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人子宫内膜细胞原代培养方法的改良 被引量:8
1
作者 陈诚 常青 +2 位作者 梁志清 艾国平 张丽龙 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期507-509,共3页
目的寻求一种简便高效的人子宫内膜上皮细胞和间质细胞分离、纯化与鉴定方法,建立稳定的子宫内膜细胞体外培养体系。方法简化Ryan等的子宫内膜细胞原代培养方法的取材,分离和培养条件,分离出高纯度的子宫内膜上皮细胞和间质细胞进行体... 目的寻求一种简便高效的人子宫内膜上皮细胞和间质细胞分离、纯化与鉴定方法,建立稳定的子宫内膜细胞体外培养体系。方法简化Ryan等的子宫内膜细胞原代培养方法的取材,分离和培养条件,分离出高纯度的子宫内膜上皮细胞和间质细胞进行体外培养和传代。结果培养成功的子宫内膜上皮细胞与间质细胞均可稳定传代,体外生长10~50d,纯度均达90%以上。结论该方法简便高效,可建立稳定的人子宫内膜细胞体外培养体系。 展开更多
关键词 子宫内膜细胞 原代培养 改良
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人α-防御素5在毕赤酵母中分泌表达的研究 被引量:5
2
作者 王艾平 粟永萍 +3 位作者 申明强 王崧 程天民 王军平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期310-313,共4页
目的探索人α-防御素5成熟肽(mHD5)在酵母中高效分泌表达的可行性。方法PCR扩增获得酵母菌偏好的mHD5密码子序列,应用基因重组方法构建表达质粒,电击转化酵母菌株GS115,应用G418浓度梯度、表型和PCR技术筛选高拷贝转化株。经摇瓶发酵和... 目的探索人α-防御素5成熟肽(mHD5)在酵母中高效分泌表达的可行性。方法PCR扩增获得酵母菌偏好的mHD5密码子序列,应用基因重组方法构建表达质粒,电击转化酵母菌株GS115,应用G418浓度梯度、表型和PCR技术筛选高拷贝转化株。经摇瓶发酵和甲醇诱导,Tricine-SDS-PAGE分析重组mHD5(rmHD5)表达量,并采用Westernblot鉴定。选用琼脂扩散法检测rmHD5的抑菌活性。结果构建了pPIC9K-mHD5酵母表达质粒。筛选得到3株His+/Mut+表型,且耐受8mg/mlG418的多拷贝转化酵母菌株,成功获得表达量约120mg/L的发酵上清。rmHD5对大肠杆菌(EC25922)和金黄色葡萄球菌(SA25923)2种标准菌株均具有明显的抑菌活性。结论防御素基因可以在毕赤酵母中实现分泌型离表达,此策略可能是抗菌肽工业化开发的有效途径之一。 展开更多
关键词 防御素 酵母表达 生物活性
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人α防御素-5多肽体外抗单纯疱疹Ⅱ型病毒作用的研究 被引量:4
3
作者 陈芳 王艾平 +6 位作者 申明强 陈默 许杨 王崧 粟永萍 程天民 王军平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第18期1925-1928,共4页
目的探讨人α防御素-5(humanα-defensin-5,HD-5)多肽体外抗单纯疱疹Ⅱ型病毒(herpes simplex virustype2,HSV-2)的作用及其机制。方法以绿猴肾细胞(Vero)为宿主细胞,采用CCK-8法首先分析10-200μg/ml浓度范围内HD-5多肽的细胞毒... 目的探讨人α防御素-5(humanα-defensin-5,HD-5)多肽体外抗单纯疱疹Ⅱ型病毒(herpes simplex virustype2,HSV-2)的作用及其机制。方法以绿猴肾细胞(Vero)为宿主细胞,采用CCK-8法首先分析10-200μg/ml浓度范围内HD-5多肽的细胞毒性,再以HSV-2感染Vero细胞,分别于感染前后和感染的同时加入100μg/ml的HD-5多肽,72h后测定细胞保护率,结合细胞病变效应观察,分析HD-5抗HSV-2的作用效果和起效环节,并通过改变培养基中血清的浓度,观察血清对HD-5抗病毒作用的影响。结果在100μg/ml浓度以内,HD-5多肽几乎无细胞毒性,提前或同时加入HD-5多肽可以显著抑制HSV-2病毒引起的细胞病变反应、提高细胞保护率(P〈0.01),而在HSV-2感染2h后加入HD-5多肽对Vero细胞的保护作用不明显(P〉0.05);血清浓度会显著影响HD-5多肽的抗HSV-2活性,血清浓度越高,HD-5多肽对细胞的保护率越低。结论HD-5多肽在体外具有显著的抗HSV-2感染活性,其作用机制主要是通过干扰病毒对细胞的粘附、侵入而发挥作用。 展开更多
