血小板、TNF-α及IL-1β与活动期类风湿关节炎的相关性研究 被引量：37

1

作者 王志中 王勇 +7 位作者 牟方祥 方勇飞 陈军 罗彦 石颖 成娴 吴红 蒋毅 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期469-472,共4页

目的探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者的疾病活动性与炎症相关因子的关系。方法收集363例住院和门诊RA患者的血清及临床数据,包括血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、血小板计数(PLT)及类风湿因子(RF),ELISA检测抗环瓜氨酸肽抗体... 目的探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者的疾病活动性与炎症相关因子的关系。方法收集363例住院和门诊RA患者的血清及临床数据,包括血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、血小板计数(PLT)及类风湿因子(RF),ELISA检测抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)、葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1β(IL-1β)的表达,按DAS28(ESR)分为疾病高活动及中低活动组,分析PLT、TNF-α及IL-1β在RA疾病高、中低活动组与正常对照组之间的差异,探讨其与临床各指标的相关性。结果 RA疾病高活动组PLT水平明显高于中低活动与正常对照组(P=0.000)。3组间TNF-α、IL-1β计量值分布有显著差异(P<0.05)。根据平均秩次推断,RA疾病高活动组TNF-α、IL-1β中位数分别为[2.97(1.87,13.53)、0.95(0.55,5.47)]pg/ml,中低活动组中位数分别为[2.78(1.91,8.18)、0.72(0.57,5.14)]pg/ml,均显著高于正常对照组(P<0.01),而高活动组与中低活动组之间TNF-α或IL-1β比较计量值分布无统计学差异。PLT与关节压痛数、关节肿胀数、晨僵、VAS、DAS28(4)、CRP及ESR均呈显著正相关(P<0.01),而TNF-α与关节压痛数、VAS、DAS28(4)及ESR呈正相关(P<0.05),IL-1β仅与ESR相关(r=0.179,P=0.001)。PLT、TNF-α及IL-1β均与CCP、RF、GPI无相关性(P>0.05)。结论 PLT及TNF-α可作为RA疾病活动度的灵敏指标之一,IL-1β在一定程度上反应炎症活动程度。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 疾病活动性 血小板 肿瘤坏死因子-Α 白细胞介素-1Β

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青藤碱对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞体外增殖及凋亡的影响 被引量：32

2

作者 张莹 方勇飞 +2 位作者 王勇 李景怡 黄小鲁 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期1179-1182,共4页

目的观察青藤碱(sinomenine,SN)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者成纤维样滑膜细胞(fi-broblast-like synoviocytes,FLS)凋亡及增殖的影响,为青藤碱在临床上的应用提供实验依据。方法光镜和荧光显微镜观察FLS形态的变化,流... 目的观察青藤碱(sinomenine,SN)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者成纤维样滑膜细胞(fi-broblast-like synoviocytes,FLS)凋亡及增殖的影响,为青藤碱在临床上的应用提供实验依据。方法光镜和荧光显微镜观察FLS形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT比色法检测SN对FLS生长的抑制作用。结果光镜及荧光显微镜下可见核固缩,变圆,荧光染色增强等凋亡形态学变化。流式细胞仪结果显示,随着SN浓度及作用时间的增加,被处理的FLS的凋亡率增加,未处理组与各处理组比较差异具有显著性(P<0·05),其中3.2mmol/L浓度的SN作用48h对FLS凋亡影响最为显著。MTT结果显示,加入不同浓度SN(2.8～3.2mmol/L),培养的FLS24h、48h后对增殖的抑制水平显著高于未处理组,与凋亡率呈现正相关(r=0.787,P<0·05)。结论SN在一定浓度及作用时间内可抑制RA患者FLS增殖,诱导凋亡,这可能是SN治疗RA机制之一。 展开更多

关键词 青藤碱 滑膜细胞 增殖 凋亡

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401例类风湿关节炎患者中医证候要素分析 被引量：25

3

作者 李静 柏干苹 +1 位作者 王勇 方勇飞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第21期2103-2105,共3页

目的对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者的中医症状及相关资料进行统计分析,探讨其结果与相关指标间的关系。为RA的证候学研究及临床治疗提供依据。方法采用临床流行病学的方法设计调查问卷,收集分析资料,利用多元统计方法进... 目的对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者的中医症状及相关资料进行统计分析,探讨其结果与相关指标间的关系。为RA的证候学研究及临床治疗提供依据。方法采用临床流行病学的方法设计调查问卷,收集分析资料,利用多元统计方法进行数据统计。结果401例RA患者中医症状可归纳为寒、热、虚3个公因子,可分为寒证、热证、虚证、寒热错杂证、虚寒证、虚热证6类证候。差异性统计分析结果提示健康问卷调查评分、血小板、类风湿因子、抗角蛋白抗体在各证候间有统计学差异(P<0.05)。结论重庆地区RA患者中以寒热错杂证多见,热证多见于疾病活动期,而稳定期多见寒证,RA疾病活动性与中医证候相关。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 中医证候 多元统计

