兔源内毒素结合蛋白的提取纯化及体外生物学活性研究 被引量：1

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作者 葛晓冬 刘友生 +2 位作者 王晓东 潘峰 周萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期514-518,共5页

目的　从烧伤合并内毒素血症损伤兔的血清中分离纯化出内毒素结合蛋白 (Lipopolysaccharide BindingProteinLBP) ,以研究LBP在烧伤复合内毒素血症中的作用。方法　兔血清中蛋白质通过二步离子交换层析 (Bio Rex 70Resin、Mono Q)及凝胶... 目的　从烧伤合并内毒素血症损伤兔的血清中分离纯化出内毒素结合蛋白 (Lipopolysaccharide BindingProteinLBP) ,以研究LBP在烧伤复合内毒素血症中的作用。方法　兔血清中蛋白质通过二步离子交换层析 (Bio Rex 70Resin、Mono Q)及凝胶过滤来分离纯化 ,并经流式细胞分析实验、绵羊红细胞凝聚实验、氨基末端氨基酸残基测序等方法鉴定 ,再将LBP作用于体外培养的人单核细胞 (U93 7) ,观测其分泌TNFα等细胞因子的状况。结果　获得一种分子量为 60× 10 3蛋白质 ,其N端 10个氨基酸序列为TNPGLITRIT ,与NCBI蛋白质库中有关兔的氨基酸序列进行比较 ,发现其与LBP的序列相同 ,它能促进脂多糖 (LipopolysaccharideLPS)与外周血单核细胞 (PBMC)结合 ,并能促进U93 7在极低浓度的LPS用下分泌TNFα。结论　从血清中分离纯化带有生物活性、全长LBP是可行的 ,LBP能促进极低浓度的LPS与单核细胞结合 ,介导炎性因子的分泌 ,从而促进炎症反应的发生。 展开更多

关键词 内毒素结合蛋白 脂多糖 二步离子交换层析 凝胶过滤 肿瘤坏死因子Α

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室温保存白细胞凋亡的时相变化及分子机制初探

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作者 袁玲 刘建忠 +3 位作者 周萍 熊仁平 陈利群 陈方祥 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第13期1185-1187,共3页

目的　研究室温保存下白细胞凋亡的时相变化及Bcl 2和Bax在其中的作用。方法　采用Annexin V FITC -PI双标染色 ,结合流式细胞术 (FCM)检测细胞凋亡 ;以Westernblot检测Bcl 2和Bax蛋白表达变化。结果　 1～ 2 4h凋亡细胞百分数逐渐增加 ... 目的　研究室温保存下白细胞凋亡的时相变化及Bcl 2和Bax在其中的作用。方法　采用Annexin V FITC -PI双标染色 ,结合流式细胞术 (FCM)检测细胞凋亡 ;以Westernblot检测Bcl 2和Bax蛋白表达变化。结果　 1～ 2 4h凋亡细胞百分数逐渐增加 ,在 2 4h时达到峰值 ;72h时凋亡细胞反而降低。随着保存时间的延长 ,坏死细胞呈由低到高的变化 ,而活细胞则越来越少。Westernblot结果显示 ,1～ 2 4hBax表达逐渐增加 ,条带越来越清晰 ;72h时表达反而降低。 1～ 72h内 ,Bcl 2表达逐渐降低。结论　室温保存下 ,白细胞逐渐凋亡坏死 ,活细胞数量逐渐减少 ;Bcl 2和Bax在调节白细胞凋亡的机制中起着重要的作用。临床应用以输用保存 3～ 展开更多

关键词 白细胞 细胞凋亡 WESTERN BLOT

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坐骨神经火器伤后神经元凋亡与脂质过氧化反应 被引量：4

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作者 周萍 王建民 +2 位作者 王贵波 陈志强 张良潮 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期309-311,共3页

目的　了解火器性周围神经损伤后神经元凋亡与脂质过氧化反应的关系。方法　采用火器性坐骨神经损伤模型 ,通过流式细胞仪检测神经损伤后脊髓细胞凋亡 ,通过丙二醛 (MDA)含量与超氧化物歧化酶 (SOD)活性检测脊髓组织的脂质过氧化反应。... 目的　了解火器性周围神经损伤后神经元凋亡与脂质过氧化反应的关系。方法　采用火器性坐骨神经损伤模型 ,通过流式细胞仪检测神经损伤后脊髓细胞凋亡 ,通过丙二醛 (MDA)含量与超氧化物歧化酶 (SOD)活性检测脊髓组织的脂质过氧化反应。结果　伤后 1、3d、1、2周的凋亡细胞百分比分别为 1 4%、2 7%、7 8%、4 4% ;火器性神经损伤后 1dSOD即有明显增高 ,至 2周左右达最高峰。MDA则在伤后 2周内呈持续性增高的趋势。结论　火器性坐骨神经伤后的脂质过氧化反应是神经元凋亡的重要原因之一。 展开更多