关键词 防御素类 疱疹病毒2型 VERO细胞 体外研究
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人乳头瘤病毒假病毒体外感染模型的建立及人α防御素5抗病毒作用 被引量:2
4
作者 耿放 王艾平 +5 位作者 陈芳 申明强 陈默 粟永萍 程天民 王军平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期473-476,共4页
目的建立用人乳头瘤病毒16亚型假病毒(HPV-16 Psv)感染宫颈癌细胞模型,并研究3种不同构型人α防御素5(HD-5)抗HPV的作用。方法将表达HPV-16假病毒衣壳蛋白的重组质粒P16L1L2和含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒Pfwb共转染293FT细胞,分... 目的建立用人乳头瘤病毒16亚型假病毒(HPV-16 Psv)感染宫颈癌细胞模型,并研究3种不同构型人α防御素5(HD-5)抗HPV的作用。方法将表达HPV-16假病毒衣壳蛋白的重组质粒P16L1L2和含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的质粒Pfwb共转染293FT细胞,分离、纯化病毒颗粒后感染宫颈癌细胞株C-33a,同时分别给予20μg/ml的HD-5/N(天然构型)、HD-5/Acm(半胱氨酸被Acm修饰)或HD-5/Abu(半胱氨酸被Abu替换)处理,培养48 h后荧光显微镜观察和流式细胞分析病毒感染率。结果 Pfwb与P16L1L2成功转染293FT细胞并获得滴度达2.5×108TU/ml的HPV-16假病毒液,镜检和流式细胞术检测显示宫颈癌细胞C-33a能够被假病毒感染并表达GFP。HD-5/N、HD-5/Acm和HD-5/Abu对HPV-16感染C-33a细胞的抑制率分别为(96.48±5.67)%、(69.02±7.88)%和(2.71±1.53)%。与HD-5/N相比,HD-5/Acm和HD-5/Abu的抗病毒作用显著降低(P<0.01)。结论建立了基于流式细胞分析的HPV-16假病毒感染模型并将其用于抗病毒药物活性检测。发现HD-5的空间结构和分子中半胱氨酸对其抗HPV感染的活性有重要作用。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 假病毒 防御素 绿色荧光蛋白 抗病毒作用
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EGF与bFGF单独及联合应用对原代培养的兔角膜缘干细胞克隆形成率的影响 被引量:2
5
作者 崔馨 贺翔鸽 +1 位作者 赵玲 宗兆文 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第20期1823-1825,共3页
目的 了解单独及联合应用表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor ,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (b fibrob lastgrowthfactor ,bFGF)对原代培养的兔角膜缘干细胞体外增殖的促进作用。方法 进行兔角膜缘干细胞原代培养 ,用克隆形成率... 目的 了解单独及联合应用表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor ,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子 (b fibrob lastgrowthfactor ,bFGF)对原代培养的兔角膜缘干细胞体外增殖的促进作用。方法 进行兔角膜缘干细胞原代培养 ,用克隆形成率和蛋白质免疫印迹方法检测单独及联合应用不同质量浓度EGF与bFGF对干细胞增殖力的影响。结果 角膜缘干细胞在本培养条件下能够正常生长。单独应用时 ,质量浓度为 10ng/ml的EGF和 2 0ng/ml的bFGF对干细胞的促增殖作用最强 (P <0 0 1) ,10ng/ml的EGF与 2 0ng/ml的bFGF联合应用可达到最佳的促干细胞增殖作用。蛋白质免疫印迹检测也得到了相符的结果。结论 体外单独及联合应用EGF与bFGF对原代培养的兔角膜缘干细胞的增殖能力有明显的促进作用 ,为提供大量的角膜缘干细胞以治疗眼表疾病提供了实验基础。 展开更多
