目的探讨心肌细胞在缺氧条件下微管损伤与线粒体损害的关系。方法常规方法分离培养W istar乳鼠心肌细胞,分为正常对照组、缺氧组及缺氧微管解聚组,分别于缺氧30 m in、1 h对3组进行缺氧处理,并对缺氧微管解聚组进行特异性微管解聚剂秋...目的探讨心肌细胞在缺氧条件下微管损伤与线粒体损害的关系。方法常规方法分离培养W istar乳鼠心肌细胞,分为正常对照组、缺氧组及缺氧微管解聚组,分别于缺氧30 m in、1 h对3组进行缺氧处理,并对缺氧微管解聚组进行特异性微管解聚剂秋水仙素解聚微管后采用流式细胞仪定量检测α-微管蛋白荧光强度变化,激光共聚焦显微镜检测α-微管蛋白及线粒体形态、分布及荧光强度变化。结果与正常对照组比较,缺氧组α-微管蛋白免疫荧光强度明显减弱(P<0.01);微管断裂,分布紊乱,线粒体分布亦出现紊乱,规律性基本丧失。与缺氧组比较,缺氧并微管解聚组微管断裂、分布紊乱、荧光强度减弱明显(P<0.01);线粒体分布弥散,完全失去规律性,基质变淡显著,荧光染色强度亦明显降低(P<0.01)。结论心肌细胞缺氧早期(30 m in)即出现微管损伤,说明微管损伤可能是导致心肌细胞线粒体损害的因素。展开更多
目的研究溶葡萄球菌酶在体外和创面肉芽组织中对金黄色葡萄球菌等几种有代表性的常见创面感染菌的抗菌效果。方法用体外药敏试验观察了溶葡萄球菌酶对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和铜绿假单孢菌抗菌效果；并用组织细菌定量分析的方法分...目的研究溶葡萄球菌酶在体外和创面肉芽组织中对金黄色葡萄球菌等几种有代表性的常见创面感染菌的抗菌效果。方法用体外药敏试验观察了溶葡萄球菌酶对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和铜绿假单孢菌抗菌效果；并用组织细菌定量分析的方法分析了溶葡萄球菌酶对29例Ⅲ度面积10％～30％总体表面积（total body Surface area，TBSA）的烧伤患者残留创面肉芽组织中金黄色葡萄球菌的抗菌效果。结果溶葡萄球菌酶对金黄色葡萄球菌有很强的抗菌效果，对白色念珠菌也有明显的抗菌效果；对铜绿假单孢菌的抗菌效果较差。溶葡萄球菌酶纱布在烧伤残留创面连续使用3d后，能杀死肉芽组织中89．2％的细菌。证明溶葡萄球菌酶能有效控制肉芽组织中的细菌数量。同时，杀菌纱布所含成分是生物酶类，使用后未见全身不良反应。结论溶葡萄球菌酶除了对金黄色葡萄球菌有很强的杀菌作用外，对白色念珠菌也有很好的杀菌作用，溶葡萄球菌酶可以作为控制中晚期烧伤残余创面金黄色葡萄球菌感染非常有效的局部用药。展开更多
目的构建hITF毕赤酵母分泌型表达载体,表达重组hITF,为功能研究奠定基础。方法通过PCR获得hITFcDNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pGAPZαA分泌信号下游,得到重组载体pGAPZαA-hITF。BspHⅠ线性化后氯化锂转化进入X-33,Zeoc in筛选转...目的构建hITF毕赤酵母分泌型表达载体,表达重组hITF,为功能研究奠定基础。方法通过PCR获得hITFcDNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pGAPZαA分泌信号下游,得到重组载体pGAPZαA-hITF。BspHⅠ线性化后氯化锂转化进入X-33,Zeoc in筛选转化酵母菌,PCR鉴定目的基因。阳性转化子经摇瓶表达,取上清TCA沉淀后做Tric ine SDS-PAGE分析及W estern b lot检测。结果经测序及PCR证实,hITFcDNA准确插入酵母表达载体pGAPZαA中,氯化锂转化后,重组载体通过同源重组整合进入酵母基因组中。Tric ine SDS-PAGE分析证明hITF的分子量约为10×103,W estern b lot分析表明,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性。结论成功构建出酵母表达载体pGAPZαA-hITF,获得重组hITF,为深入研究hITF奠定了基础。展开更多