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莪术醇通过JAK3/STAT信号途径抑制Jurkat细胞增殖 被引量：9

4

作者 王恒 王勇 +3 位作者 江晓霁 王志中 刘晓飞 方勇飞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期408-411,共4页

目的观察莪术醇对抑制Jurkat细胞增殖的影响,并从JAK3/STAT信号途径探讨其作用机制。方法不同浓度(6.25、12.5、25、50μg/mL)莪术醇干预处理人Jurkat细胞株,分别用新型四唑单钠盐法、流式细胞技术观察检测细胞增殖活力及细胞周期分布。... 目的观察莪术醇对抑制Jurkat细胞增殖的影响,并从JAK3/STAT信号途径探讨其作用机制。方法不同浓度(6.25、12.5、25、50μg/mL)莪术醇干预处理人Jurkat细胞株,分别用新型四唑单钠盐法、流式细胞技术观察检测细胞增殖活力及细胞周期分布。Hoechst 33258染色,观察莪术醇诱导的细胞凋亡形态学变化。设正常对照组、IL-2刺激组、JAK3抑制剂组及莪术醇干预组,Western blot检测细胞中JAK3、STAT3及STAT5a磷酸化蛋白表达量的变化。结果不同浓度的莪术醇体外处理24 h后,Jurkat细胞的增殖受到明显抑制,呈浓度依赖性下降(P<0.05)。细胞周期分布结果显示,随着莪术醇作用浓度的增加,细胞凋亡的比例明显升高,S期细胞比例呈浓度依赖性增多,G2/M细胞比例则呈减少趋势。50μg/mL的莪术醇处理24 h后,细胞表现出核固缩、碎裂等典型的凋亡形态学变化。Western blot检测结果显示,50μg/mL的莪术醇可抑制JAK3与STAT5a磷酸化蛋白的表达(P<0.05,P<0.01),但对STAT3无明显影响(P>0.05)。结论莪术醇作用于Jurkat细胞S～G2/M期,阻滞S期细胞向G2/M期移行,并下调JAK3/STAT5信号分子以抑制该细胞增殖。 展开更多

关键词 莪术醇 JURKAT T细胞 JAK3-STAT 细胞增殖

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类风湿关节炎早期诊断指标的筛选及鉴定 被引量：12

5

作者 万萍 钟兵 +1 位作者 邹庆华 方勇飞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第15期1564-1567,共4页

目的寻找类风湿关节炎的早期诊断指标。方法采用双向电泳、MALDI-TOF/TOF质谱分析等方法从类风湿关节炎滑膜组织中筛选并鉴定特异性自身抗原,进一步建立该抗体的ELISA检测方法,测定30例早期类风湿关节炎患者及30例健康对照者血清中的抗... 目的寻找类风湿关节炎的早期诊断指标。方法采用双向电泳、MALDI-TOF/TOF质谱分析等方法从类风湿关节炎滑膜组织中筛选并鉴定特异性自身抗原,进一步建立该抗体的ELISA检测方法,测定30例早期类风湿关节炎患者及30例健康对照者血清中的抗体水平,并分析抗体水平与疾病活动度的相关性。结果早期类风湿关节炎血清中筛选并鉴定出特异性的锰超氧化物歧化酶抗体。ELISA法检测早期RA血清中锰超氧化物歧化酶抗体D(450)值均值(1.72±0.35)明显高于正常人血清(0.95±0.34)(P<0.000 1)。在早期RA患者血清中锰超氧化物歧化酶抗体阳性率为63.3%,且该抗体水平与RF、CCP、CRP呈明显正相关。结论锰超氧化物歧化酶抗体可能作为类风湿关节炎早期诊断与疾病活动性预测的指标之一。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 自身抗体 锰超氧化物歧化酶 早期诊断

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川西獐牙菜醇提物对大鼠胆汁酸转运蛋白Mrp4、转录因子Nrf2表达的影响 被引量：9

6

作者 杜晓煌 柴进 +4 位作者 封欣婵 张樑君 程英 陈文生 方勇飞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期957-961,共5页

