更多

关键词 结直肠癌 胆固醇代谢 法尼基焦磷酸转移酶1 巨噬细胞 M1极化

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麝香酮通过促进VEGF表达介导的微血管生成改善冠状动脉微血管疾病

10

作者 汪紫阳 田丁元 +4 位作者 郑攀 陈铭 郑紫梦 邓芳 张志辉 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第19期2374-2384,共11页

目的探讨麝香保心丸(shexiang baoxin pill,SXBXP)对冠状动脉微血管疾病(coronary microvascular disease,CMD)的影响以及麝香酮(Muscone)作为SXBXP中的有效成分对CMD的作用及机制。方法8周龄的ob/ob小鼠按照每天10 mg/kg SXBXP(SXBXP组... 目的探讨麝香保心丸(shexiang baoxin pill,SXBXP)对冠状动脉微血管疾病(coronary microvascular disease,CMD)的影响以及麝香酮(Muscone)作为SXBXP中的有效成分对CMD的作用及机制。方法8周龄的ob/ob小鼠按照每天10 mg/kg SXBXP(SXBXP组)或无菌PBS(Ctl组)进行灌胃,同背景野生型小鼠(WT组)作为阴性对照;以缺血缺氧干预小鼠冠脉微血管内皮细胞(mouse coronary microvascular endothelial cell,MCMEC)构建CMD细胞模型(HI组),并以20μg/mL浓度的SXBXP(HI+SX)和30μmol/L浓度的Muscone(HI+Muscone)分别进行药物干预。通过心脏超声动态评估冠状动脉血流储备(coronary flow reserve,CFR)水平和左心室功能,激光散斑成像评估心肌血流量(myocardial blood flow,MBF)水平。通过CD31免疫荧光染色评估小鼠心脏微血管密度。通过免疫荧光染色和Western blot检测心脏微血管内皮细胞的血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表达。5-乙炔基-2-脱氧嘧啶核苷染色、血管生成实验检测MCMEC的增殖能力和成管能力。结果ob/ob-Control组小鼠CFR、MBF水平和心脏微血管密度均比WT组小鼠显著降低(P<0.01),ob/ob-SXBXP组小鼠的上述指标均显著高于ob/ob对照组(P<0.05),表明SXBXP对CMD表型具有改善作用。ob/ob-Control组小鼠心脏微血管内皮细胞VEGF表达水平比WT组小鼠显著降低(P<0.05),而ob/ob-SXBXP组小鼠心脏微血管内皮细胞VEGF表达水平显著高于ob/ob-Control组(P<0.05),SXBXP可能通过VEGF介导的微血管生成改善CMD。体外实验进一步显示,缺血缺氧组(HI)组的VEGF表达水平及MCMEC的增殖和成管能力均显著低于常氧培养(Ctl组)(P<0.05),缺血缺氧SXBXP干预组(HI+SX)和缺血缺氧Muscone干预组(HI+Muscone)上述指标均显著高于HI组(P<0.05),Muscone作为SXBXP的活性物质通过VEGF介导的微血管生成改善CMD。结论SXBXP对CMD具有改善作用;Muscone作为SXBXP中的主要成分通过诱导VEGF的表达促进冠状动脉微血管生成,增加心肌灌注水平从而改善CMD。 展开更多

关键词 冠状动脉微血管疾病 麝香酮 麝香保心丸 微血管生成 血管内皮生长因子

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缺氧通过TAZ-H2A.Z轴调控H2A.Z染色质沉积促进肺泡上皮细胞增殖的研究

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作者 刘派予 张梦洁 +1 位作者 曾继涛 倪兵 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第6期498-505,共8页