目的了解缺氧后ECV-304细胞钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase,CASK)蛋白表达及细胞内分布的变化。方法将培养的ECV-304细胞置于缺氧(5%O2)条件培养1、3、6、12h,用Western blot方...目的了解缺氧后ECV-304细胞钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase,CASK)蛋白表达及细胞内分布的变化。方法将培养的ECV-304细胞置于缺氧(5%O2)条件培养1、3、6、12h,用Western blot方法检测CASK表达的变化,用免疫组化技术观察CASK在细胞内分布情况。结果ECV-304细胞的CASK表达随缺氧时间延长而逐渐增高,3h开始增加,6h达高峰,12h下降但仍高于正常。免疫组织化学染色的结果显示,随着缺氧时间的延长,细胞染色加深、并出现CASK向核膜聚集的现象。结论缺氧可以影响CASK的蛋白表达和细胞内分布,提示CASK可能是一个新的值得关注的缺氧相关蛋白。展开更多
文摘目的探讨心肌细胞在缺氧条件下微管损伤与线粒体损害的关系。方法常规方法分离培养W istar乳鼠心肌细胞,分为正常对照组、缺氧组及缺氧微管解聚组,分别于缺氧30 m in、1 h对3组进行缺氧处理,并对缺氧微管解聚组进行特异性微管解聚剂秋水仙素解聚微管后采用流式细胞仪定量检测α-微管蛋白荧光强度变化,激光共聚焦显微镜检测α-微管蛋白及线粒体形态、分布及荧光强度变化。结果与正常对照组比较,缺氧组α-微管蛋白免疫荧光强度明显减弱(P<0.01);微管断裂,分布紊乱,线粒体分布亦出现紊乱,规律性基本丧失。与缺氧组比较,缺氧并微管解聚组微管断裂、分布紊乱、荧光强度减弱明显(P<0.01);线粒体分布弥散,完全失去规律性,基质变淡显著,荧光染色强度亦明显降低(P<0.01)。结论心肌细胞缺氧早期(30 m in)即出现微管损伤,说明微管损伤可能是导致心肌细胞线粒体损害的因素。
文摘目的研究溶葡萄球菌酶在体外和创面肉芽组织中对金黄色葡萄球菌等几种有代表性的常见创面感染菌的抗菌效果。方法用体外药敏试验观察了溶葡萄球菌酶对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和铜绿假单孢菌抗菌效果；并用组织细菌定量分析的方法分析了溶葡萄球菌酶对29例Ⅲ度面积10％～30％总体表面积（total body Surface area，TBSA）的烧伤患者残留创面肉芽组织中金黄色葡萄球菌的抗菌效果。结果溶葡萄球菌酶对金黄色葡萄球菌有很强的抗菌效果，对白色念珠菌也有明显的抗菌效果；对铜绿假单孢菌的抗菌效果较差。溶葡萄球菌酶纱布在烧伤残留创面连续使用3d后，能杀死肉芽组织中89．2％的细菌。证明溶葡萄球菌酶能有效控制肉芽组织中的细菌数量。同时，杀菌纱布所含成分是生物酶类，使用后未见全身不良反应。结论溶葡萄球菌酶除了对金黄色葡萄球菌有很强的杀菌作用外，对白色念珠菌也有很好的杀菌作用，溶葡萄球菌酶可以作为控制中晚期烧伤残余创面金黄色葡萄球菌感染非常有效的局部用药。
文摘目的构建hITF毕赤酵母分泌型表达载体,表达重组hITF,为功能研究奠定基础。方法通过PCR获得hITFcDNA片段,将目的基因插入酵母表达载体pGAPZαA分泌信号下游,得到重组载体pGAPZαA-hITF。BspHⅠ线性化后氯化锂转化进入X-33,Zeoc in筛选转化酵母菌,PCR鉴定目的基因。阳性转化子经摇瓶表达,取上清TCA沉淀后做Tric ine SDS-PAGE分析及W estern b lot检测。结果经测序及PCR证实,hITFcDNA准确插入酵母表达载体pGAPZαA中,氯化锂转化后,重组载体通过同源重组整合进入酵母基因组中。Tric ine SDS-PAGE分析证明hITF的分子量约为10×103,W estern b lot分析表明,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性。结论成功构建出酵母表达载体pGAPZαA-hITF,获得重组hITF,为深入研究hITF奠定了基础。
文摘目的了解缺氧后ECV-304细胞钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶(calcium/calmodulin-dependent serine protein kinase,CASK)蛋白表达及细胞内分布的变化。方法将培养的ECV-304细胞置于缺氧(5%O2)条件培养1、3、6、12h,用Western blot方法检测CASK表达的变化,用免疫组化技术观察CASK在细胞内分布情况。结果ECV-304细胞的CASK表达随缺氧时间延长而逐渐增高,3h开始增加,6h达高峰,12h下降但仍高于正常。免疫组织化学染色的结果显示,随着缺氧时间的延长,细胞染色加深、并出现CASK向核膜聚集的现象。结论缺氧可以影响CASK的蛋白表达和细胞内分布,提示CASK可能是一个新的值得关注的缺氧相关蛋白。