关键词 角膜缘干细胞 EGF BFGF 克隆形成率 蛋白质免疫印迹
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带J链的α-防御素-1的基因重组和表达载体的构建 被引量:2
6
作者 刘贤华 白晓东 +2 位作者 粟永萍 艾国平 张韶峰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期697-699,共3页
目的 将α防御素 1(HNP 1)改建为一种杀菌分子J链α防御素 1(J HNP 1) ,这种杀菌分子具有与细胞膜上具备的多聚IgA受体(PIgR)相结合而进入粘膜上皮细胞的能力,发挥其杀菌作用。即克隆人Jchain HNP 1嵌合基因DNA ,并构建真核表达载体。... 目的 将α防御素 1(HNP 1)改建为一种杀菌分子J链α防御素 1(J HNP 1) ,这种杀菌分子具有与细胞膜上具备的多聚IgA受体(PIgR)相结合而进入粘膜上皮细胞的能力,发挥其杀菌作用。即克隆人Jchain HNP 1嵌合基因DNA ,并构建真核表达载体。方法 将从pCH质粒中获取的J链片段,采用人工连接方法与HNP 1片断相连接,并将其构建于新型哺乳动物细胞质粒表达载体pcDNA3 .1( ) Myc HisC中,进行序列测定。结果 经过重组得到的J链防御素 1的目的片断为786bp ,序列分析与GenBank中报道的编码J链及HNP 1成熟肽的序列完全一致。结论 Jchain HNP 1嵌合基因DNA的克隆和哺乳动物细胞表达载体的构建,为进一步进行抗菌肽的研究及制备奠定了基础。 展开更多
关键词 基因重组 抗菌肽 J链 α-防御素-1
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重组人Β防御素2在真皮多能干细胞中的表达及抗菌活性的测定 被引量:2
7
作者 李楠 肖桃元 +6 位作者 粟永萍 徐辉 王军平 宗兆文 冉新泽 董世武 刘志君 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期284-286,共3页
目的检测重组人Β防御素2(HUMANΒ-DEFENSIN2,HBD2)腺病毒表达载体在大鼠真皮多能干细胞(DERMALMULTIPOTENT STEM CELLS,DMSCS)中的表达,并观察重组HBD2的体外抗菌活性。方法将含有HBD2重组腺病毒转染DMSCS,RT-PCR、荧光免疫化学、WESTE... 目的检测重组人Β防御素2(HUMANΒ-DEFENSIN2,HBD2)腺病毒表达载体在大鼠真皮多能干细胞(DERMALMULTIPOTENT STEM CELLS,DMSCS)中的表达,并观察重组HBD2的体外抗菌活性。方法将含有HBD2重组腺病毒转染DMSCS,RT-PCR、荧光免疫化学、WESTERN BLOTTING检测HBD2的表达情况,ELISA测定培养上清中HBD2的浓度,K-B纸片扩散法检测上清对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌等标准菌株的杀灭效果。结果RT-PCR、荧光免疫化学和WESTERNBLOTTING的结果显示转染后HBD2可在DMSCS中有效地表达,上清中HBD2的浓度为743.6NG/ML,K-B纸片法显示HBD2对上述标准菌株有明显的杀灭效应。结论HBD2重组腺病毒表达载体在DMSCS可高效表达,并对大肠埃希菌等标准菌株有杀灭效应。 展开更多
关键词 人Β防御素2 重组 真皮多能干细胞
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颈交感神经阻滞对放烧复合伤小鼠的治疗作用 被引量:20
8
作者 陆建华 粟永萍 +1 位作者 程天民 杜智勇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1253-1255,共3页
