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题名人HIF-1α基因重组腺病毒的构建与鉴定
被引量：4
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作者
蒋春华
高钰琪
黄庆愿
黄缄
贺伟峰
段小军
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机构
第三军医大学高原军事医学系病理生理学与高原生理学教研室
第三军医大学西南医院全军烧伤研究所
第三军医大学西南医院骨关节中心
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出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第20期2040-2043,共4页
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文摘
目的构建人缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的重组腺病毒载体,并观察其对HepG2细胞的转染情况。方法采用基因工程技术,经过亚克隆将人HIF-1α基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用pAdEasy系统进行细菌内同源重组后,经脂质体转染HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增。采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,进行病毒滴度的测定和对HepG2细胞感染效率的监测。结果酶切鉴定及PCR结果证明重组腺病毒载体成功,人HIF-1α重组腺病毒滴度达1.15×1010pfu/ml,阴性对照腺病毒的滴度为8×1010pfu/ml,并对HepG2细胞具有很强的感染力。结论应用细菌内同源重组法成功构建了含人HIF-1α基因的重组腺病毒载体。
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关键词
腺病毒
HIF-1Α基因
同源重组
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Keywords
adenovirus
HIF-1α gene
homogenous recombination
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分类号
Q782
[生物学—分子生物学]
Q789
[生物学—分子生物学]
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