目的观察川西獐牙菜醇提物对肝细胞胆汁酸转运蛋白Mrp4(multidrug resistanceassociated protein 4,Mrp4)、转录因子Nrf2的调控作用。方法将14只SD大鼠分为2组:正常对照组、川西獐牙菜醇提物组,每组7只。分别用生理盐水、川西獐牙菜醇... 目的观察川西獐牙菜醇提物对肝细胞胆汁酸转运蛋白Mrp4(multidrug resistanceassociated protein 4,Mrp4)、转录因子Nrf2的调控作用。方法将14只SD大鼠分为2组:正常对照组、川西獐牙菜醇提物组,每组7只。分别用生理盐水、川西獐牙菜醇提物处理7 d后,收集组织标本,免疫组化检测Mrp3、Mrp4在肝脏的表达变化,Western blot及RT-PCR检测胆汁酸转运蛋白Mrp3、Mrp4和转录因子Nrf2、核受体Lrh-1在蛋白及mRNA水平的变化。结果在mRNA水平,RT-q PCR结果显示川西獐牙菜醇提物组肝脏胆汁酸转运蛋白Mrp4表达较正常对照组增加2.1倍,同时,Mrp3表达增加1.7,转录因子Nrf2表达增高1.8倍,核受体Lrh-1表达增高1.4倍;在蛋白水平,Western blot结果表明川西獐牙菜醇提物组肝脏胆汁酸转运蛋白Mrp4表达较正常对照组组增加2.5倍,同时,Mrp3表达增高3.0倍,转录因子Nrf2表达增高2.3倍,核受体Lrh-1表达增高1.3倍,而免疫荧光结果则进一步证实了RT-q PCR与Western blot的结果,显示川西獐牙菜醇提物组Mrp3、Mrp4的表达较正常对照组组明显增强。结论川西獐牙菜醇提物能够刺激肝细胞表面胆汁酸转运蛋白Mrp4表达增高,这种调控作用可能与Nrf2相关。 展开更多

关键词 胆汁淤积 川西獐牙菜醇提物 多药耐药相关蛋白4 转录因子

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三七总皂苷对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响 被引量：11

7

作者 张荣华 李景怡 +5 位作者 陈如泉 盛国光 艾国平 闫国和 粟永萍 肖桃元 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第24期2410-2413,共4页

目的探讨三七总皂苷(PNS)对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响及意义。方法通过电镜观察大鼠肝脏的超微结构,以不同剂量PNS分别对肝纤维化大鼠进行预防和治疗。结果肝纤维化大鼠可出现肝细胞胞浆内肿胀空泡和脂滴、微绒毛稀少、窦内皮细... 目的探讨三七总皂苷(PNS)对肝纤维化大鼠肝脏超微结构的影响及意义。方法通过电镜观察大鼠肝脏的超微结构,以不同剂量PNS分别对肝纤维化大鼠进行预防和治疗。结果肝纤维化大鼠可出现肝细胞胞浆内肿胀空泡和脂滴、微绒毛稀少、窦内皮细胞肥胖、细胞器增多、Disse间隙内胶原纤维增生等超微结构改变。PNS可减轻大鼠肝纤维化模型肝细胞内脂滴形成、内质网增生、线粒体肿胀及间质胶原增生。结论无论治疗和预防组,PNS均可有效减轻肝纤维化大鼠肝脏超微结构的损伤。 展开更多

关键词 肝纤维化 三七总皂苷 超微结构 大鼠

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云克联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎53例临床分析 被引量：18

8

作者 万萍 钟丽 邹庆华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第13期1359-1360,共2页

目的探讨云克(99锝-亚甲基二磷酸盐)、甲氨蝶呤联合治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的疗效及其安全性。方法选取了53例活动期RA的临床资料进行回顾性分析,其中云克+甲氨蝶呤组22例,云克+甲氨蝶呤+来氟米特组31例,两组均接受... 目的探讨云克(99锝-亚甲基二磷酸盐)、甲氨蝶呤联合治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的疗效及其安全性。方法选取了53例活动期RA的临床资料进行回顾性分析,其中云克+甲氨蝶呤组22例,云克+甲氨蝶呤+来氟米特组31例,两组均接受相应药物治疗l2周。观察4、12周结束时临床症状改善、实验室指标变化及不良反应。结果 4、12周时两组的各项临床指标及实验室指标较治疗前均有显著性差异(P<0.05),但两组之间无显著差异(P>0.05)。不良事件两组均较少,两组之间总体比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论云克(99锝-亚甲基二磷酸盐)和甲氨蝶呤联合治疗类风湿关节炎起效快,副作用少较小。 展开更多

关键词 云克(99锝-亚甲基二磷酸盐) 甲氨蝶呤 来氟米特 类风湿关节炎

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早期类风湿关节炎患者肠道微生物群落的分析 被引量：10

9

作者 刘晓飞 王志中 +7 位作者 王勇 李景怡 张娟 曾本华 万萍 吴力克 魏泓 方勇飞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第23期2411-2415,共5页