目的本研究旨在探讨转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)与组蛋白H2A(histone H2A,H2A)的一种组蛋白变体H2A.Z,在缺氧诱导的肺损伤后修复中的作用及其潜在机制。方法利用缺氧模拟仓(5800 m)处理4 d... 目的本研究旨在探讨转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)与组蛋白H2A(histone H2A,H2A)的一种组蛋白变体H2A.Z,在缺氧诱导的肺损伤后修复中的作用及其潜在机制。方法利用缺氧模拟仓(5800 m)处理4 d后,构建小鼠缺氧肺损伤模型,肺组织切片HE染色评估肺损伤程度。利用缺氧工作站(1%O_(2)浓度)处理小鼠肺泡上皮细胞系(murine lung epithelial-12,MLE12)24 h,构建MLE12缺氧细胞模型,Western blot分析检测TAZ表达。CCK-8实验评价肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cells,AECs)增殖。免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)实验验证TAZ与H2A.Z二者之间的相互作用。靶向剪切及转座酶标记技术(cleavage under targets and tagmentation,CUT&Tag)测序分析TAZ影响H2A.Z在染色质沉积情况。结果缺氧显著诱导小鼠肺组织肺泡萎缩及炎症浸润(P<0.01)。缺氧培养显著上调MLE12细胞中TAZ蛋白表达(P<0.05)。CCK-8实验发现,敲低TAZ后AECs增殖能力显著下降(P<0.01)。Co-IP证实TAZ与H2A.Z存在物理相互作用。靶向剪切及转座酶标记技术(cleavage under targets and tagmentation,CUT&Tag)测序显示缺氧促进H2A.Z在染色质上的沉积(常氧结合位点31817,缺氧结合位点44078),而TAZ敲低部分逆转此现象(结合位点37840)。结论缺氧显著上调TAZ表达,后者与H2A.Z的结合并促进H2A.Z在染色质上的沉积,增强AECs增殖以应对缺氧损伤。 展开更多

关键词 缺氧 肺泡上皮细胞 TAZ H2A.Z 增殖

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Perilipin 2在小鼠肝脏CGI-58特异性敲除所致肝脏微泡型脂肪变性中的作用

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作者 张艺馨 李杰 +7 位作者 万小勤 蒋孝清 陈江慧 邓芳 李旻典 张倩 包鑫余 张志辉 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第15期1701-1712,共12页

目的探究Perilipin 2(Plin2)在肝脏CGI-58特异性敲除所致脂肪肝的作用,并比较Plin2和Plin3在脂滴生成和脂质蓄积的作用效能。方法将20只7周龄CGI-58^(Flox/Flox)小鼠(雄鼠10只,雌鼠10只)根据性别采用完全随机分组法分为对照组(NC组,n=5... 目的探究Perilipin 2(Plin2)在肝脏CGI-58特异性敲除所致脂肪肝的作用,并比较Plin2和Plin3在脂滴生成和脂质蓄积的作用效能。方法将20只7周龄CGI-58^(Flox/Flox)小鼠(雄鼠10只,雌鼠10只)根据性别采用完全随机分组法分为对照组(NC组,n=5,注射靶向肝脏实现过表达Cre蛋白及对照Micro-RNA的腺相关病毒)和实验组(Mi-KD组,n=5,注射靶向肝脏实现过表达Cre蛋白及靶向Plin2的Micro-RNA的腺相关病毒),记录小鼠体质量变化,检测小鼠代谢相关表型和肝脏病理学的差异,RT-qPCR检测小鼠肝脏脂质代谢和胆固醇代谢相关基因的改变;以AML-12小鼠肝细胞作为细胞模型,构建SiRNA实现AML-12细胞Plin2/Plin3敲低,Bodipy染色和酶比色法检测对比正常培养和OA诱导下Plin2/Plin3敲低后AML-12细胞脂滴生成和脂质蓄积。结果Mi-KD小鼠肝脏中的PLIN2蛋白水平降低了99%以上;Mi-KD缓解了CGI-58特异性敲除雌鼠的肝肿大(P=0.0195)和肝细胞损伤(P=0.0004),降低了组织学NAS评分(P=0.0002)和肝脏甘油三酯含量(P=0.0166),显著改善了肝脏CGI-58特异性敲除所致的肝脏微泡型脂肪变性;敲低Plin2使AML-12细胞内甘油三酯含量呈下降趋势,敲低Plin3显著降低AML-12细胞内甘油三酯含量(P=0.0014);在OA诱导下,Plin2/Plin3敲低均显著降低OA诱导的AML-12细胞内甘油三酯的蓄积(P<0.05)。结论肝脏Plin2在CGI-58敲除所致的微泡型脂肪变性的发展过程中至关重要,Plin2和Plin3均参与肝细胞脂滴生成与脂质蓄积,且Plin3的作用强于Plin2。 展开更多

关键词 肝脏微泡型脂肪变性 围脂滴包被蛋白2 比较鉴定基因-58 钱林-多尔夫曼综合征 脂滴

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缺氧大鼠心肌毛细血管密度与VEGF变化的研究 被引量：6

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作者 黄庆愿 高钰琪 +4 位作者 史景泉 刘福玉 陈建 曹利飞 孙秉庸 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期633-636,共4页