目的 探讨颈交感神经阻滞对放烧复合伤小鼠的治疗作用,明确颈交感神经阻滞可否成为严重创伤后续损害简单有效的治疗手段。方法 TBSA 15 %Ⅲ度烧伤合并5Gy放射损伤小鼠分为SB治疗组(颈部注射利多卡因)及对照组(未给予SB治疗) ,观察两... 目的 探讨颈交感神经阻滞对放烧复合伤小鼠的治疗作用,明确颈交感神经阻滞可否成为严重创伤后续损害简单有效的治疗手段。方法 TBSA 15 %Ⅲ度烧伤合并5Gy放射损伤小鼠分为SB治疗组(颈部注射利多卡因)及对照组(未给予SB治疗) ,观察两组动物2、5、7、10、15、2 0、3 0d死亡率及7、14、2 1d外周血RBC、WBC、BLT计数的变化,另外还观察SB治疗对放烧复合伤后3、6、14d血清TNF α、IL 1β、IL 6的影响。结果 SB治疗使放烧复合伤后5、7、10、15、2 0、3 0d的死亡率显著降低;使伤后7、14、2 1d血白细胞、红细胞及血小板数显著增加;使伤后3、6、14d的血清炎性细胞因子TNF α,IL 1β、IL 6水平显著下降。结论 SB显著降低放烧复合伤动物的死亡率,可以成为严重创伤简单有效的治疗手段;SB降低放烧复合伤动物死亡率可能是通过促进造血功能的恢复、抑制过度的炎性反应而实现的。 展开更多
关键词 颈交感神经节 阻滞 放烧复合伤 死亡率 造血 细胞因子
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慢性情绪应激对大鼠卵巢功能影响的初步观察 被引量:19
9
作者 程湘 徐辉 +4 位作者 艾国平 粟永萍 谢荣凯 陈正琼 吴家燕 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第14期1368-1370,共3页
目的观察慢性情绪应激对大鼠卵巢功能的影响。方法以不确定性空瓶饮水刺激作为情绪应激源,考察20d的慢性情绪应激对雌性大鼠行为、脾脏指数、动情周期和血中FSH、LH、E2和P含量的影响。结果慢性情绪应激明显诱发雌性大鼠的攻击行为,增... 目的观察慢性情绪应激对大鼠卵巢功能的影响。方法以不确定性空瓶饮水刺激作为情绪应激源,考察20d的慢性情绪应激对雌性大鼠行为、脾脏指数、动情周期和血中FSH、LH、E2和P含量的影响。结果慢性情绪应激明显诱发雌性大鼠的攻击行为,增加脾脏指数,差异非常显著(P<0.01)。慢性情绪应激延长雌性大鼠的动情周期,差异非常显著(P<0.01),但对卵巢指数没有显著影响(P>0.05)。慢性情绪应激减少雌性大鼠血中E2含量,差异非常显著(P<0.01),而对血中P含量没有显著影响(P>0.05);同时慢性情绪应激后大鼠血中FSH和LH含量下降,差异非常显著(P<0.01)。结论慢性情绪应激影响大鼠卵巢分泌功能,该模型可用于情绪应激对生殖内分泌影响的研究。 展开更多
关键词 情绪应激模型 卵巢 性激素 动情周期
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γ射线与微波复合作用对小鼠造血系统功能及形态学的影响 被引量:10
10
作者 贾永峰 王水明 +5 位作者 陈建魁 高亚兵 彭瑞云 粟永萍 程天民 王德文 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期790-793,共4页
目的探讨γ射线和微波复合照射对造血系统的损伤特点及规律,为进一步研究其损伤机制提供理论和实验基础。方法216只雄性昆明小鼠随机分为对照组、γ射线照射组(5·5Gy,简称射线组)、微波照射组(50mW/cm2,简称微波组)及γ射线与微波... 目的探讨γ射线和微波复合照射对造血系统的损伤特点及规律,为进一步研究其损伤机制提供理论和实验基础。方法216只雄性昆明小鼠随机分为对照组、γ射线照射组(5·5Gy,简称射线组)、微波照射组(50mW/cm2,简称微波组)及γ射线与微波复合照射组(5·5Gy+50mW/cm2,简称复合组)。60Coγ射线(剂量率为91·1cGy/min)全身一次性照射后立即进行微波全身辐照(S波段,平均功率密度为50mW/cm2)5min。分别于照射后6h及1、3、7、14、28、90、180天活杀取材,观察胸骨骨髓组织学变化,并采股静脉血行常规检测,同时对复合照射后6h及第1、3、7天的胸骨骨髓进行超微结构观察。结果组织学观察发现无论γ射线还是复合照射均可导致骨髓组织经历典型的凋亡坏死、空虚、再生修复及恢复4个阶段的病理改变,但复合组的病变重于射线组,恢复也更为迟缓。外周血象检查发现小鼠经γ射线及复合照射后白细胞、红细胞、血小板数和血红蛋白含量均呈进行性下降,于照射后期逐渐恢复,但复合组比射线组下降更明显,恢复也更缓慢。超微结构观察发现复合照射后骨髓造血细胞出现明显的变性、凋亡及坏死等改变,以照射后6h最明显。结论一定剂量的γ射线和一定强度的微波复合照射可严重损伤小鼠造血系统,表现为骨髓组织发生明显的形态学改变和功能障碍,其损伤效应主要以γ射线为主,微波在一定程度上加重了γ射线的损伤。 展开更多
关键词 Γ射线 微波 骨髓 造血细胞