目的研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者肠道微生物群落分布特点,探讨类风湿关节炎与肠道菌群的关系。方法收集30例早期RA患者(RA组)与21例健康受试者(对照组)粪便样本,培养与测定肠道菌群计数水平;提取粪便样本基因组DNA,... 目的研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者肠道微生物群落分布特点,探讨类风湿关节炎与肠道菌群的关系。方法收集30例早期RA患者(RA组)与21例健康受试者(对照组)粪便样本,培养与测定肠道菌群计数水平;提取粪便样本基因组DNA,PCR扩增细菌V6-V8区16SrDNA,产物经变性梯度凝胶电泳分离,获得肠道菌群DGGE图谱,分析肠道细菌丰富度、Shannon-Wiener指数、均匀度指标,用非加权类平均法对图像进行相似性聚类分析,并绘出聚类树形图,研究RA患者肠道菌群结构与健康受试者的差异。结果双歧杆菌含量:RA组为(6.21±1.48)CFU/ml,显著低于对照组(8.55±0.90)CFU/ml(P<0.01),脆弱类杆菌的含量:RA组为(6.54±1.28)CFU/ml,显著低于对照组(8.73±0.90)CFU/ml(P<0.01),乳杆菌、梭菌、肠杆菌、肠球菌数量差异无统计学意义(P>0.05)。肠道菌群DGGE图谱示:与对照组[丰富度:(22.8±3.12);Shannon-Wiener指数:(2.98±0.26);均匀度:(0.96±0.05)]相比,RA组丰富度[(16.0±1.05),P<0.01]、Shannon-Wiener指数[(2.48±0.14),P<0.01]和均匀度[(0.90±0.05),P<0.01]显著降低,分别表明RA患者肠道细菌的种类(丰富度)、菌群结构复杂程度、细菌的相对密度(均匀度)显著降低,在DGGE图谱下方区域RA患者肠道菌群条带数量减少,消失明显。图谱相似性聚类分析显示:20例样本聚为两类,一类样本中包含10例患者与1例健康人,二类样本中包含9例健康人。表明RA患者肠道菌群有较高的相似性,RA与健康人肠道菌群相似性低。结论早期RA患者肠道存在菌群失调,肠道细菌数量及结构与健康人有显著差异,其差异变化可能是类风湿关节炎的发病因素之一。 展开更多

关键词 肠道菌群 DGGE 早期类风湿关节炎 多样性指数

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多聚谷氨酸化甲氨蝶呤浓度与类风湿关节炎疗效相关性研究 被引量：8

10

作者 罗彦 王志中 +4 位作者 王勇 牟方祥 吴红 方勇飞 万萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期473-476,共4页

目的探讨经甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)治疗的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者红细胞内多聚谷氨酸化甲氨蝶呤(methotrexate polyglutamate,MTXPG)的浓度与其疾病活动度的关系。方法选取76例经MTX治疗3个月的RA患者进行横断... 目的探讨经甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)治疗的类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者红细胞内多聚谷氨酸化甲氨蝶呤(methotrexate polyglutamate,MTXPG)的浓度与其疾病活动度的关系。方法选取76例经MTX治疗3个月的RA患者进行横断面研究,采用ELISA方法检测红细胞内MTXPG浓度,根据治疗后疾病活动度(DAS28)以及治疗前后DAS28差异性分值分为显效、有效和无效组,进行各组之间MTXPG浓度的比较及相关性分析。结果经MTX治疗后21例RA患者显效,41例有效,14例无效。显效组红细胞内MTXPG浓度为(158.87±48.27)ng/ml,显著高于有效组(105.89±24.23)ng/ml及无效组(85.80±21.30)ng/ml(P<0.01)。红细胞内MXPG浓度与CRP(r=-0.628,P=0.000)、晨僵时间(r=-0.396,P=0.000)、肿胀关节数(r=-0.321,P=0.005)、压痛关节数(r=-0.376,P=0.001)、视觉模拟评分(VAS)(r=-0.236,P=0.000)、DAS(r=-0.255,P=0.026)呈显著负相关;与血沉、健康问卷评分(HAQ)无相关性(P>0.05)。结论经MTX治疗的RA患者各疗效组间红细胞内MTXPG浓度差异显著,较高浓度的MTXPG与较好的临床疗效相关。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 甲氨蝶呤 多聚谷氨酸化甲氨蝶呤

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谷氨酰胺联合维生素C对热应激致大鼠肠源性内毒素血症的预防作用 被引量：4

11

作者 薛世祥 牟东 +4 位作者 代剑华 王志中 赵海霞 袁月 彭贵勇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第17期1779-1782,共4页