关键词 坐骨神经损伤 火器伤 神经元凋亡 脂质过氧化反应 超氧化物歧化酶

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单细胞水平β地中海贫血诊断膜芯片检测技术的探讨 被引量：2

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作者 易萍 李力 +2 位作者 邓兵 朱前勇 周元国 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期778-781,共4页

目的　对在单细胞水平 β地中海贫血诊断膜芯片检测技术进行探讨。 方法　采用 15个碱基的随机引物对单个细胞的基因组进行引物延伸预扩增 (Primerextensionpreamplification ,PEP) ,取其产物 5 μl分别对 β地中海贫血的目的基因片段... 目的　对在单细胞水平 β地中海贫血诊断膜芯片检测技术进行探讨。 方法　采用 15个碱基的随机引物对单个细胞的基因组进行引物延伸预扩增 (Primerextensionpreamplification ,PEP) ,取其产物 5 μl分别对 β地中海贫血的目的基因片段进行巢式或半巢式扩增 ,然后采用反向斑点杂交 (Reversedotblot,RDB)技术检测 β地贫突变型。 结果　将这些技术应用于 4例已经确定突变基因型的 β地贫患者及 1例正常女性 ,检测结果与预料的相符。 结论　结合我们的实验结果 ,提示在单个细胞或微量DNA模板水平运用基因芯片技术进行遗传病检测是可行的 。 展开更多

关键词 Β地中海贫血 基因芯片 预扩增

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一种适用于流式细胞术的简便红细胞裂解法 被引量：1

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作者 汪志文 王华 周学武 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第12期1211-1213,共3页

目的　探讨一种简便、快捷的红细胞列解法 ,以适宜应用流式细胞仪对白细胞亚群进行检测和分选。方法　采用常规试剂配置不同浓度应用液 ,按步骤完成红细胞裂解过程 ,上机检测。同时采用密度梯度离心法提取单核细胞和粒细胞 ,比较两者上... 目的　探讨一种简便、快捷的红细胞列解法 ,以适宜应用流式细胞仪对白细胞亚群进行检测和分选。方法　采用常规试剂配置不同浓度应用液 ,按步骤完成红细胞裂解过程 ,上机检测。同时采用密度梯度离心法提取单核细胞和粒细胞 ,比较两者上机检测的结果。结果　在流式细胞仪检测的细胞点图上 ,可见采用红细胞裂解法处理的标本白细胞成簇分布 ,淋巴细胞、单核细胞、粒细胞群清晰可辩 ,通过测定各群细胞上标记的特异性荧光 ,可进一步分离出淋巴、单核和粒细胞的亚群 ,细胞纯化程度高。采用密度梯度离心法纯化的粒细胞或单核细胞 ,在细胞点图上可见细胞散在分布 ,不成群 ,纯化程度低。其原因可能是该方法中长时间离心、改变血液渗透压、反复离心洗涤等步骤影响了白细胞的形态结构有关。结论　本实验介绍的红细胞裂解法满足了白细胞流式细胞仪检测分选要求 ,价格低廉 ,是一种简便快捷。 展开更多

关键词 红细胞裂解法 流式细胞术 白细胞亚群

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简便快速的血中DNA提取纯化法 被引量：1

6

作者 王华 熊仁平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1020-1021,共2页

目的　为了探讨血中DNA提取纯化的简便快速的方法。方法　用TritonX 10 0同时反复破碎红细胞和白细胞 ,然后用NaClO4、SDS解聚核蛋白 ,用PCI抽提 ,SephaderG 2 5柱层析。结果　A2 60 /A2 80 可达 1.78～ 1.80 ,平均产量 2 0 .3μg/ml,... 目的　为了探讨血中DNA提取纯化的简便快速的方法。方法　用TritonX 10 0同时反复破碎红细胞和白细胞 ,然后用NaClO4、SDS解聚核蛋白 ,用PCI抽提 ,SephaderG 2 5柱层析。结果　A2 60 /A2 80 可达 1.78～ 1.80 ,平均产量 2 0 .3μg/ml,全过程 2～ 3h。 结论　这种方法用于临床经济、快速、得率高 ,诊断结论可靠。 展开更多

关键词 血 DNA 提取纯化法 红细胞 白细胞

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大鼠c-ski基因siRNA真核表达载体的构建及其在成纤维细胞中的干扰效果观察

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作者 李平 刘苹 +4 位作者 陈星云 赵艳 彭艳 陈磊 周元国 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期551-554,共4页