目的　观察大鼠在缺氧习服过程中心肌组织毛细血管密度和血管内皮细胞生长因子 (VEGF)及其受体的变化规律。方法　大鼠在 50 0 0m模拟高原缺氧 5、1 5和 30d后 ,用碱性磷酸酶 (ALP)组织化学方法显示心肌组织毛细血管并进行图像分析 ;用... 目的　观察大鼠在缺氧习服过程中心肌组织毛细血管密度和血管内皮细胞生长因子 (VEGF)及其受体的变化规律。方法　大鼠在 50 0 0m模拟高原缺氧 5、1 5和 30d后 ,用碱性磷酸酶 (ALP)组织化学方法显示心肌组织毛细血管并进行图像分析 ;用原位杂交和免疫组织化学技术观察心肌组织中VEGFmRNA、VEGF、FLK和Flt 1蛋白表达情况。结果　缺氧 1 5d时 ,右室心肌单位面积内毛细血管数与肌纤维数的比值 (C/M)显著增高。左室心肌随着缺氧时间的延长 ,毛细血管密度和C/M比值逐渐增高 ,缺氧30d时毛细血管密度和C/M比值较常压对照组显著增加。原位杂交和免疫组织化学结果显示 ,VEGFmRNA主要存在于心肌细胞中 ,而VEGF蛋白主要分布于心肌细胞的胞浆、胞膜及心肌细胞间隙中。机体缺氧时心肌组织中VEGF的表达普遍增强 ,5d时达高峰。FLK和Flt 1主要分布于微血管内皮细胞 ,各组中FLK和Flt 1表达无显著差异。结论　大鼠在缺氧习服过程中 ,左、右室心肌毛细血管出现增生 ,其机制可能与VEGF的表达上调有关。 展开更多

关键词 缺氧 新生血管化 血管内皮细胞生长因子 心脏 习服 VEGF大鼠

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内毒素脂多糖对培养肾小管上皮细胞凋亡和增殖的影响 被引量：7

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作者 闫振成 贾昆霞 +2 位作者 张建国 黄庆愿 朱妙珍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期1276-1278,共3页

目的　观察肾小管上皮细胞 (Tubularepitheliacell,TEC)在含内毒素脂多糖 (Lipopolysaccharide ,LPS)微环境中细胞凋亡和功能改变 ,探讨LPS直接损害肾小管的机制。方法　在含内毒素LPS的介质中体外培养肾小管上皮细胞 ,检测不同时相细... 目的　观察肾小管上皮细胞 (Tubularepitheliacell,TEC)在含内毒素脂多糖 (Lipopolysaccharide ,LPS)微环境中细胞凋亡和功能改变 ,探讨LPS直接损害肾小管的机制。方法　在含内毒素LPS的介质中体外培养肾小管上皮细胞 ,检测不同时相细胞凋亡、增殖能力及分泌肿瘤坏死因子 α(Tumornecrosisfactorα ,TNF α)能力的变化。结果　LPS有明显的抑制TEC增殖 ,促进TEC分泌TNF α ,且随着LPS浓度的增大 ,其作用更为明显 ;LPS还具有明显促细胞凋亡作用 ,呈剂量依赖性 ;相关分析表明 ,细胞凋亡与LPS促TEC分泌TNF α的量有明显正相关。结论　LPS可抑制TEC增殖 ,促进细胞凋亡 ,可能是通过TNF α而起作用 ,这可能是LPS导致脓毒症性肾衰或急性间质性肾炎小管间质损害的机制之一。 展开更多

关键词 肾小管上皮细胞 肾损害 内毒素脂多糖 细胞凋亡 细胞增殖

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高糖对培养肾小球内皮细胞细胞膜流动性影响的研究 被引量：6

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作者 闫振成 贾昆霞 +3 位作者 张建国 黄庆愿 朱妙珍 丁涵露 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期723-725,共3页