目的观察谷氨酰胺联合维生素C对肠源性内毒血症的预防作用,并初步探讨其机制。方法将160只SD雄性大鼠按随机数字表法分为谷氨酰胺联合维生素C组、谷氨酰胺组、维生素C组、高温应激组、正常对照组。用人工气候箱建立大鼠中暑内毒素血症模... 目的观察谷氨酰胺联合维生素C对肠源性内毒血症的预防作用,并初步探讨其机制。方法将160只SD雄性大鼠按随机数字表法分为谷氨酰胺联合维生素C组、谷氨酰胺组、维生素C组、高温应激组、正常对照组。用人工气候箱建立大鼠中暑内毒素血症模型,分别于1、3、7、15 d用2%的戊巴比妥钠腹腔麻醉取小肠组织并心脏采血。用试剂盒检测小肠组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及血清内毒素的含量,RT-PCR检测小肠黏膜Toll样受体2(TLR2)mRNA表达情况。结果在同时间段与正常对照组比,高温应激组SOD含量明显降低,MDA、血清内毒素、TLR2mRNA表达量明显升高(P<0.05),3种治疗组SOD、MDA含量无统计学差异(P>0.05),谷氨酰胺组、维生素C组血清内毒素及TLR2 mRNA表达量明显升高(P<0.05),但谷氨酰胺组联合维生素C组血清内毒素及TLR2 mRNA表达量无统计学差异(P>0.05)。在同时间段与高温应激组相比,3种治疗组SOD含量显著升高(除第7天谷氨酰胺组、维生素C组外);MDA、内毒素含量及TLR2 mRNA表达量明显降低(除第3天、第15天的维生素C组TLR2 mRNA表达量外)(P<0.05)。同时间段的谷氨酰胺联合维生素C组与谷氨酰胺组、维生素C组相比,其SOD含量相近,但MDA和血清内毒素含量及TLR2 mRNA表达量均显著降低(P<0.05)。结论谷氨酰胺联合维生素C可减轻高热应激对肠黏膜的损伤,保护肠黏膜屏障功能,有效的降低肠源性内毒素血症发生,可用于高热中暑的预防。 展开更多

关键词 谷氨酰胺 维生素C 内毒素血症 中暑 SOD MDA Toll2受体

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锝[^(99)Tc]亚甲基二膦酸盐治疗骨质疏松症的研究进展 被引量：14

12

作者 高乐女 钟兵 王勇 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期1094-1099,共6页

骨质疏松症是一种全身性代谢性骨骼疾病,临床主要表现为骨骼疼痛、骨密度降低和骨折危险性增加,严重影响患者的生活质量。现阶段我国老年人中骨质疏松患病比例超过50%以上,其中骨折发生率接近1/3。双膦酸盐是目前治疗骨质疏松的主要药... 骨质疏松症是一种全身性代谢性骨骼疾病,临床主要表现为骨骼疼痛、骨密度降低和骨折危险性增加,严重影响患者的生活质量。现阶段我国老年人中骨质疏松患病比例超过50%以上,其中骨折发生率接近1/3。双膦酸盐是目前治疗骨质疏松的主要药物之一,因其具有强有力的破骨细胞抑制作用,临床应用广泛,而锝[^(99)Tc]亚甲基二膦酸盐(technetium methylenediphosphonate,^(99)Tc-MDP)注射液,商品名云克,是我国自主研制成功的新药,其主要成分是锝经氯化亚锡还原后与亚甲基双膦酸盐形成的螯合物,具有清除人体自由基、保护超氧化物歧化酶活力、抑制病理复化物的产生、抑制白细胞游走、降低胶原酶对软骨组织的破坏并修复破骨作用。可抑制骨吸收、改善骨质量、提高各个部位的骨密度、减低骨折风险,促进成骨,缓解骨痛。近年来已广泛应用于骨质疏松症的治疗,并已取得了较好的效果,且使用安全,无明显的副作用。本文对近年来云克应用于骨质疏松症的动物实验、临床疗效及安全性研究进行综述。 展开更多

关键词 骨质疏松症 锝亚甲基双膦酸盐 治疗

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PADI4基因多态性与类风湿关节炎的相关性研究 被引量：5

13

作者 钟兵 方勇飞 +3 位作者 李华 万萍 杨菲 王勇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1155-1157,共3页

