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多粘菌素B拮抗内毒素的体外作用研究 被引量:9
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作者 吕根法 卫国 +3 位作者 郭毅斌 肖光夏 郑江 罗高兴 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第14期1252-1254,共3页
目的 探讨多粘菌素B(PMB)对内毒素 (LPS)的亲合、中和能力 ,以及体外抑制LPS作用的时效和量效关系。方法 应用鲎试剂动态浊度法测定PMB对LPS的中和能力 ;应用生物传感器技术测定PMB与LipidA的亲和力 ;并测定PMB对LPS刺激的人PBMC释放T... 目的 探讨多粘菌素B(PMB)对内毒素 (LPS)的亲合、中和能力 ,以及体外抑制LPS作用的时效和量效关系。方法 应用鲎试剂动态浊度法测定PMB对LPS的中和能力 ;应用生物传感器技术测定PMB与LipidA的亲和力 ;并测定PMB对LPS刺激的人PBMC释放TNF α、IL 6的抑制作用。结果 PMB具有较强的LPS中和能力 ,其IC50 约为 4 3 5± 0 91μmol L ;与LipidA具有很高的亲和力 ,其解离平衡数 (kineticdissociationconstant,KD) =1 11× 10 - 8mol L ;10 μg ml的PMB能够明显抑制 10 0ng mlLPS刺激的人PBMC释放TNF α、IL 6的释放 (P <0 0 5 ) ,并具有明显的量效关系 ;在LPS刺激PBMC前应用PMB ,细胞因子释放的抑制率达 95 %以上 ,但在LPS刺激后 10min ,PMB即失去了对细胞因子的抑制作用 (P >0 0 5 )。结论 PMB具有较强的内毒素结合及中和能力 。 展开更多
关键词 多粘菌素B 内毒素 肿瘤坏死因子-Α 白细胞介素-6
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人趋化因子ELC的克隆与表达 被引量:1
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作者 罗福康 沈大斌 郑红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1204-1207,共4页
目的 克隆人趋化因子ELC基因,表达并初步纯化ELC融合蛋白。方法 从扁桃体中提取总RNA ,再进行RT PCR ,扩增ELC成熟蛋白基因,并在5′和3′分别添加NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点,通过这两个酶切位点重组于pET3 2a(+ )载体上,转化E .coliDH5α... 目的 克隆人趋化因子ELC基因,表达并初步纯化ELC融合蛋白。方法 从扁桃体中提取总RNA ,再进行RT PCR ,扩增ELC成熟蛋白基因,并在5′和3′分别添加NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点,通过这两个酶切位点重组于pET3 2a(+ )载体上,转化E .coliDH5α,筛选阳性克隆,酶切鉴定,DNA测序检测插入序列的正确性,缺失突变获得ELC天然蛋白表达载体pET3 2a(+ ) ELC ,SDS PAGE分析其表达,Westernblot验证融合蛋白。大量表达并初步纯化ELC融合蛋白。结果 成功克隆了ELC基因,表达并初步纯化得到ELC融合蛋白。结论 构建的ELC硫氧还蛋白融合表达载体以可溶性蛋白的方式表达ELC硫氧还蛋白。 展开更多
关键词 ELC 融合表达 载体 缺失突变 WESTERN BLOTTING 蛋白纯化
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2-氨基-1,2,3,4,6-O-五乙酰葡萄糖的合成
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作者 赵先英 郑江 +1 位作者 季伟刚 刘毅敏 《化学研究与应用》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期573-574,共2页
2Amino1,2,3,4,6Opentaacetyl glucopyranose was synthesized from glucosamine hydrochloride,acetic hydride and triethylamine with thick sulfur acid as a catalyst.Under optimum reaction conditions,glucosamine hy... 2Amino1,2,3,4,6Opentaacetyl glucopyranose was synthesized from glucosamine hydrochloride,acetic hydride and triethylamine with thick sulfur acid as a catalyst.Under optimum reaction conditions,glucosamine hydrochloride,acetic hydrideand triethylamine reacted in at 60°C for 3h to give the goal product in 852% yield.Its structure was confirmed by H1NMR and elemental analysis. 展开更多
关键词 2-氨基-1 2 3 4 6-O-五乙酰葡萄糖 合成 医药中间体 抗革兰氏阴性菌感染药物 盐酸按基葡萄糖 乙酸酐
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人趋化因子SLC原核表达载体的构建与表达
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作者 罗福康 郑红 何凤田 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第14期1231-1234,共4页
目的 构建趋化因子SLC(secondarylymphoid tissuechemokine)的硫氧还蛋白融合表达载体并表达融合蛋白。方法 从人扁桃体中提取总RNA ,再进行RT PCR ,扩增SLC成熟蛋白基因 ,并在 5’和 3′分别添加NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点 ,通过这两个... 目的 构建趋化因子SLC(secondarylymphoid tissuechemokine)的硫氧还蛋白融合表达载体并表达融合蛋白。方法 从人扁桃体中提取总RNA ,再进行RT PCR ,扩增SLC成熟蛋白基因 ,并在 5’和 3′分别添加NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点 ,通过这两个酶切位点重组于pET3 2a( +)载体上 ,转化E .coliDH5α ,筛选阳性克隆 ,酶切鉴定 ,DNA测序检测插入序列的正确性 ,经突变删除因NcoⅠ位点引入而在肠激酶位点和目的基因间多余的 3个氨基酸 ,DNA再测序检测突变结果 ,SDS PAGE分析其表达 ,并通过金属离子亲和层析、除盐、弱阳离子交换层析 ,得到纯化的融合蛋白 ,Westernblot验证纯化的融合蛋白。结果 成功构建了SLC天然蛋白的硫氧还蛋白融合表达载体 ,表达并纯化出融合蛋白 ,Westernblot证明该融合蛋白能与羊抗人SLC一抗结合。结论 构建的天然SLC硫氧还蛋白融合表达载体以可溶性蛋白的方式稳定表达SLC硫氧还蛋白 。 展开更多
关键词 SLC 突变 融合表达 载体 蛋白纯化
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金黄色葡萄球菌细胞壁可溶性肽聚糖的分离纯化和鉴定
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作者 张向武 郑江 +3 位作者 伏建峰 郭毅斌 陈益国 鲁永玲 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2007年第3期321-323,共3页
目的从金黄色葡萄球菌中提取纯化可溶性肽聚糖并鉴定其活性。方法采用小剂量青霉素作用金黄色葡萄球菌(ATCC25923),诱导合成可溶性肽聚糖(PGN)粗品,经SephadexG-100凝胶层析进一步分离纯化;采用SLP试剂盒对纯化的可溶性PGN定性,ELISA法... 目的从金黄色葡萄球菌中提取纯化可溶性肽聚糖并鉴定其活性。方法采用小剂量青霉素作用金黄色葡萄球菌(ATCC25923),诱导合成可溶性肽聚糖(PGN)粗品,经SephadexG-100凝胶层析进一步分离纯化;采用SLP试剂盒对纯化的可溶性PGN定性,ELISA法检测纯化的可溶性PGN对小鼠RAW264.7细胞的活化作用。结果分离纯化的可溶性PGN经SLP试剂检测阳性,该可溶性PGN可刺激RAW264.7细胞释放TNF-α,并具有明显的量效关系。结论采用青霉素诱导结合凝胶层析技术可从金黄色葡萄球菌获取纯度及生物学活性较高的可溶性PGN。 展开更多
关键词 肽聚糖 金黄色葡萄球菌 分离 纯化
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