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白血病细胞雄激素受体基因启动子甲基化状态的研究 被引量:5
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作者 王刚 刘利 +6 位作者 陈杰 辛海明 张晓兵 蔡云 侯露 郭乔楠 刘泽军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期932-934,共3页
目的检测白血病细胞雄激素受体基因启动子区CpG岛甲基化状态情况,初步探讨雄激素受体基因启动子区甲基化与白血病发病机制的可能联系。方法应用甲基化特异性PCR技术(methylation specific PCR,MSP)检测3种白血病细胞株及15例患者骨髓标... 目的检测白血病细胞雄激素受体基因启动子区CpG岛甲基化状态情况,初步探讨雄激素受体基因启动子区甲基化与白血病发病机制的可能联系。方法应用甲基化特异性PCR技术(methylation specific PCR,MSP)检测3种白血病细胞株及15例患者骨髓标本雄激素受体基因甲基化状态。结果白血病细胞株均出现甲基化和非甲基化带,呈部分甲基化状态,而作为对照的正常人白细胞均只出现非甲基化带。15例白血病患者全部检出甲基化状态。结论白血病细胞的雄激素受体基因启动子区存在高甲基化现象,可能为白血病的致病机制分析提供了一个新的方向,提示AR基因启动子CPG岛的甲基化有可能成为白血病的新的参考标记物。 展开更多
关键词 白血病 雄激素受体基因 DNA甲基化 甲基化特异性PCR
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iASPP特异性RNAi表达载体的构建及其干扰效果鉴定 被引量:7
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作者 辛海明 刘泽军 +1 位作者 陈杰 王刚 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期900-902,共3页
目的构建iASPP基因的RNA i真核表达载体PGCsilencerTMH1/Neo/GFP/RNA i,并观察其转染白血病细胞株Jurkat前后iASPP的表达变化以及其对细胞凋亡的影响。方法根据GenBank中iASPP的序列,设计特异性siRNA序列,将模板序列克隆至PGCsilencerTM... 目的构建iASPP基因的RNA i真核表达载体PGCsilencerTMH1/Neo/GFP/RNA i,并观察其转染白血病细胞株Jurkat前后iASPP的表达变化以及其对细胞凋亡的影响。方法根据GenBank中iASPP的序列,设计特异性siRNA序列,将模板序列克隆至PGCsilencerTMH1/Neo/GFP质粒中,测序鉴定后,用脂质体将重组子转染至Jurkat细胞中,用RT-PCR方法检测iASPP的表达,用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果经测序,模板序列与设计序列完全正确,RT-PCR检测Jurkat细胞中iASPP表达在转染干扰质粒后有明显的下降,转染后Jurkat细胞凋亡由11.81%增加到33.15%。结论成功构建了iASPP基因的RNA i真核表达载体,且其对白血病细胞有一定的干扰效果,为下一步探讨iASPP对肿瘤细胞中p53的抑癌作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 ASPP 质粒 RNAI
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ASPP家族成员mRNA在乳腺癌细胞株中的表达及意义 被引量:7
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作者 陈燕平 刘泽军 +2 位作者 辛海明 王长松 卢欣 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1393-1394,共2页
关键词 肿瘤抑制蛋白质P53 乳腺肿瘤RNA 信使
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人iASPP全长CDS的分段扩增、克隆及鉴定 被引量:4
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作者 陈杰 辛海明 +6 位作者 蔡云 侯露 王刚 刘利 卢欣 钟山 刘泽军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期996-998,共3页
目的最初报道的iASPP长度为351个氨基酸,但最近发现iASPP的全长应为828个氨基酸,为了探讨全长iASPP的功能,我们采取3分段扩增的策略克隆全长iASPP基因。方法从HL-60细胞中提取总RNA、DNA,RT-PCR分段扩增目的基因,克隆至pMD19-Tsimple载... 目的最初报道的iASPP长度为351个氨基酸,但最近发现iASPP的全长应为828个氨基酸,为了探讨全长iASPP的功能,我们采取3分段扩增的策略克隆全长iASPP基因。方法从HL-60细胞中提取总RNA、DNA,RT-PCR分段扩增目的基因,克隆至pMD19-Tsimple载体,测序,并亚克隆至pCDNA3.1载体。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-iASPP经测序,与GenBank上登陆的人iASPP cDNA(gi:60457962)序列完全一致。结论成功构建了iASPP真核表达载体。 展开更多
关键词 IASPP 分段扩增 克隆 P53
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人完整p53凋亡刺激蛋白家族抑制成员多克隆抗体的制备及鉴定 被引量:5
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作者 蔡云 高兴 +3 位作者 辛海明 陈杰 扬新 刘泽军 《医学研究生学报》 CAS 2009年第3期240-243,共4页
目的:p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族可调节p53抑癌功能,其抑制成员(iASPP)具有特异性抑制p53诱导细胞凋亡的能力。为了对iASPP进行系统研究,文中报道制备完整的iASPP分子多克隆抗体的方法。方法:在完整iASPP独有的N端选择3个免疫原肽段,制... 目的:p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族可调节p53抑癌功能,其抑制成员(iASPP)具有特异性抑制p53诱导细胞凋亡的能力。为了对iASPP进行系统研究,文中报道制备完整的iASPP分子多克隆抗体的方法。方法:在完整iASPP独有的N端选择3个免疫原肽段,制备了3个多克隆抗体。用ELISA检测抗体效价,Western blot比较3个抗体检测内源性抗原的效果,并用体外转录翻译系统制备的完整iASPP蛋白作为对照标准。结果:1号抗体效价>1∶32000,2号和3号抗体效价>1∶16000。Western blot确定100000为完整iASPP蛋白的条带位置。结论:成功地制备了iASPP的多克隆抗体,为深入研究完整iASPP提供了有用的工具。 展开更多
关键词 p53凋亡刺激蛋白家族抑制成员 多克隆抗体 免疫原 免疫印迹
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p53凋亡刺激蛋白基因5′端非编码区CpG岛高甲基化与其mRNA表达的改变 被引量:2
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作者 张云 辛海明 +5 位作者 刘泽军 卢欣 钟山 顾寿智 张晓兵 杨新 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第21期2103-2106,共4页
目的了解ASPP1和ASPP2基因5′端非编码区CpG岛在野生型p53肿瘤细胞中的甲基化状况及其与mRNA异常表达的关系。方法用RT-PCR方法测定mRNA表达,甲基化特异的PCR方法测定DNA甲基化。结果肿瘤细胞中ASPP1和ASPP2mRNA表达减少,同时ASPP基因的... 目的了解ASPP1和ASPP2基因5′端非编码区CpG岛在野生型p53肿瘤细胞中的甲基化状况及其与mRNA异常表达的关系。方法用RT-PCR方法测定mRNA表达,甲基化特异的PCR方法测定DNA甲基化。结果肿瘤细胞中ASPP1和ASPP2mRNA表达减少,同时ASPP基因的5′端非编码区出现异常高甲基化。结论ASPP基因的异常高甲基化可能是引起ASPP mRNA表达降低的影响因素之一。 展开更多
关键词 p53凋亡刺激蛋白 DNA甲基化 MSP RT-PCR
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