目的　观察高糖状态下肾小球内皮细胞过氧化损伤与内皮细胞膜流动性改变的关系。方法　采用体外人肾小球内皮细胞培养 ,八木组织测量之TBA法测定脂质过氧化产物丙二醛 ,Prendergast法测定细胞膜流动性 ,Fura 2双波长荧光法检测细胞内钙... 目的　观察高糖状态下肾小球内皮细胞过氧化损伤与内皮细胞膜流动性改变的关系。方法　采用体外人肾小球内皮细胞培养 ,八木组织测量之TBA法测定脂质过氧化产物丙二醛 ,Prendergast法测定细胞膜流动性 ,Fura 2双波长荧光法检测细胞内钙离子含量的变化。结果　高糖对肾小球内皮细胞可致过氧化损伤 ,使细胞膜流动性明显增高 ,细胞内钙含量增加 ,随着培养时间的延长 ,糖浓度愈高 ,作用愈明显。结论　高糖致内皮细胞过氧化损伤影响细胞膜流动性改变 ,可能是糖尿病肾病发生的始动因素。 展开更多

关键词 葡萄糖 内皮细胞 肾小球 脂质过氧化作用 细胞膜流动性 高糖

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早期糖尿病肾病相关微小RNA在小鼠肾脏的表达变化 被引量：7

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作者 张政 罗勇军 +1 位作者 彭惠民 何晓燕 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第13期1383-1386,共4页

目的建立db/db小鼠早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)微小RNA(microRNA,miRNA)的差异表达谱。方法采用12只9周龄高血糖且24h尿白蛋白显著增高的db/db小鼠作为早期糖尿病肾病组,12只9周龄db/m小鼠作为正常对照组,用于miRNA芯片和... 目的建立db/db小鼠早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)微小RNA(microRNA,miRNA)的差异表达谱。方法采用12只9周龄高血糖且24h尿白蛋白显著增高的db/db小鼠作为早期糖尿病肾病组,12只9周龄db/m小鼠作为正常对照组,用于miRNA芯片和实时荧光定量RT-PCR检测。Trizol法抽提肾脏总RNA,YM-100微离心滤器富集小RNA,芯片技术检测DN组和对照组miRNAs的差异表达谱。应用实时荧光定量RT-PCR验证部分差异miRNAs,运用生物信息学技术预测部分相关miRNAs的靶基因。结果芯片结果显示,66个miRNA在DN组和对照组存在差异表达(P<0.01),其中35个miRNAs在DN组呈高表达,31个miRNAs在DN组呈低表达,差异倍数从1.08～10.20。实时荧光定量RT-PCR进一步验证部分miRNA的表达,结果显示3个miRNAs在DN组表达上调,分别为:miR-196a、miR-98和miR-29c;4个表达在DN组下调,分别为miR-21、miR-451、miR-709和miR-187,差异显著(P<0.01)。结论部分miRNAs在DN和正常对照肾脏组织中存在差异表达,可能参与了DN发生的分子机制。 展开更多

关键词 糖尿病肾病 MICRORNA microRNA芯片 差异表达

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高效液相色谱法检测大鼠脑线粒体的腺苷酸 被引量：3

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作者 潘峰 孙玮 +3 位作者 路菊 张正治 柳君泽 李兵 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第24期2481-2482,共2页

目的建立大鼠脑线粒体腺苷酸简便、快速、有效的高效液相色谱法。方法采用HypersilBDSC18(5μm,250mm×4.6mm)色谱柱对标准品和样品进行色谱分析。结果腺苷酸(AMP、ADP、ATP)在0.25～40.0μg/ml的范围内,线性关系良好,加标平均回收... 目的建立大鼠脑线粒体腺苷酸简便、快速、有效的高效液相色谱法。方法采用HypersilBDSC18(5μm,250mm×4.6mm)色谱柱对标准品和样品进行色谱分析。结果腺苷酸(AMP、ADP、ATP)在0.25～40.0μg/ml的范围内,线性关系良好,加标平均回收率大于(97.59±2.47)%,相对标准差(RSD)小于3.84%。结论本法操作简便,线性关系好,回收率高、准确可靠,适于线粒体内腺苷酸的检测分析。 展开更多

关键词 线粒体 腺苷酸 高效液相色谱法 检测

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缺氧对肺腺癌细胞生长特性及血管形成的影响 被引量：2

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作者 胡振红 黄瑊 +2 位作者 傅祖红 司斌 刘志遐 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期515-516,523,共3页