目的探讨重庆地区汉族人群肽酰精氨酸脱亚胺基酶4(peptidylarginine deiminase4,PADI4)单核苷酸多态性(SNP)与类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)之间的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测302... 目的探讨重庆地区汉族人群肽酰精氨酸脱亚胺基酶4(peptidylarginine deiminase4,PADI4)单核苷酸多态性(SNP)与类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)之间的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)法检测302例RA患者和322名健康对照者的PADI4rs874881SNP多态性,同时检测类风湿因子(Rheumatoidfactor,RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(cyclic citrullinated peptide,CCP)和抗角蛋白抗体(anti-keratin antibody,AKA)3种RA的特异性自身抗体。结果健康对照组PADI4rs874881C/C、C/G和G/G基因型频率分别为0.332、0.488和0.180;RA组分别为0.295、0.474和0.232,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。RA组RF、抗CCP抗体和抗AKA抗体检测阳性率、滴度水平与PADI4rs874881基因分型均无相关性(P>0.05)。结论重庆汉族人群PADI4rs874881多态性与RA的易感性无关,与RF、CCP及AKA等抗体的阳性率无相关性。 展开更多

关键词 肽酰精氨酸脱亚胺基酶4 关节炎 类风湿 基因多态性

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高原脐贴软膏贴脐预防急性高原反应的效果观察 被引量：6

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作者 江晓霁 王志中 +9 位作者 潘柏良 王勇 王福领 王海 张晓霞 戚旬伟 侯晓军 朱丹平 万萍 方勇飞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期251-254,共4页

目的观察高原脐贴软膏贴脐对急性高原反应(acute mountain sickness,AMS)的预防效果。方法将62例健康青年男性汽车兵按随机数字表法分为观察组和对照组(n=31)。自海拔1 392 m,历时5 d急进到海拔4 617 m的高原。出发前1 d开始,分别予受... 目的观察高原脐贴软膏贴脐对急性高原反应(acute mountain sickness,AMS)的预防效果。方法将62例健康青年男性汽车兵按随机数字表法分为观察组和对照组(n=31)。自海拔1 392 m,历时5 d急进到海拔4 617 m的高原。出发前1 d开始,分别予受试者高原脐贴软膏、安慰剂软膏贴脐,膏药每天一换,连续5 d。在出发后定期测定受试者心率(HR)、血压(BP)和血氧饱和度(SaO2),并以军用卫生标准GJB1098-91《急性高原反应的诊断和处理原则》制订的《高原临床症状自测问卷表》及《高原急性胃肠应激反应自测评分表》随访记录受试者AMS症状和胃肠道症状;用《不良事件报告表》随访记录受试者的不良反应。结果急进高原后,观察组胃肠应激反应症状评分和发生率均低于对照组(P<0.01);观察组第1天的AMS发生率低于对照组(P<0.05),第3、5天的AMS症状评分和发生率均低于对照组(P<0.01);观察组第1天的血压和第5天的心率低于对照组(P<0.05),第5天的SaO2高于对照组(P<0.05);试验期间无不良反应发生。结论高原脐贴软膏贴脐对急性高原反应有明显的预防效果。 展开更多

关键词 高原病 中医治法 预防和防护用药

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慢病毒介导 shRNA 沉默鼠肝星状细胞 TGFβ1 对 α1Ⅰ型胶原表达的影响 被引量：4

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作者 张荣华 闫国和 +1 位作者 汪国建 粟永萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期456-460,共5页

目的构建大鼠转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)基因RNA干扰慢病毒载体,并观测其对大鼠肝星状细胞HSC-T6的TGFβ1基因沉默效应与对Ⅰ型胶原α1(alpha-1 typeⅠcollagen,Col1α1)表达的影响。方法针对大鼠TGFβ1基因CD... 目的构建大鼠转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)基因RNA干扰慢病毒载体,并观测其对大鼠肝星状细胞HSC-T6的TGFβ1基因沉默效应与对Ⅰ型胶原α1(alpha-1 typeⅠcollagen,Col1α1)表达的影响。方法针对大鼠TGFβ1基因CDs序列,筛选3个干扰靶点,合成其3对小干扰RNA(siRNA),将各对siRNA分别转入HSC-T6细胞,采用RT-PCR法从3对siRNA中筛选出最佳siRNA,设计并合成针对最佳siRNA靶序列的shRNA,退火形成双链,与载体pGreenPuro连接,构建pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体,予以酶切与测序鉴定。pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体经293细胞包装,将包装产生的高感染力的慢病毒颗粒感染HSC-T6细胞,倒置显微镜观察经感染的HSC-T6细胞的GFP表达情况,在mRNA与蛋白水平检测重组慢病毒pGreenPuro/TGFβ1 shRNA对HSC-T6细胞的TGFβ1基因的沉默效应及对Col1α1表达的影响。结果筛选到TGFβ1基因的最佳干扰靶序列。酶切与测序结果证实,构建pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体成功。HSC-T6细胞经pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒感染48 h后,RT-PCR检测未见TGFβ1基因表达,Col1α1基因较弱表达;Western blot检测显示TGFβ1、Col1α1蛋白表达均非常弱。结论成功构建大鼠TGFβ1基因RNA干扰慢病毒载体,该载体能有效沉默HSC-T6细胞的TGFβ1基因,并抑制Col1α1的表达。 展开更多