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Delta1-IRES-EGFP双顺反子逆转录病毒表达载体的构建及鉴定 被引量:19
11
作者 何飞 谭颖徽 杨峥嵘 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1197-1200,共4页
目的 构建并鉴定人Delta1和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子逆转录病毒表达载体。方法 利用基因重组技术将人Delta1基因构建到含IRES EGFP逆转录病毒载体中;电穿孔法将重组质粒pDelta1 IRES EGFP分别转入单、双嗜性包装细胞GP +... 目的 构建并鉴定人Delta1和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子逆转录病毒表达载体。方法 利用基因重组技术将人Delta1基因构建到含IRES EGFP逆转录病毒载体中;电穿孔法将重组质粒pDelta1 IRES EGFP分别转入单、双嗜性包装细胞GP +E86和PA3 17,嘌呤霉素(puromycin)筛选获得阳性表达克隆;“乒乓球”法提高病毒滴度;重组病毒感染NIH3T3细胞,流式细胞仪(FACS)及RT PCR法分别检测细胞荧光和Delta1mRNA表达变化;C2C12共培养实验检测蛋白的功能。结果 酶切、PCR鉴定及DNA测序证实逆转录病毒表达载体pDelta1 IRES EGFP构建正确;经体外包装,获得最高滴度9 7×10 5CFU ml的重组病毒液;重组病毒液感染NIH3T3细胞,FACS检测部分细胞荧光强度显著提高;RT PCR证实细胞内有外源基因Delta1表达;C2C12共培养实验证实外源蛋白Delta1可抑制C2C12细胞的分化。结论 逆转录病毒基因转移系统安全,效率较高,可获得外源基因长期、稳定的表达。 展开更多
关键词 Delta GFP IRES 逆转录病毒 基因转移 基因表达
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颈交感神经阻滞对放烧复合伤小鼠HPA轴的调节及相关机制研究 被引量:11
12
作者 陆建华 陶军 +3 位作者 叶建宁 粟永萍 李洪涛 程天民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第21期2111-2114,共4页
目的探讨颈交感神经阻滞(SB)对放烧复合伤小鼠HPA轴的调节及可能机制。方法TBSA15%Ⅲ度烧伤合并5Gy放射损伤小鼠分为:对照组、放烧复合伤组及伤后SB治疗组,比较各组血清糖皮质激素(GC)及ACTH浓度的差异;同时利用膜片钳技术检测各组间海... 目的探讨颈交感神经阻滞(SB)对放烧复合伤小鼠HPA轴的调节及可能机制。方法TBSA15%Ⅲ度烧伤合并5Gy放射损伤小鼠分为:对照组、放烧复合伤组及伤后SB治疗组,比较各组血清糖皮质激素(GC)及ACTH浓度的差异;同时利用膜片钳技术检测各组间海马NMDA受体通道特性的变化。另外,将腹腔注射足量NMDA受体阻断剂MK-801的小鼠分为:放烧复合伤组、伤后SB治疗组,比较两组血清GC及ACTH浓度的差异。结果放烧复合伤后血GC及ACTH水平显著升高,SB治疗组血GC和ACTH水平显著底于放烧复合伤组。SB组海马NMDA受体通道开放概率、开放时间常数τ1、τ2虽然高于对照组,但显著低于放烧复合伤组。足量MK-801预处理的放烧复合伤组与SB组之间的血清GC和ACTH水平无显著差异。结论SB通过降低NMDA受体的活性,抑制了严重创伤(放烧复合伤)小鼠HPA轴的亢进。 展开更多
关键词 颈交感神经节 阻滞 放烧复合伤 HPA轴 NMDA受体
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轻度肠型放-烧复合伤救治的实验研究 被引量:7
13
作者 王涛 艾国平 +2 位作者 杜智勇 谭虎 粟永萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第21期2099-2102,共4页