目的构建大鼠c-ski基因的特异性siRNA沉默质粒,并评价其在大鼠皮肤原代成纤维中的干扰效果。方法采用pSUPER质粒构建大鼠c-ski基因siRNA的重组真核表达质粒,转染大鼠皮肤成纤维细胞,采用荧光纤维镜观察转染效率,BrdUELISA法检测转染后... 目的构建大鼠c-ski基因的特异性siRNA沉默质粒,并评价其在大鼠皮肤原代成纤维中的干扰效果。方法采用pSUPER质粒构建大鼠c-ski基因siRNA的重组真核表达质粒,转染大鼠皮肤成纤维细胞,采用荧光纤维镜观察转染效率,BrdUELISA法检测转染后细胞增殖情况并作为其干扰效果的初步筛选,定量PCR、免疫组化法检测c-ski基因和蛋白的表达变化。结果构建3个c-SkisiRNA沉默质粒,按照质粒(μg)/脂质体(μl)1∶2.5的比例转染时效率最高,约为53.5%。转染c-SkisiRNA沉默质粒后,细胞增殖降低,且抑制效果与转染剂量成正比。定量PCR、免疫组化法结果显示转染后c-ski基因表达下调51%(P<0.01),蛋白表达明显降低。结论c-Ski沉默质粒构建成功,瞬时转染大鼠皮肤原代成纤维细胞后可以显著抑制c-ski基因和蛋白的表达。 展开更多

关键词 基因 c-ski RNA干扰 转染 细胞增殖

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Gqα在哮喘豚鼠肺组织中的表达变化及胸腺素对其影响

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作者 刘苹 熊仁平 +1 位作者 曹国强 周元国 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期506-506,共1页

关键词 豚鼠 哮喘 Gqα 肺组织 胸腺素

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用流式细胞术监测原位心脏移植病人术后的T细胞及亚群的变化

9

作者 汪志文 马铮 +1 位作者 李磊 周元国 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期277-277,286,共2页

关键词 原位心脏移植 流式细胞术 T细胞 T细胞亚群

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树脂摊片法在坐骨神经免疫电镜观察中的应用

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作者 周萍 张杰敏 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1378-1379,共2页

目的　通过树脂摊片包埋在坐骨神经免疫电镜观察中的应用 ,以提高检测的阳性率及定位的准确性。方法　 40只 3月龄Wistar大鼠分别用CJ Pen19灭活菌株经初次免疫和加强免疫后 ,第 5周取坐骨神经 1cm ,Zamboni液固定 6～ 18h ,石蜡包埋 ,... 目的　通过树脂摊片包埋在坐骨神经免疫电镜观察中的应用 ,以提高检测的阳性率及定位的准确性。方法　 40只 3月龄Wistar大鼠分别用CJ Pen19灭活菌株经初次免疫和加强免疫后 ,第 5周取坐骨神经 1cm ,Zamboni液固定 6～ 18h ,石蜡包埋 ,制成 2 0 μm厚的切片 ,免疫组化检测坐骨神经局部IgG ,光镜下选取有意义的区域定标。采用树脂摊片包埋制片。 结果　轴索变性组IgG染色呈点状 ,中等电子密度沉积于神经轴膜和轴浆内 ,髓鞘脱失组IgG主要位于髓鞘表面 ,神经轴膜和轴浆均未见IgG沉积。结论　树脂摊片包埋在免疫电镜标本制作过程中 ,能明显提高检测的阳性率及定位准确性 。 展开更多

关键词 树脂摊片法 坐骨神经 免疫电镜观察 应用

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Tau蛋白过度磷酸化的致病机制及其在创伤性脑损伤中的作用 被引量：6

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作者 赵子艾 周元国 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期213-216,共4页

作为微管相关蛋白的一员,Tau蛋白结合、稳定微管及其过度磷酸化时参与神经退行性疾病的机制已被广泛研究。近年来许多研究发现Tau蛋白的异常过度磷酸化状态及其神经毒性作用是部分创伤性脑损伤患者远期认知功能障碍的重要致病机制之一... 作为微管相关蛋白的一员,Tau蛋白结合、稳定微管及其过度磷酸化时参与神经退行性疾病的机制已被广泛研究。近年来许多研究发现Tau蛋白的异常过度磷酸化状态及其神经毒性作用是部分创伤性脑损伤患者远期认知功能障碍的重要致病机制之一。本文首先总结了对Tau蛋白生理功能及其致病机制的研究进展,并结合最新研究发现分析了Tau蛋白如何参与创伤性脑损伤后远期认知功能障碍。 展开更多

关键词 TAU蛋白 创伤性脑损伤 神经退行性疾病

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