目的比较F icoll(1.073 g/m l)密度梯度离心法分离人骨髓间充质干细胞(hum an bone m arrow derived m esen-chym al stem cells,hBMMSCs)与常用的Percoll分离法之间的差异。建立一种简便、实用的hBMMSCs分离方法。方法分别应用上述两...目的比较F icoll(1.073 g/m l)密度梯度离心法分离人骨髓间充质干细胞(hum an bone m arrow derived m esen-chym al stem cells,hBMMSCs)与常用的Percoll分离法之间的差异。建立一种简便、实用的hBMMSCs分离方法。方法分别应用上述两种方法分离hBMMSCs,比较用两种方法从骨髓中分离的有核细胞得率及死亡率、贴壁细胞克隆数、细胞形态以及细胞表面标志。结果两种方法获得的有核细胞得率无显著差异(P>0.05);F icoll(1.073 g/m l)密度梯度离心法获得的有核细胞死亡率显著小于Percoll分离法(P<0.01);F icoll(1.073 g/m l)密度梯度离心法获得的hBMMSCs原代培养5 d的贴壁细胞克隆数/37.5 cm2显著多于Percoll分离法(P<0.05)。F icoll(1.073 g/m l)密度梯度离心法与Percoll分离法获得的hBMMSCs细胞形态均一,为纺锤形或三角形;F icoll(1.073 g/m l)密度梯度离心法与Percoll分离法获得的原代hBMMSCs CD105阳性表达率[(94.0±2.0)%vs(95.8±1.5)%]及CD34阴性表达率[(96.0±1.2)%vs(97±1.0)%]无显著差异(P>0.05)。结论与Percoll分离法相比较,F icoll(1.073 g/m l)密度梯度离心法分离hBMMSCs具有细胞死亡率较小,细胞得率较多的优点,是一种较好的hBMMSCs分离方法。展开更多
目的研究不同浓度的葡聚糖/明胶复合水凝胶支架材料对体外构建组织工程髓核的影响,对其性能进行表征,探索适用于组织工程髓核的水凝胶浓度。方法通过Schiff交联反应制备葡聚糖/明胶复合水凝胶支架材料,对不同浓度（6%、8%、10%、12%、14...目的研究不同浓度的葡聚糖/明胶复合水凝胶支架材料对体外构建组织工程髓核的影响,对其性能进行表征,探索适用于组织工程髓核的水凝胶浓度。方法通过Schiff交联反应制备葡聚糖/明胶复合水凝胶支架材料,对不同浓度（6%、8%、10%、12%、14%）水凝胶的内部形态结构、孔径、孔隙率、杨氏模量和细胞相容性进行评估,分离培养猪原代髓核细胞,以P1代细胞在不同浓度的水凝胶内部进行三维培养,MTT染色观察细胞活性,Real-time PCR法检测髓核细胞特异性基因aggrecan和typeⅡcollagen表达。结果葡聚糖/明胶复合水凝胶在电镜扫描下呈现多孔网络结构,随着浓度的升高,水凝胶的孔径（38.182-82.675μm）和孔隙率（95.5%-98.3%）持续下降,杨氏模量不断升高（0.135-11.366 k Pa）;该水凝胶具有较好的细胞相容性,但是6%、8%的水凝胶分别在接种细胞后第4、7天后细胞的黏附和增殖显著下降（P〈0.05）。接种1周后,浓度为10%的水凝胶内部三维培养的髓核细胞活性显著高于其他浓度水凝胶（P〈0.05）,同时aggrecan、typeⅡcollagen基因表达显著高于其他各组（P〈0.05）。结论浓度为10%的葡聚糖/明胶复合水凝胶兼具有适宜的三维多孔网络结构、稳定的力学结构以及较好的细胞相容性,适用于构建组织工程髓核。展开更多
文摘目的研究不同浓度的葡聚糖/明胶复合水凝胶支架材料对体外构建组织工程髓核的影响,对其性能进行表征,探索适用于组织工程髓核的水凝胶浓度。方法通过Schiff交联反应制备葡聚糖/明胶复合水凝胶支架材料,对不同浓度（6%、8%、10%、12%、14%）水凝胶的内部形态结构、孔径、孔隙率、杨氏模量和细胞相容性进行评估,分离培养猪原代髓核细胞,以P1代细胞在不同浓度的水凝胶内部进行三维培养,MTT染色观察细胞活性,Real-time PCR法检测髓核细胞特异性基因aggrecan和typeⅡcollagen表达。结果葡聚糖/明胶复合水凝胶在电镜扫描下呈现多孔网络结构,随着浓度的升高,水凝胶的孔径（38.182-82.675μm）和孔隙率（95.5%-98.3%）持续下降,杨氏模量不断升高（0.135-11.366 k Pa）;该水凝胶具有较好的细胞相容性,但是6%、8%的水凝胶分别在接种细胞后第4、7天后细胞的黏附和增殖显著下降（P〈0.05）。接种1周后,浓度为10%的水凝胶内部三维培养的髓核细胞活性显著高于其他浓度水凝胶（P〈0.05）,同时aggrecan、typeⅡcollagen基因表达显著高于其他各组（P〈0.05）。结论浓度为10%的葡聚糖/明胶复合水凝胶兼具有适宜的三维多孔网络结构、稳定的力学结构以及较好的细胞相容性,适用于构建组织工程髓核。