目的探讨颈交感阻滞、壳聚糖包裹的pVITRO3-HD5-GLP2纳米粒联合L203对轻度肠型放-烧复合伤小鼠的治疗作用,探索救治肠型放-烧复合伤的综合措施。方法TBSA15%Ⅲ度烧伤合并10Gy放射损伤小鼠分为综合救治组及复合伤对照组,观察两组动物的... 目的探讨颈交感阻滞、壳聚糖包裹的pVITRO3-HD5-GLP2纳米粒联合L203对轻度肠型放-烧复合伤小鼠的治疗作用,探索救治肠型放-烧复合伤的综合措施。方法TBSA15%Ⅲ度烧伤合并10Gy放射损伤小鼠分为综合救治组及复合伤对照组,观察两组动物的平均存活时间以及小肠湿重、小肠隐窝细胞早期凋亡、恢复期增殖和肠道细菌移位等相关指标。结果综合救治可以使放-烧复合伤后动物平均存活时间延长;减轻小肠湿重的降低程度,减少肠隐窝细胞凋亡,促进恢复期肠上皮的增殖以及减少肠道细菌移位的发生。结论综合救治措施可以改善肠型放-烧复合伤肠道的损伤,延迟小鼠的死亡时间。 展开更多
关键词 放-烧复合伤 小肠 颈交感阻滞 GLP-2 HD-5 壳聚糖
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不同伤情血清可有效激活IEC-6细胞PI3K/Akt通路 被引量:6
14
作者 王锋超 王涛 +6 位作者 艾国平 王军平 冉新泽 杜智勇 李军 徐辉 粟永萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期518-520,共3页
目的检测不同伤情血清对肠上皮细胞PI3K/Akt通路的激活。方法将对数生长期的IEC-6细胞无血清培养基培养24 h后,加入单放、单烧和复合伤24 h大鼠血清,并设正常大鼠血清组和无血清组作对照,刺激12 h后检测细胞AKT磷酸化水平。利用SELD I(s... 目的检测不同伤情血清对肠上皮细胞PI3K/Akt通路的激活。方法将对数生长期的IEC-6细胞无血清培养基培养24 h后,加入单放、单烧和复合伤24 h大鼠血清,并设正常大鼠血清组和无血清组作对照,刺激12 h后检测细胞AKT磷酸化水平。利用SELD I(surfaced enhanced laser desorption/ion ization)蛋白质芯片技术对单放、单烧、复合伤24 h大鼠血清差异蛋白进行筛选和分析。结果单放、单烧和复合伤24 h大鼠血清刺激后的IEC-6细胞Akt磷酸化水平较正常大鼠血清刺激的高,其中烧伤组最高。单放组血清与单烧血清比较有11个差异峰,复合伤组与单烧组相比有6个差异峰。结论单放、单烧和复合伤血清均可有效激活IEC-6细胞的PI3K/Akt通路,烧伤组最强,可能和烧伤组血清特殊变化有关。 展开更多
关键词 P13K/AKT IEC-6 血清 烧伤 放射 复合伤 SELDI
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γ射线照射前后IEC-6细胞蛋白质组的差异分析 被引量:6
15
作者 章波 粟永萍 +4 位作者 艾国平 刘晓宏 魏永江 王锋超 程天民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第24期2157-2160,共4页
目的 分析γ射线照射后肠上皮细胞系 (IEC 6)细胞蛋白质组的改变。方法 分别提取正常IEC 6细胞和经过 2 5Gy照射后细胞的蛋白样品 ,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术进行分离 ,考马斯亮蓝染色后经PDQuest软件分析双向电泳图谱 ,对部分... 目的 分析γ射线照射后肠上皮细胞系 (IEC 6)细胞蛋白质组的改变。方法 分别提取正常IEC 6细胞和经过 2 5Gy照射后细胞的蛋白样品 ,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术进行分离 ,考马斯亮蓝染色后经PDQuest软件分析双向电泳图谱 ,对部分差异的蛋白点进行胶内酶切、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI TOF MS)测定其肽质量指纹图谱 ,在网上检索数据库鉴定差异蛋白 ,并采用RT PCR间接证实其变化。结果 获得了较好的双向电泳图谱。图像分析显示 :在正常IEC 6细胞中检测到 ( 60 8± 3 9)个蛋白质点 ,细胞照射后的样品中检测到 ( 5 95± 3 1)个蛋白质点 ,其中匹配的蛋白点为 3 96个。对表达差异的 16个蛋白质点进行肽质量指纹图谱分析 ,经数据库检索后初步鉴定为一些与代谢、自由基清除、细胞骨架相关的蛋白。RT PCR证实了ERP2 9基因在照射后增强。结论 电离辐射可以诱导IEC 6细胞蛋白质组发生改变。 展开更多
关键词 电离辐射 肠上皮细胞 双向电泳 肽质量指纹图谱分析
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新型异黄酮及甾体类化合物体外抗癌细胞增殖活性的初步筛选 被引量:9