关键词 转化生长因子Β1 Ⅰ型胶原α1 RNA干扰 小分子 慢病毒载体

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血清葡萄糖6-磷酸异构酶在类风湿关节炎诊断中的意义 被引量：8

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作者 方勇飞 牟方祥 +1 位作者 王欢 戴裕光 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期732-734,共3页

目的探讨葡萄糖6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,GPI)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)诊断中的意义。方法用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法检测108例RA患者、42例系统性... 目的探讨葡萄糖6-磷酸异构酶(glucose-6-phosphate isomerase,GPI)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)诊断中的意义。方法用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)双抗体夹心法检测108例RA患者、42例系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者、50例其他风湿病患者及112例健康体检者血清GPI浓度,RA患者同时检测了抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibody,anti-CCP)、类风湿因子(rheuma-toid factor,RF)。结果GPI浓度:RA患者为(1.840±2.821)μg/ml,SLE患者为(0.143±0.426)μg/ml,其他风湿病患者为(0.074±0.279)μg/ml,健康体检者为(0.092±0.232)μg/ml。RA患者血清中GPI浓度显著高于SLE、其他风湿病患者和健康体检者(P<0.01)。Spearman等级相关分析显示RA患者GPI浓度与类风湿因子(RF)浓度呈显著正相关(r=0.622,P<0.01),与其他检测指标无相关性。结论GPI浓度大于0.209μg/ml时对RA的诊断有较高的特异性,其特异性可达93.7%,敏感性为56.5%。表明GPI的变化在RA诊断有较重要的意义。 展开更多

关键词 葡萄糖6-磷酸异构酶 类风湿关节炎 酶联免疫吸附实验

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生物素-亲和素偶联放大竞争酶联免疫吸附法测定甲氨蝶呤 被引量：2

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作者 牟方祥 王恒 +4 位作者 吴红 邹德生 邹庆华 万萍 方勇飞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1044-1046,共3页

目的将生物素-亲和素偶联放大竞争酶联免疫吸附法（BA-c ELISA）引入甲氨蝶呤血药浓度检测,建立一种快速、简便、敏感、特异的甲氨蝶呤检测方法。方法将NH2活性生物素与MTX单抗Ig G化学连接,采用亲和素-HRP酶标记系统,建立放大竞争酶联... 目的将生物素-亲和素偶联放大竞争酶联免疫吸附法（BA-c ELISA）引入甲氨蝶呤血药浓度检测,建立一种快速、简便、敏感、特异的甲氨蝶呤检测方法。方法将NH2活性生物素与MTX单抗Ig G化学连接,采用亲和素-HRP酶标记系统,建立放大竞争酶联免疫吸附法,连续制备5批试剂盒,对试剂盒进行批内批间精密度、敏感性、特异性、准确性和稳定性进行验证,检测口服MTX的类风湿关节炎患者血清MTX浓度,并对其检测结果进行判定。结果建立的生物素-亲和素偶联放大竞争酶联免疫吸附法测定甲氨蝶呤的方法具有很好的敏感性和特异性,检测MTX的灵敏度达到0.087 ng/m L,检测下限为0.137 ng/m L,检测线性范围为0.1~10 ng/m L;批内RSD为3.3%~8.7%,平均批内差异为6.5%,批间RSD为7.6%~9.9%,重复性教好,检测回收率为94.2%~112.8%。结论生物素-亲和素偶联放大竞争酶联免疫吸附法检测MTX,操作简单,具有较好的灵敏度和特异性。 展开更多

关键词 甲氨蝶呤 生物素 亲和素 放大竞争酶联免疫吸附法

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鳖甲煎改良方含药血清对肝星状细胞增殖、周期及凋亡的影响 被引量：2

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作者 张荣华 闫国和 +1 位作者 汪国建 粟永萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期905-910,共6页