目的　探讨缺氧对肺腺癌肿瘤生长及血管形成的影响。方法　人肺腺癌细胞株A549暴露于常氧(空气,5%CO2)、缺氧(1%O2,5%CO2,94%N2)、无氧(95%N2,5%CO2)环境48h后,将细胞接种于裸鼠皮下,观察其生长情况。通过免疫组化染色计数微血管密度,... 目的　探讨缺氧对肺腺癌肿瘤生长及血管形成的影响。方法　人肺腺癌细胞株A549暴露于常氧(空气,5%CO2)、缺氧(1%O2,5%CO2,94%N2)、无氧(95%N2,5%CO2)环境48h后,将细胞接种于裸鼠皮下,观察其生长情况。通过免疫组化染色计数微血管密度,测定移植瘤组织中血管内皮细胞生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达水平。结果　移植10天后,缺氧组肿瘤体积显著大于常氧组。移植25天后缺氧组肿瘤体积、重量、微血管密度以及瘤组织中VEGF、bFGF水平均显著高于常氧组,而无氧组显著低于常氧组。结论　适度缺氧可以刺激肺癌细胞VEGF、bFGF等生长因子的表达,促进移植瘤血管形成,提高肿瘤的生长能力;而严重缺氧损伤癌细胞,影响生长因子合成表达,阻碍血管形成,抑制肿瘤的生长。 展开更多

关键词 细胞低氧 癌 非小细胞肺 血管形成 血管内皮生长因子类 成纤维细胞生长因子 碱性

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哺乳动物核呼吸因子研究进展 被引量：3

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作者 宋熔 柳君泽 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期183-185,共3页

核呼吸因子(NRFs)包括核呼吸因子1(NRF 1)和核呼吸因子2(NRF 2),是DNA转录调节因子,调节细胞核基因组编码的呼吸链亚基和与线粒体复制、转录过程中有关的组分,如线粒体转录因子A、线粒体RNA核酸加工内切酶以及血红素合成限速酶等的表达... 核呼吸因子(NRFs)包括核呼吸因子1(NRF 1)和核呼吸因子2(NRF 2),是DNA转录调节因子,调节细胞核基因组编码的呼吸链亚基和与线粒体复制、转录过程中有关的组分,如线粒体转录因子A、线粒体RNA核酸加工内切酶以及血红素合成限速酶等的表达。NRFs在协调线粒体与细胞核两基因组的表达中起重要作用,并与细胞的生长、增殖及染色体的维护等密切相关。 展开更多

关键词 研究进展 哺乳动物 转录调节因子 线粒体RNA 核基因组 转录因子 DNA 呼吸链 节细胞 限速酶 血红素 内切酶 细胞核 染色体 表达 复制 核酸

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7种不同组织来源细胞缺氧损伤效应评价 被引量：3

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作者 冯岚 陈德伟 +8 位作者 高文祥 陈建 徐刚 鄂国基 吴庆 孙滨达 何姝 张二龙 高钰琪 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期570-574,共5页

目的观察缺氧条件下7种不同类型细胞损伤程度,筛选对缺氧损伤敏感的细胞模型。方法选择CCD 841 CoN、GES-1、HUVEC、HEB、HEK-293、HBE和L02等7种不同组织来源的细胞,利用低氧工作站构建不同缺氧浓度(5%O_2和1%O_2)细胞缺氧模型,使用CC... 目的观察缺氧条件下7种不同类型细胞损伤程度,筛选对缺氧损伤敏感的细胞模型。方法选择CCD 841 CoN、GES-1、HUVEC、HEB、HEK-293、HBE和L02等7种不同组织来源的细胞,利用低氧工作站构建不同缺氧浓度(5%O_2和1%O_2)细胞缺氧模型,使用CCK-8和LDH方法检测细胞增殖及损伤情况。并用红景天(0.625μmol/L、2.5 mmol/L)和丁苯酞(1、2μmol/L)于缺氧开始时处理细胞,观察是否可改善缺氧细胞损伤。结果与21%O_2相比,1%O_2处理24 h时,HEB细胞增殖能力显著降低(P<0.05);与21%O_2相比,5%O_2与1%O_2处理24 h HEB、HUVEC、HBE、HEK-293、CCD 841 CoN、GES-1和L02细胞其上清中LDH酶活力均显著升高(P<0.05,P<0.01);在HEB细胞中,红景天(2.5 mmol/L)和丁苯酞(1μmol/L)处理可显著逆转低氧诱导的细胞增殖和细胞活力降低(P<0.05);红景天(2.5 mmol/L)和丁苯酞(1μmol/L)处理可显著逆转低氧诱导的LDH酶活力升高(P<0.05,P<0.01)。结论 HEB细胞对缺氧最为敏感,是较好的抗缺氧损伤药物效应研究细胞的模型。 展开更多

关键词 缺氧 组织细胞 细胞增殖 LDH

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