16
作者 张丽龙 粟永萍 +4 位作者 刘晓宏 程天民 郑虎 翁玲玲 艾国平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第13期1393-1396,共4页
目的研究改构后的异黄酮及甾体类化合物是否具较好的体外抗细胞增殖的活性。方法采用MTT法,以5,7,4’-三羟基异黄酮(Gen iste in,GEN)作为对照,研究28个改构后的异黄酮和甾体化合物对Hela细胞、MCF-7细胞的抗增殖作用,并在此基础上,分... 目的研究改构后的异黄酮及甾体类化合物是否具较好的体外抗细胞增殖的活性。方法采用MTT法,以5,7,4’-三羟基异黄酮(Gen iste in,GEN)作为对照,研究28个改构后的异黄酮和甾体化合物对Hela细胞、MCF-7细胞的抗增殖作用,并在此基础上,分析其构效关系。结果通过对28种化合物采用MTT的方法对其体外活性进行初筛,初步认为异黄酮类化合物F11、ZF3、ZF4、ZF7以及甾体类化合物ZE2均对Hela细胞、MCF-7细胞增殖有显著的抑制作用,效果均优于Gen iste in。结论异黄酮和甾体类化合物经过结构改造和修饰,其大部分对Hela细胞、MCF-7细胞的增殖有显著的抑制作用,有进一步研究的潜在价值。 展开更多
关键词 异黄酮 甾体 MTT
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G-CSF动员循环间充质干细胞及其对小鼠颅脑损伤修复的可行性分析 被引量:10
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作者 邓均 艾国平 +7 位作者 周桃莉 王军平 徐辉 邹仲敏 董世武 郝磊 冉新泽 粟永萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1131-1134,共4页
目的建立小鼠严重颅脑创伤模型探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)动员循环间充质干细胞(mesenchym alstem cells,MSCs)的可行性,并观察G-CSF动员的修复效应。方法以G-CSF作为动员剂,培养骨髓和外周... 目的建立小鼠严重颅脑创伤模型探讨粒细胞集落刺激因子(granulocyte colony-stimulating factor,G-CSF)动员循环间充质干细胞(mesenchym alstem cells,MSCs)的可行性,并观察G-CSF动员的修复效应。方法以G-CSF作为动员剂,培养骨髓和外周血来源的MSCs,计数动员前后的CFU-F。制作小鼠严重颅脑创伤模型,致伤后采用G-CSF对MSCs进行动员,在2、24、48、96、120、144、192、264、336h进行神经行为学评分、运动功能评分,并观察小鼠死亡率和病理组织切片。结果从小鼠外周血培养出MSCs,G-CSF动员后骨髓和外周血MSCs的CFU-F数量显著高于正常对照组(P<0·01)。致伤后小鼠神经行为学和运动功能评分显著低于正常对照组(P<0·01),创伤治疗组在144~192h期间评分显著高于创伤组(P<0·05)。致伤后小鼠死亡率增高,病理切片可见创伤处有出血和空泡。结论成功培养及用G-CSF动员了外周血MSCs,在成功建立小鼠严重颅脑创伤模型的基础上,显示G-CSF动员可以降低严重颅脑创伤小鼠死亡,参与了创伤修复。 展开更多
关键词 间充质干细胞 创伤 动员 G-CSF
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长期接触贫铀对大鼠遗传毒性的初步研究 被引量:7
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作者 冷言冰 李蓉 +4 位作者 艾国平 徐辉 粟永萍 程天民 冉新泽 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期869-871,共3页
目的研究贫铀植入/摄入3个月后对大鼠的毒性作用。方法观察大鼠精子畸形率,骨髓微核率的改变,睾丸的超微结构和病理形态学改变以及采用显性致死突变试验观察贫铀对大鼠的生殖毒性。结果植入/摄入贫铀后大鼠精子畸形率和微核率均有增加,... 目的研究贫铀植入/摄入3个月后对大鼠的毒性作用。方法观察大鼠精子畸形率,骨髓微核率的改变,睾丸的超微结构和病理形态学改变以及采用显性致死突变试验观察贫铀对大鼠的生殖毒性。结果植入/摄入贫铀后大鼠精子畸形率和微核率均有增加,睾丸超微结构均有不同程度的改变,而病理形态学观察则未见显著影响。植入组大鼠受孕率明显低于对照组。结论贫铀长时间暴露可对大鼠产生生殖毒性损害以及超微结构的损伤。 展开更多