目的探讨鳖甲煎改良方含药血清对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)-T6增殖、周期及凋亡的影响。方法分别用高剂量[28.4 g/(kg·d)]、中剂量[14.2 g/(kg·d)]与低剂量[7.1 g/(kg·d)]的鳖甲煎改良方及与鳖甲煎改... 目的探讨鳖甲煎改良方含药血清对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)-T6增殖、周期及凋亡的影响。方法分别用高剂量[28.4 g/(kg·d)]、中剂量[14.2 g/(kg·d)]与低剂量[7.1 g/(kg·d)]的鳖甲煎改良方及与鳖甲煎改良方高剂量相同剂量的鳖甲煎丸灌胃大鼠以制备含药血清。将等体积不同剂量的鳖甲煎改良方含药血清分别处理HSC-T6细胞,以等体积鳖甲煎丸含药血清处理的细胞为阳性对照组,生理盐水处理的细胞为空白对照组,正常大鼠血清处理的细胞为正常对照组。CCK-8检测不同处理组HSC-T6细胞的增殖情况,并绘制其增殖曲线;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测经不同处理的HSC-T6细胞的周期,Annexin V-PI染色法检测其凋亡;在mRNA及蛋白水平分别检测经不同处理的HSC-T6细胞的增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)基因及其编码蛋白的表达变化。结果 CCK-8检测结果显示,鳖甲煎改良方含药血清对HSC-T6细胞增殖具抑制作用,高剂量与中剂量组的增殖速度慢于正常对照组、阳性对照组和空白对照组(P<0.05,P<0.01),且该抑制作用呈剂量-效应关系。FCM检测证实,鳖甲煎改良方含药血清可将HSC-T6细胞阻滞于S期,能诱导HSC-T6细胞的凋亡,与正常对照组比较,其凋亡诱导率差异具有统计学意义(P<0.01)。mRNA与蛋白水平检测结果显示,与空白对照组和阳性对照组比较,高剂量组能在基因与蛋白水平显著下调HSC-T6细胞PCNA的表达。结论鳖甲煎改良方含药血清能明显抑制HSC-T6细胞的增殖,诱导HSC-T6细胞的凋亡,并能下调其PCNA基因及其编码蛋白的表达。 展开更多

关键词 鳖甲煎改良方 HSC-T6细胞 增殖 细胞周期 凋亡 增殖细胞核抗原

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青藤碱治疗类风湿关节炎药理作用研究进展 被引量：10

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作者 方勇飞 张莹 《医药导报》 CAS 2008年第5期557-559,共3页

类风湿关节炎是一种常见的严重危害人类身心健康的系统性自身免疫性疾病。青藤碱为治疗类风湿关节炎的有效药物,现已有正清风痛宁片、盐酸青藤碱注射液等制剂应用于临床。该文综述青藤碱在抗炎、免疫抑制、诱导细胞凋亡及抑制细胞增殖... 类风湿关节炎是一种常见的严重危害人类身心健康的系统性自身免疫性疾病。青藤碱为治疗类风湿关节炎的有效药物,现已有正清风痛宁片、盐酸青藤碱注射液等制剂应用于临床。该文综述青藤碱在抗炎、免疫抑制、诱导细胞凋亡及抑制细胞增殖方面的药理作用及临床研究进展。 展开更多

关键词 青藤碱 类风湿关节炎 药理作用 免疫系统

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沉默转化生长因子β1对肝星状细胞-T6生长及增殖的影响 被引量：1

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作者 张荣华 闫国和 +1 位作者 汪国建 粟永萍 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1315-1318,1324,共5页

目的观察沉默转化生长因子β1(TGFβ1)对肝星状细胞(HSC)-T6生长及增殖的影响。方法用具有高效感染力的TGFβ1 shRNA慢病毒液感染HSC-T6细胞,以未经感染或经空病毒感染的HSC-T6细胞作对照。倒置荧光显微镜下观察HSC-T6细胞绿色荧光蛋白(... 目的观察沉默转化生长因子β1(TGFβ1)对肝星状细胞(HSC)-T6生长及增殖的影响。方法用具有高效感染力的TGFβ1 shRNA慢病毒液感染HSC-T6细胞,以未经感染或经空病毒感染的HSC-T6细胞作对照。倒置荧光显微镜下观察HSC-T6细胞绿色荧光蛋白(GFP)的表达变化;CCK-8法检测TGFβ1 shRNA慢病毒对HSC-T6细胞生长及增殖的影响;RT-PCR和Western blotting分别检测HSC-T6细胞TGFβ1及增殖细胞核抗原(PCNA)基因及其编码蛋白的表达,并予以定量分析。结果经TGFβ1 shRNA慢病毒感染的HSCT6细胞显著表达GFP。CCK-8法检测结果显示:经TGFβ1 shRNA慢病毒感染的HSC-T6细胞的生长及增殖慢于对照细胞,培养48 h后差异有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR和Western blotting检测结果显示:TGFβ1shRNA慢病毒能有效沉默HSC-T6细胞TGFβ1,并下调其核抗原PCNA基因及其编码蛋白的表达,与对照细胞的差异有统计学意义(P<0.01)。结论沉默TGFβ1能明显抑制HSC-T6的生长及增殖,并下调其核抗原PCNA的表达。 展开更多

关键词 转化生长因子Β1 增殖细胞核抗原 肝星状细胞-T6 生长 增殖

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