关键词 贫铀 精子 微核 毒性
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对急性贫铀中毒的促排措施研究 被引量:7
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作者 李蓉 任泂 +5 位作者 冷言冰 杨峥嵘 艾国平 徐辉 粟永萍 程天民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期461-464,共4页
目的比较常见的几种贫铀促排剂,寻找高效低毒的药物或组合方案。方法分别在给予贫铀溶液前1h、立即、延迟4h给予碳酸氢钠、Tiron、dimethylthiourea(DMTU)和diethylenetriaminepenta-methylene phosphonic acid(DTPMP)及相应的组合方案... 目的比较常见的几种贫铀促排剂,寻找高效低毒的药物或组合方案。方法分别在给予贫铀溶液前1h、立即、延迟4h给予碳酸氢钠、Tiron、dimethylthiourea(DMTU)和diethylenetriaminepenta-methylene phosphonic acid(DTPMP)及相应的组合方案,并在3d后进行肾功能检测及病理学观察。结果提前给药,血清尿素氮和肌酐浓度下降程度显著(P<0·05),下降最明显的是NaHCO3+DMTU组和单用DTPMP组;立即给药,尿素氮和肌酐显著降低的是NaHCO3+DM-TU组、单用NaHCO3组和单用Tiron组(P<0·05);延后给药,肾功能均未见明显改善(P>0·05)。提前给药和立即给药,NaHCO3+DMTU组肾脏病变最轻;延后给药,病变比提前给药和立即给药的严重,其中以单用Tiron组肾脏病变最轻。结论急性贫铀中毒时,提前1h和立即给药时,NaHCO+DMTU合用效果较好;延后4h给药,单用Tiron的效果相对较好。 展开更多
关键词 贫铀 促排 肾功能 碳酸氢钠
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重组真核表达载体pEGFP-N1/PDGF-A的构建及真皮干细胞的转染 被引量:6
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作者 闫国和 粟永萍 +5 位作者 王军平 汪代杰 艾国平 王锋超 冉新泽 程天民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第20期2005-2008,共4页
目的克隆血小板衍生生长因子A链(plateletderivedgrowthfactorAchain,PDGFA)基因,以增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)载体pEGFPN1为骨架,携带PDGFA基因进入真皮间充质干细胞(dermisdrivedmesenchymalstemcells... 目的克隆血小板衍生生长因子A链(plateletderivedgrowthfactorAchain,PDGFA)基因,以增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)载体pEGFPN1为骨架,携带PDGFA基因进入真皮间充质干细胞(dermisdrivedmesenchymalstemcells,DMSCs),为采用转入PDGFA基因的DMSCs修复创面奠定基础。方法采用RTPCR二步分离法,以人肝癌细胞系(SMC7721)的总RNA为模板,扩增PDGFA基因的全长cDNA编码序列,克隆入载体pMD18T,随后又将PDGFA基因亚克隆入pEGFPN1载体中,构建PDGFA基因的真核表达载体pEGFPN1/PDGFA,并采用Fugene6介导转染技术将PDGFA基因导入DMSCs。结果克隆到PDGFA基因的全长cDNA序列,经测序验证,其序列与GenBank所报告的该基因的序列完全一致。结论成功地将PDGFA基因克隆到pEGFPN1载体中,并实现了PDGFA基因在DMSCs的表达。 展开更多
关键词 克隆 真核表达载体 血小板衍生生长因子A链基因 绿色荧光蛋白 真皮间充质干细胞
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